Dra.

Mirtha Yarlequé Chocas

Laboratorio N°6

DETERMINACIÓN DE PROTEINAS TOTALES Y ALBÚMINAS

Competencias:
 Conoce y explica el fundamento del método Biuret en la determinación de proteínas
totales en suero.
 Determina y cuantifica los valores de proteínas totales
 Conoce el fundamento, la determinación y cuantificación de albúminas.

INTRODUCCIÓN:
Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente distribuidos
en el organismo. Actúan como elementos estructurales, de transporte, enzimas, hormonas,
anticuerpos, factores de coagulación, etc. Esta multiplicidad de funciones hace que las proteínas
resulten esenciales para la vida.
En el plasma, las proteínas contribuyen a mantener el volumen del fluido circulante,
transportan sustancias relativamente insolubles, actúan en la inactivación de compuestos tóxicos
y en la defensa contra agentes invasores.
Normalmente la proteína más abundante en el plasma es la albúmina. Una de sus
funciones más importantes es la de permitir el transporte de ácidos grasos, hormonas esteroides,
bilirrubina, catecolaminas, que en forma libre son insolubles en el medio acuoso. La
concentración de albúmina en plasma influye notablemente en el mantenimiento de la presión
ONCÓTICA lo que estaría relacionado con su peso molecular y su gran carga neta.
La concentración de proteína total es muy útil en el monitoreo de cambios que se
producen en ella como consecuencia de varias patologías. Niveles elevados se encuentran en
procesos de deshidratación, mieloma múltiple, nefropatías crónicas, y niveles bajos en algunas
patologías renales.
La albúmina es el mayor componente proteico del suero. Siendo sintetizada en el hígado
y con gran capacidad de cambios en su configuración. Entre sus funciones se distinguen la
regulación del líquido extracelular, como pool de aminoácidos, como proteína de transporte de
una variedad de sustancias tales como hormonas, lípidos, vitaminas, calcio, y otros metales. Su
disminución está asociada a procesos de sobre hidratación, pérdida de proteínas, disminución
en la síntesis, o aumento en el catabolismo o degradación. Su aumento está relacionado con
procesos de hemoconcentración, entre otros.
La albúmina es más indicativa de deficiencia crónica que de deficiencia a corto plazo.
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La relación A/G es útil en la evaluación de la enfermedad hepática y renal. Dado que el hígado
está implicado en la síntesis de albúmina, puede indicar enfermedad hepática. Si los riñones son
defectuosos, la proteína puede ser filtrada en la orina, dando lugar a (excesiva) pérdida de
albúmina.

La relación A / G se calcula utilizando la fórmula, Relación A/G= (Nivel de Albúmina)

/(Proteína Total - Albúmina). Dado que las globulinas constituyen el resto de la proteína total
que no es albúmina, la proporción es realmente el nivel de albúmina sobre el nivel de
globulinas.

Una razón normal es aquella en la que el resultado es mayor que 1. Un valor anormal que es
clínicamente significativo es si la relación es menor que 1, lo que indica que las proteínas
globulinas superan la proteína de la albúmina. Esto requeriría una evaluación médica adicional

FUNDAMENTOS:

A) DETERMINACIÓN DE PROTEINAS TOTALES:

El método utilizado, se basa en la reacción de Biuret, en el cual los enlaces peptídicos
de las proteínas reaccionan con el ión cúprico Cu⁺⁺, en medio alcalino, para dar un complejo
color azul-violeta con máximo de absorción a 540nm. El color formado se mide
colorimétricamente, cuya intensidad es proporcional a la concentración de proteínas totales en
la muestra.
REACTIVO:
Componentes del Reactivo:
Sulfato de cobre II 15 mM
Tartrato de sodio y potasio 70 mM
Ioduro de potasio 10 mM
Hidróxido de sodio 200mM
MUESTRA: Suero libre de hemólisis.

PROCEDIMIENTO:
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En tres tubos de prueba marcados B (Blanco), S (Standard) y MP (Muestra Problema),

Colocar:

TUBOS BLANCO STANDARD Muestra Problema

mL. St. Proteinas g/dl 6g/dL --- 0.1 mL ---
mL suero --- -- 0.1 mL
mL. . Reactivo Biuret 1 mL 1 mL 1 mL
mL. Volumen final 1 1.1 1.1
LECTURAS absorbancia 0.020 0.180 0.150
Corregir lecturas 0.180-0.020 0.150-0.020
Lecturas corregidas 0.160 0.130

Mezclar e incubar durante 10 minutos a 37° C

Leer las absorbancias a 540 nm en el espectrofotómetro llevado a cero con el blanco reactivo. El
color resultante es estable por a lo menos treinta minutos.

CALCULO DE LOS RESULTADOS

PROTEINAS TOTALES:

[ PT] g/dl = Ab.MP x Fc = 0.130x 37.5 = 4.875 g/dL

Fc = St. Proteínas g/dl = 6 g/dL = 37.5 6 g/dL………………….0.160

Abs. Standard 0.160 ? ………………………0.130
X= 6g/dLx 0.130= 4.875 g/dL
0.160

VALORES DE REFERENCIA

Se determinó el contenido de proteínas totales en sueros de personas sanas, de ambos sexos, con
alimentación mixta normal y edades entre 17 y 40 años. Se obtuvo el siguiente rango:
Proteínas totales: 6,0 a 8,0 g/dL
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DETERMINACIÓN DE ALBÚMINAS

FUNDAMENTO:

El Verde de Bromocresolftaleína, es un colorante indicador, que a pH 3,8 se encuentra de color

amarillento. La albúmina al estar en contacto con el reactivo se protoniza haciéndolo menos
ácido al medio, lo que causa el cambio de color indicador.

PROCEDIMIENTO:

BLANCO STANDAR MUESTRA

SUERO - - 0.1
ESTÁNDAR 3.1 g/dL - 0.1 ---
REACTIVO 1 mL 1.0 mL 1.0 mL
Lecturas 0.015 0.200 0.250
Corregir 0.200-0.015 0.250- 0.015
Lecturas corregidas 0.185 0.235

Mezclar e incubar por ....5.........a temperatura ambiente. Leer a 620 nm.

Calibrar a cero usando el tubo blanco correspondiente.

3.1 g/dL……………….0.185

¿ ……………….0.235

X= 3.1g/dLx 0.235 = 3,93 g/dL

0.185

H+ H+ H+ H+ H+ H+A- A- A- A- A-
H+ H+ H+ H+ H+ H+ A- A- A- A- A-

Proteínas total – Albúmina= Globulinas

5.2 - 3.93 = 1,27 g/dL

CÁLCULO
[S tan dard ]
Factor=
Abs . St

ALBÚMINA ( )= Abs. Muestra×Factor

g
dL

Proteínas Totales : 6 - 8 g/ dL
Valores normales Albúminas : 3,5 - 5,0 g/dL.
Globulinas : 2,5 - 3 g/dL
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Proteínas Totales = A+G 4.875= 3.93+G

4.875-3.93= G = 0.945 g/dL

La relación A/G debe ser superior a 1. Un valor menor que 1 es clínicamente significativo

Cuestionario
1. ¿Diga el fundamento de la determinación de proteínas totales y albúminas?

2. ¿Cuáles son los principales tipos de proteínas plasmáticas del ser humano?

-Albúminas
-Globulinas
-Fibrinógeno.2

3. ¿Cuál es la importancia de las proteínas plasmáticas del ser humano?

En el cuerpo humano las albúminas representan el 55% y contribuyen por ello
de forma importante a la presión coloidosmótica del plasma. Aparte del papel
osmótico su principal función es la de transportar, combinándose con ellas,
sustancias insolubles en agua, como bilirrubina, sales biliares y ácidos grasos.
Las globulinas representan el 38% y se encuentran en tres posibles formas:
alfa (α), beta (β) y gamma (γ). Cumplen funciones de transporte; α-globulinas y
β-globulinas específicas transportan sustancias tales como la hormona tiroidea,
el colesterol o el hierro (esta última se llama transferrina y es la más
abundante); coagulación (α-globulinas y β-globulinas); reguladoras: son α-
globulinas ciertas proteínas que se encuentran inactivas y que son precursoras
de, por ejemplo, hormonas; son activadas por señales específicas en función
de su necesidad; inmunitarias: las inmunoglobulinas (anticuerpos) son γ-
globulinas.2

4. ¿Qué tipos de proteínas constituyen las globulinas?

Las globulinas son un grupo de proteínas de la sangre, algunas producidas por
el hígado y otras por el sistema inmunitario. Ayudan a combatir las infecciones
y a transportar nutrientes. Hay cuatro tipos principales: alfa 1, alfa 2, beta y
gamma.3
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5. ¿Qué importancia tiene la determinación de proteínas totales y albúminas para un

nutricionista?

6. Evaluación de proteínas totales 6g/dL

Lectura B= 0.010 S= 0.300 M= 0.270 hallar la concentración de
proteína total e indicar si se encuentra entre los valores normales.

7. Evaluación de Albúminas: 3.1 g/dL

Lectura B= 0.020 S= 0.200 M= 0.190 hallar la concentración de
albúminas e indicar si se encuentra entre los valores normales.

REFERENCIAS:

2) Tomé C. Proteínas plasmáticas — Cuaderno de Cultura Científica

[Internet]. Cuaderno de Cultura Científica. 2017 [citado el 24 de mayo de
2023]. Disponible en: https://culturacientifica.com/2017/11/28/proteinas-plasmaticas/

3) Proteínas totales, cociente albúmina-globulina (A/G)

[Internet]. Labtestsonline.es. [citado el 24 de mayo de 2023]. Disponible en:
https://www.labtestsonline.es/tests/proteinas-totales-cociente-albumina-
globulina-ag