FOSFATASA ALCALINA

*Objetivo: Determinar los valores de la fosfatasa alcalina en suero sanguneo.

*Fundamentos:
La fosfatasa alcalina desdobla al fenilfosfato de sodio en medio alcalino tamponado con
aminometil propanol (AMP). El fenol liberado se determina por reaccin con 4-
aminoantipirina y ferricianuro como agente oxidante. El color desarrollado es
directamente proporcional a la actividad enzimtica y se mide a 520 nm.
*Significancia clnica:
La fosfatasa alcalina (Ortofosfrico monoster fosfohidrolasa), es una enzima
ampliamente distribuida que hidroliza el enlace ster fosfrico entre un grupo fosfato y
un radical orgnico a pH bsico (pH ptimo entre 9 y 10) liberando fosfato inorgnico.
Est presente en rin, hgado, intestino y hueso.
La fosfatasa alcalina (ALP) es una enzima hidrolasa responsable de eliminar grupos de
fosfatos de varios tipos de molculas como nucletidos, protenas y alcaloides. El
proceso de eliminar el grupo fosftico se denomina des fosforilacin. Como sugiere su
nombre, las fosfatasas alcalinas son ms efectivas en un entorno alcalino. La fosfatasa
alcalina recibe el nombre de orto-fosfrico-monoster hidrolasa. Estas enzimas
proceden de la ruptura normal de las clulas sanguneas y de otros tejidos, muchas de
ellas no tienen un papel metablico en el plasma excepto las enzimas relacionadas con
la coagulacin y con el sistema del complemento. La fosfatasa alcalina es una hidrolasa
con muy poca especificidad de sustrato. Se encuentra presente en casi todos los tejidos
del cuerpo, especialmente, en epitelio intestinal, tbulos renales, hueso, hgado y
placenta. Su localizacin celular es la membrana. Los individuos de los grupos
sanguneos B y O secretores tienen la isoenzima intestinal aumentado en sus sueros.
Presenta en circulacin isoenzimas: tejido inespecfico (constituida por las formas
mltiples: heptica, sea, renal, glbulo blanco y otras), intestinal, placentaria. La
fraccin heptica es termoestable, en cambio, la fraccin que proviene del hueso,
sistema retculo endotelial y vesicular, es termolbil. Las isoenzimas se diferencian por
su estructura molecular, propiedades fsicoqumicas, antignicas y catalticas.
Aparte de estas formas moleculares, la fosfatasa alcalina puede presentar algunas
formas atpicas: como las macroenzimas: de migracin rpida, fraccin biliar (fraccin
heptica rpida o alfa rpida) y formas de migracin lenta (complejos moleculares
constituidos por la enzima y una molcula de IgG).La fosfatasa alcalina (ALP) tiene
identificadas por lo menos 9 isoenzimas. Cada una tiene varias propiedades de
estabilidad al calor, inhibicin qumica, y movilidad electrofortica. Entre ellas estn la
rpida (pre-heptica), la heptica, la ALP del hueso, placentaria, renal, intestinal y PA.
El aumento fisiolgico de los niveles plasmticos de fosfatasa alcalina se produce en
animales en fase de crecimiento (se est formando tejido seo) o en hembras gestantes
(fosfatasa alcalina de la placenta).
*Materiales:

Pipetas
Micropipetas
 Tubo de ensayo
Gradilla
*Reactivos:

Buffer: 4 aminoantipirina
NaFF: fenilfosfato de sodio
Reactivo color: ferricianuro de potasio.

Estndar: 200 ul/l

B S D
Sustrato 0.5ml 0.5ml 0.5ml
Pre incubar 37 C por 5 minutos o temperatura ambiente por 10 minutos
Suero - - 50ul
Estndar - 50ul -
Incubar 10 minutos a 37 C o temperatura ambiente por 20 minutos
Rx color 2.5ml 2.5ml 2.5ml
Lectura 520 nm

*Clculos:
Fosfatasa alcalina u/l= factor x D.O.(D)

Factor = 200
D.O.(S)

VALORES DE REFERENCIA
Adultos: 68-240 u/l
Nios: 100-400 ul/l

*Procedimiento:
-REACTIVOS:
-Muestra: 0.4ml de sangre

1-Agregamos 0.5ml de sustrato a un tubo de ensayo y lo dejamos pre-incubar por 10 minutos a

temperatura ambiente.

2-Agregamos 50 ul de suero sanguneo al tubo de ensayo, y lo dejamos incubar a temperatura

ambiente por 20 minutos.
 FACTOR REUMATOIDEO

OBJETIVO: DETERMINACION, DETECCION DE FACTOR REUMATOIDEO EN

SUERO

Procedimiento cualitativo. El proceso cuantitativo se realiza mediante

diluciones
El factor reumatoideo es un anticuerpo presente en infecciones crnicas
Prueba para la deteccin de artritis reumatoidea, osteoartritis, la gota
Los valores normales: 20 ul/L de sangre

PRUEBA DE LATEX
Reactivos
Rx latex: contiene las inmunoglobulinas
Control positivo: Rx para ltex
Control negativo: no reactivo para el ltex

FUNDAMENTO DEL MTODO

Los factores reumatoideos presentes en la muestra son capaces de aglutinarlas
partculas de latex recubiertas con gamma-globulina humana. La curvidez causada por
la aglutinacin de las partculas de ltex es proporcional a la concentracin de FR en la
muestra y puede ser medida espectrofotograficamente.
MATERIALES Y EQUIPOS
- Jeringa de 5 ml
- Guantes
- Alcohol
- Algodn
- Ligadura
- Tubo de ensayo
- Micropipeta
- Centrifuga
- Portaobjeto
- Cronometro
PROCEDIMIENTO

1. Con la ayuda de una jeringa de 21 mm extraer 3ml aprox. de sangre en el tubo

de centrfuga.
2. Centrifugar 3000 rpm por 5 min. La muestra se tomara del suero obtenido.
3. En un portaobjetos colocar tres gotas de suero sanguneo producto de la
centrifugacin y agregar los reactivos. Esperar 2 minutos para obtener los
resultados.

1 2 3
Control negativo X - -
Control positivo - X -
Rx latex - - X
 TEST DE EMBARAZO

- Deteccion de la hormona gonadotrofina corionica humana (HCG)

presente en mujeres gestantes
- Es una reaccin antgeno-anticuerpo
- En este test se encuentran presentes sustancias que contienen
HCG que reaccionan con la orina conduciendo a una reaccin
antgeno-anticuerpo (cuando la mujer se encuentra en un estado
de embarazo)

FUNDAMENTO DEL MTODO

la prueba es un inmunoensayo cromatogrfico rpido para la deteccin de hCG en
orina o suero. La membrana se encuentra recubierta con anticuerpos de captura
anti-hCG en la zona de prueba (T) y de cabra antiraton en la zona de control (C). si
el resultado es positivo se formar una banda coloreadacon la particula compleja
en la zona de prueba. La ausencia de una banda en la zona de prueba indica un
resultado negativo.
+ el procedimiento llevado a cabo, no necesariamente cumple el fundamento

EQUIPOS Y MATERIALES
- Recipiente para la recoleccin de orina
- Pipeta
- Material reactivo para el test de
embarazo
- Guantes
PROCEDIMIENTO
1. Se obtuvo una muestra de orina de una mujer
2. Se agreg una gota pequea al material reactivo del test
3. Se esper tres minutos para obtener los resultados

- Resultados negativos. Solo se muestra una banda

 CREATININA

La creatinina es un producto de desecho en la sangre. Viene de protena en su

dieta y la descomposicin normal de los msculos de su cuerpo. La creatinina se
elimina de la sangre por los riones y luego sale del cuerpo en la orina. Si tiene
enfermedad de los riones, el nivel de creatinina en la sangre aumenta.

SIGNIFICACION CLINICA

La creatinina, compuesto sumamente difusible, se elimina del organismo casi

exclusivamente por filtracin renal. Su determinacin en suero, as como la
depuracin de creatinina endgena constituyen parmetros importantes para el
diagnstico de diversas afecciones renales.

FUNDAMENTOS DEL METODO

La creatinina reacciona con el picrato alcalino (reaccin de Jaffe) produciendo

un cromgeno rojo. La velocidad de esta reaccin, bajo condiciones
controladas, es una medida de la concentracin de creatinina de la muestra
puesto que se comporta como una reaccin cintica de primer orden para la
creatinina. Por otra parte, se ha demostrado que los cromgenos no-creatinina
que interfieren en la mayor parte de las tcnicas convencionales, reaccionan
dentro de los 30 segundos de iniciada la reaccin. De manera que, entre los 30
segundos y los 5 minutos posteriores al inicio de la reaccin, el incremento de
color se debe exclusivamente a la creatinina.

REACTIVOS PROVISTOS

Reactivo A: solucin de cido pcrico 12,7 mmol/l y laurilsulfato

de sodio 8,4 mmol/l.

Reactivo B: solucin de borato 53 mmol/l e hidrxido de

sodio 970 mmol/l.

Standard*: solucin de creatinina 20 mg/l.

 B S D
Agua destilada 0.1ml - -
100 ul

Estndar - 0.1 ml -

Muestra - - 0.1 ml

Rx. T 1 ml 1 ml 1 ml

MEZCLAR 10 minutos a 37 C o 20 minutos a temperatura ambiente

Reactivo C 50 ul 50 ul 50 ul

MEZCLAR dejar 5 minutos a temperatura ambiente. LECTURA 510 nm

CALCULOS

B: 0.00 Creatinina (mg/dl) = D x F

S: 0.195 F= 20 mg/L = 20/ 0.195 = 102.56
D: 0.280 S

Creatinina (mg/L) = 0.280 x 102.56

= 28.72

VALORES NORMALES: 8 14 mg/L

MATERIAL REQUERIDO (no provisto)

- Espectrofotmetro capaz de leer a 500 10 nm.

- Micropipetas y pipetas para medir los volmenes indicados.

- Cubetas espectrofotomtricas.
 REACTIVOS

MUESTRA