Quinta Unidad

REUNION DE
LABORATORI
PRACTICA N° 20
OV
DETERMINACION DE PROTEINAS
CUANTIFICACION DE PROTEINAS SERICAS TOTALES Y FRACCIONADAS

I. INTRODUCCION:
Las proteínas plasmáticas son importantes para el organismo porque realizan diversas funciones:
coagulación, excreción, conservación del equilibrio ácido básico, regulación del equilibrio hídrico,
defensa contra las infecciones, transporte, regulación del metabolismo, etc. El origen de las proteínas
plasmáticas es hepático con excepción de las globulinas gamma que se forman en las células
plasmáticas. Las proteínas plasmáticas por métodos químicos se clasifican en albúmina, globulina y
fibrinógeno. En el suero solo albúmina y globulina - Las fracciones globulínicas contienen varias
proteínas específicas: inmunoglobulinas, haptoglobina, la transferrina, ceruloplasmina,etc.; que se
pueden determinar por electroforesis, inmunodifusión o inmunoelectroforesis. La concentración sérica
de las proteínas totales es de 6.1 a 7.9 g/dl de las cuales albúmina: 3.5 a 4.8 g/dl y globulinas: 2.6 a 3.1
g/dl.

Las cifras de proteínas plasmáticas totales pueden aumentar (hiperproteinemia) con cociente A/G normal
en la hemoconcentración; con inversión de A/G por aumento de las globulinas: en el mieloma múltiple, en
la macroglobulinemia de Waldenström, en el kala-azar, en las colagenopatías, etc La disminución de
proteínas totales (hipoproteinemia) son generalmente asociadas con HIPOALBUMINEMIA que a su vez
están acompañadas con pequeños cambios en la globulinas. Los bajos niveles de albúmina pueden ser
debidos a: Incrementadas pérdidas de albúmina en la orina, disminución de la formación en el hígado
como en la cirrosis, insuficiente ingestión de proteína., en la gastroenteropatía exudativa con pérdidas
fecales de proteínas. Agammaglobulinemia y la analbuminemia son cuadros demasiado raros.

La presente práctica tiene por finalidad determinar las concentraciones séricas de proteínas totales y
fraccionadas en personas normales.

FUNDAMENTOS DEL METODO

Determinación de Proteínas Totales: Los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con el ión
cúprico, en medio alcalino, para dar un complejo color violeta con máximo de absorción a 540nm, cuya
intensidad es provisional a la concentración de proteínas totales en la muestra.

Determinación de Albúmina: La albúmina reacciona específicamente sin separación previa con la

forma aniónica de la tetrabromo Cresolsulfon Ftaleina (BCF), en presencia de un exceso de colorante, en
medio tamponado a pH 3,8. El aumento de absorbancia a 625 nm, respecto del Blanco del reactivo, es
proporcional a la cantidad de albúmina presente en la muestra.

II. MATERIALES Y REACTIVOS A UTILIZAR:

- Reactivo A: complejo EDTA/Cu 13 mmol/l en hidróxido de sodio 875 mmol/l y alquilil aril poliéter
(AAP).
- Reactivo B: solución de 3,3´,5,5´-tetrabromo cresolsulfon ftaleína (en polioxietilén lauril éter).
- Estándar (suero patrón): solución de albúmina y globulinas de origen bovino, con título conocido de
proteínas y albúmina. Consultar los valores asignados en el rótulo.
- Agua destilada
- Micropipetas.
- Tubos de ensayo.
- Gradillas.
- Baño maría.
- Espectrofotómetro.
- Suero.
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III. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES (Procedimiento)

Determinación de Proteínas Totales:

Armar el siguiente sistema, con tres tubos marcados B (Blanco), S (Standar) y D (Desconocido), colocar:

COMPONENTES BLANCO STANDAR DESCONOCID

O
Muestra (suero) ----- ----- 50 ul
Estándar ----- 50 ul -----
Agua Destilada 50 ul ----- -----
Reactivo A 3.5 ml 3.5 ml 3.5 ml
Mezclar con varilla. Incubar 15 minutos a 37°C. Leer en espectrofotómetro a 540 nm
llevando el cero con el blanco.

Cálculos:
Proteínas Totales (g/dl) = (D-B) x f
P . T g/dl
Donde: f=
S

Valores Referenciales:
- Proteínas Totales: 6.1 – 7.9 g/dl.

Determinación de Albúmina:
Armar el siguiente sistema, con tres tubos marcados B (Blanco), S (Standar) y D (Desconocido), colocar:

COMPONENTES BLANCO STANDAR DESCONOCID

O
Muestra (suero) ----- ----- 10 ul
Estándar ----- 10 ul -----
Reactivo B 3.5 ml 3.5 ml 3.5 ml
Mezclar con varilla. Mantener los tubos entre 15 y 28 °C durante 10 minutos. Leer en
espectrofotómetro a 625 nm llevando a cero con el blanco.

Cálculos:
Albúmina (g/dl) = (D-B) x f
Alb . g/dl
Donde: f=
S

Valores Referenciales:
- Albúmina: 3.5 – 4.8 g/dl.

IV. CUESTIONARIO:
1. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de las proteínas séricas totales y las fracciones de
albúmina y globulinas?.

2. ¿Qué importancia tiene determinar la relación albúmina/globulina, en clínica?

3. ¿En que se basa la determinación de las proteínas totales y fraccionadas en nuestro experimento?

4. ¿Qué importancia clínica tiene el diverso origen de las proteínas séricas?

5. ¿Qué presunciones diagnósticas de laboratorio plantearía en base a sus resultados obtenidos?

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DETERMINACION CUALITATIVA DE PROTEINAS EN ORINA

I. INTRODUCCION:
La orina normal contiene una pequeña cantidad de proteínas solubles (albúminas, algunas enzimas,
etc.); la cantidad es pequeña alcanzando máximo de 150 mg en orina de 24 horas, menos de 10 mg/dl.
Las proteínas son casi completamente absorbidas en los túbulos.

Cuando el glomérulo es injuriado por enfermedad, moléculas proteicas de variado tamaño incluyendo las
más largas, escapan en el filtrado de forma que los túbulos son incapaces de captar la gran cantidad de
proteínas y resulta una masiva proteinuria. Las proteínas de peso molecular relativamente bajo y de
pequeño tamaño pasan primero a través de los glomérulos injuriados, por ejemplo la proteína de Bence
Jones, hemoglobina, albúmina; luego las globulinas. El fibrinógeno es una molécula muy larga y escapa
solo en enfermedad renal severa.

La proteinuria puede ser renal o extrarremal. Son causas de proteinuria Renal: glomerulonefritis difusa,
glomerulonefritis focales proliferativas, síndrome nefrótico, nefropatía diabética, nerfropatía lúpica,
nefropatía tóxica, en la eclampsia, tuberculosis renal, riñón poliquístico etc . Extrarrenal: proteinuria
ortostática, gravídica, febril, mieloma múltiple. La proteinuria fisiológica (proteinuria ortóstatica) se
presenta después de ejercicios y de permanecer largo tiempo en posición de pie, sin que exista
evidencia de lesión renal. En el mieloma múltiple y macroglubinemia de Waldestrom, aparece la proteína
de Bence Jones. La proteína de Bence Jones está constituída por las cadenas ligeras de las
inmunoglobulina que constituye la proteína Monoclonal.

La presente práctica tiene por finalidad determinar la presencia de proteínas en la orina y de

cuantificarlas en caso que estén presentes en casos normales y en estados patológicos.

II. REACTIVOS A UTILIZAR.

- Acido tricloroacético, 12,5% (en agua destilada)

- Cloruro de sodio 0,85%.
- Standard de proteína: Pueden usarse suero claro normal de concentración conocido o un suero
control adquirido comercialmente. Se diluye con cloruro de sodio 0,85% a una concentración final de
25 mg/ml. Esta dilución debe ser preparada el mismo día.
- Ácido acético al 2%.

III. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES: Procedimiento

DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE LAS PROTEÍNAS EN ORINA:

Coagulación por el calor.

COMPONENTE (ml) TUBO

Orina previamente a filtrada 5,0
Someter a ebullición. Si aparece un precipitado o enturbamiento se puede deber a la presencia de
proteínas o fosfatos. Añadir:
Solución de ácido acético al 2% IV gotas
Si desaparece la turbidez, se trata de fosfatos que se han disuelto en medio ácido. Si la turbidez
desaparece o se ha hecho más intenso o se forma un precipitado, se trata de proteínas.

Anote los resultados

IV. CUESTIONARIO:

1. ¿Cómo diferencia usted un precipitado en un tubo de ensayo que no corresponde a proteínas en

orina?

2. Señale algunos tipos de proteínas anormales que pueden ser encontradas en la orina.

3. En qué consiste el método de Heavy para la determinación de proteínas

4. Señale algunas causas de proteinuria fisiológica y patológica.