Universidad Nacional

Autónoma de México
Facultad de Estudios Superiores
“Zaragoza”

· Química Farmacéutica Biológica ·

Laboratorio de Bioquímica Celular y de los Tejidos I.

“EXTRACCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE
LÍPIDOS EN YEMA DE HUEVO”

Profesor: Francisco Fernando Hernández Clemente

Grupo: 1401
Integrantes:
• Flores Cruz Jacqueline Paola
• Guerrero Martínez Rocío Jaqueline
• Ibarra Raudales Bryan
• Islas García Luis Enrique
Fecha de Experimentación: 03-Octubre-2022
Fecha de entrega: -Octubre-2022
 Equipo 14

Objetivos:
★ Analizar las propiedades de los lípidos.
★ Extraer los lípidos de la yema de huevo.
★ Cuantificar fosfatos de lípidos fosforilados y no fosforilados.
★ Analizar la importancia biológica de los lípidos presentes en la yema de
huevo.

·Diagramas de flujo·
Cromatografía de lípidos

·Resultados·
A) CUANTIFICACIÓN DE FÓSFORO: 1) Preparación del patrón: Se
pesaron .4394 g de fosfato monopotásico y se disolvieron en 1000
ml (solución stock). De ésta solución se tomó 1 ml y se aforó a 10 ml
(solución de trabajo)
 a) Calcula la concentración de la solución de trabajo en gramos
fosfato monopotásico/ml.

o .4394 g
=4.934 x 1 0−4 g /mL
1000 mL

Dilución 1:10

4.934 x 1 0−4 g /mL −5

=4.394 x 1 0
10

b) haciendo la relación molar entre el PM del fosfato monopotásico

y el peso atómico del fósforo, calcula los microgramos de fósforo/ml
de la solución de trabajo.

136 g →31 g de P

−5 −5 6
4.394 x 1 0 → x=1.001573 x 1 0 ( 10 μ g/ L)=10 μ g P/mL

De la solución de trabajo se tomaron alícuotas de 0 ml, 0.2 ml, 0.6

ml, 1 ml, 2 ml y 3 ml se aforó a 10 ml y se procesaron con el método
de Fiske y Subbarow para obtener las absorbancias mostradas en la
tabla calibrando con blanco de reactivos c) calcula los microgramos
de fósforo en estos tubos 1 al 5.

10 μ g de P
0.2 mL( )=2 μ g de P
1 mL

10 μ g de P
0.6 mL ( )=6 μ g de P
1 mL

10 μ g de P
1 mL( )=10 μ g de P
1mL

10 μ g de P
2 mL( )=20 μ g de P
1 mL
 10 μ g de P
3 mL ( )=30 μ g de P
1 mL

2) realiza la curva estándar con los datos del punto anterior y los
valores de absorbancia experimentales de tu equipo o en su defecto
con los de la tabla, recordando linealizarla (obtén r cuadrada), el
título completo (el método es el mismo del manual), unidades en X
y Y, qué punto corresponde a que tubo; TODOS LOS DATOS,
CÁLCULOS SIGUIENTES PARA LA MUESTRA PROBLEMA
DEBEN SER CON OTRO COLOR DIFERENTE

μ g de P Absorbancia

Blanco 0

2 0.21

6 0.72

10 0.95

20 0.107

30 0.208
La gráfica no es lineal, se utilizará los datos de curva proporcionados
por el profesor:

μ g de P Absorbancia

Blanco 0

2 0.021

6 0.062

10 0.o9

20 0.174

30 0.273
3) En la curva anterior, interpola los datos de absorbancia de las
muestras problema (fosforilados y no fosforilados), y señala en "X"
el valor numérico obtenido para dichas muestras problema; 4) Haz
las correcciones necesarias para obtener los microgramos de P en
los LF y LNF así como el P total . Para ello considera lo siguiente:
Del líquido resultante de la digestión de lípidos (LF y LNF) se tomó
respectivamente 1 ml de LF y de LNF y se aforaron a 100 ml. De
éstos se tomó 1 ml, se aforó a 10 ml y se le agregaron los reactivos
del método de Fiske y Subbarow para obtener su absorbancia
calibrando con blanco de papel 5) Si de lípidos fosforilados la
muestra que se pesó fue de "x" mg (lo que pesaron=100%), calcula el
% de P que representa el valor obtenido de P en el inciso anterior.

Tipo de lípidos Absorbancia

Lípidos fosforilados 0.073

 Lípidos no fosforilados 0.016
Absorbancia=0.0089(μ g P)+0.0025

Absorbancia−0.0025
μ g P=
0.0089

Lípidos fosforilados

0.073−0.0025
μ g P= =7.9213 μ de P
0.0089

Lípidos no fosforilados

0.016−0.0025
μ g P= =1.5168 μ g de P
0.0089

μ g de P totales=7.9213+1.5168=9.4381 μ de P

9.4381 μ g (50 mL)=471.905 μ g de P

LF 0.012 g 12000 μ g →100 %

471.905 μ g → x x=3.93254 % de P

·Discusión·
Lo primero que se llevó a cabo fue la extracción de lípidos en la yema de huevo,
primero al poner el material biológico en una disolución 2:1 de cloroformo
metanol para separarlos de la materia orgánica que también se encuentra en
conjunto como lo son proteínas (las cuales fueron muy visibles en la fase pues
se encontraban precipitadas), minerales, carbohidratos y vitaminas, esto es
posible gracias a su naturaleza hidrofóbica que permite su extracción por
solventes orgánicos no polares. En segundo lugar se filtró y se llevó a cabo un
lavado con NaCl y se separó con un embudo de decantación para seguir
quitando los compuestos polares. En tercer lugar se añadió Sulfato de sodio
(Na2SO4) como agente desecante y un antioxidante (hidroquinona) ya que los
lípidos tienden a oxidarse con gran facilidad, para posteriormente poder
evaporar el cloroformo [1] [2][3].
El paso que nos permitió poder separar los lípidos fosforilados (LF) de los no
fosforilados (LNF) fue el añadir 15 mL de acetona a los lípidos extraídos pues
los no fosforilados quedaban en la solución cetónica y los fosforilados
precipitaron, se realizó una filtración para poder separarlos y se guardaron para
la siguiente sesión. En el caso de los lípidos fosforilados, los más comunes en la
yema de huevo es la fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol y
la esfingomielina [3]
Antes de la cuantificación de fósforo se lleva a cabo la digestión de Kjeldahl ya
que este al igual que se encuentra unido a materia orgánica por lo cual esta se
tiene que oxidar, por ello se utiliza ácido sulfúrico (H 2SO4) con H2O2 que
cataliza la reacción y carbonizan los compuestos orgánicos produciendo CO 2,
CO, SO2, H2O y H2PO74-, estos últimos iones fosfato sirven para la
cuantificación de fósforo [3].
La cuantificación de fósforo se llevó a cabo por el método de Fiske &
Subarrow, después de la digestión se añadió el reactivo 1 que contiene
molibdato de amonio en medio ácido, donde los iones fosfato reaccionan con el
molibdato formando el complejo fosfomolibdato de amonio que en presencia de
un agente reductor (en este caso ácido ascórbico) produce un complejo
heteropolimetrico de color azul de molibdeno, cuya absorbancia se mide a 615
nm, su intensidad de color depende de la presencia de fosforo. [1][2]
Para poder sacar la cantidad de microgramos de fósforo obtenidos, se realizó
una curva estándar utilizando una solución estándar que tenía 0.4394 g de
potasio monopotásico y una solución stock, (ambas diluciones del potasio
monopotásico). Posteriormente, se tomaron 5 alícuotas (0.2,0.6,1.0 y 2.0) con
volúmenes diferentes y se aforaron a 10 mL, se agregaron los reactivos y se
midió la absorbancia a 615. Lamentablemente al graficar nuestra curva, nos
dimos cuenta que las absorbancias reportadas hacían que nuestra gráfica no
fuera ni cercana a una línea recta, por lo cual decidimos ocupar los datos de la
curva proporcionados por el Maestro en el classroom, y al interpolar también
nos dimos cuenta que los valores de absorbancia de LF y LNF hacían que la
cantidad de fósforo era muy pequeña, ya que obtuvimos un 3.9325% de fósforo
en los lípidos cuando tomamos 10 mg de los lípidos fosforilados (los cuales
representan un 100%). Las razones anteriores nos dicen que pudimos haber
cometido errores al realizar la curva estándar como aforar, o también puede
haber sido el espectrofotómetro utilizado, el cual era ya un tanto viejo.
Un paso que nos llevamos a cabo pero que sirve para poder determinar el grado
de pureza en lípidos y que nos permite poder identificar a los lípidos
fosforilados incluso entre sí mismos es la cromatografía en capa fina que es una
técnica de separación de mezclas que se basa en dos fases, la fase móvil
(eluyente) y la fase estacionaria (placa de sílica gel) que va separando la
sustancia según la polaridad de sus componentes a medida que avanza el
eluyente (del más polar al menos polar). Se utiliza yodo para revelar los lípidos
con insaturaciones, ninhidrina para lípidos con grupos amino, el bismuto para
revelar lípidos que contienen colina y el molibdato de sodio para lípidos
fosforilados en general. [2][4]

·Referencias·
1. Hernández, F. (2022). Antecedentes académicos lípidos (pdf). Presentado
en México. Disponible en:
https://classroom.google.com/u/0/w/NTUxMzczNzQ1MTRa/t/all
2. Hernández, F. (2022). Antecedentes académicos lípidos 2 (pdf) .
Presentado en México. Disponible en:
https://classroom.google.com/u/0/w/NTUxMzczNzQ1MTRa/t/all
3. Hernández, F. (2022). lípidos (pdf). Presentado en México. Disponible en:
https://classroom.google.com/u/0/w/NTUxMzczNzQ1MTRa/t/all
4. Hernández, F. (2022). Antecedentes académicos lípidos 3 (pdf).
Presentado en México. Disponible en:
https://classroom.google.com/u/0/w/NTUxMzczNzQ1MTRa/t/all