PRACTICA Nº8

DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES Y FRACCIONADAS

INTRODUCCION

El examen de proteína total mide la cantidad total de dos clases de proteínas encontradas
en la porción líquida de la sangre: albúmina y globulina.

Las proteínas son partes importantes de todas las células y tejidos. La albúmina ayuda a
impedir que se escape líquido fuera de los vasos sanguíneos. Las globulinas son una parte
importante del sistema inmunitario.

OBJETIVOS:

 Determinar la concentración sanguínea de proteínas totales.

 Determinar concentración sanguínea de albuminas.

 Estimar concentración sanguínea de globulinas.

1. PROTEINAS TOTALES:

1.1 SIGNIFICANCIA CLINICA:

PROTEINAS TOTALES = ALBUMINA + GLOBULINAS

PT : hiperproteinemia

Albumina : hiperalbuminemia
Sin significado clínico solo deshidratación.

Globulinas: proteína C reactiva (se multiplica en inflamaciones)

Globulinas α (alfa)
ß (beta)
γ (ganma) inmunoglobulinas (igA , IgM, IgG, etc)

Proteína más importante : albumina (48%), todas las demás (52%)

-hay más de 1000 proteínas en la sangre

 PT : hipoproteinemia

Desnutrición, no hay consumo adecuado de insumos.

Insumos básicos: aminoácidos (se originan de la dieta)

Albuminas: hipoalbuminemia

Problemas hepáticos en la síntesis de proteínas

Mala absorción en intestino delgado
Enfermedades parasitarias (edema subcutáneo)(hipoproteinemia)

Proteínas plasmáticas forman un tapiz para que no se salga el plasma, cuando los niveles bajan se
producen huequitos por donde se sale. (edema subcutáneo)

Globulinas : hipoglobulinemia

Inmunodeficiencias ( gamnapatías)

Albuminuria y proteinuria (perdida de proteínas) (fallas renales)

1.2 FUNDAMENTOS DEL METODO:

 Refractometría
 Electroforesis Enlace peptídico: une grupo
carboxilo aminoácido con la
parte inicial del grupo amino
(une aminoácidos)
  Método de Kjeldahl -> N x 6.25 = proteína cruda
 Método de Biuret (sulfato de cobre: rompe enlaces peptídicos para cuantificar
proteínas)
Forma un compuesto colorado : azul violeta)

1.3 REACTIVOS:

 Reactivo de Biuret ( 24º a 25ºC)

1.4 MUESTRA:

 Suero libre de hemolisis (tubo rojo o amarillo)

 No usar plasma, muestra valores elevados por la presencia de fibrinógeno.

BIOQUIMICA SANGUINEA (ROJO, AMARILLO)

HEMATOLOGIA (cualquiera con EDTA)

1.5 MATERIALES:

 Muestra (libre de hemólisis)

 Micropipetas de 10 y 1000 ul

 Puntas de micropipetas (azules 1000 ul , amarilas 50 ul, blancas hasta 10 ul)

 Tubos de ensayo de 13 x 100 ml

 Cronómetro

 Gradillas

1.6 EQUIPOS:
  Centrifuga

 Baño maría termorregulado

 Fotocolorímetro (con cubetas termoestables 37ºc)

(que tenga un filtro de lectura para leer absorbancia a 540nm (longitud de onda)

Rango : 520 – 560 nm

1.7 TECNICA:

 Llevar el reactivo a la temperatura (el equipo ya lo realiza).

 Colocar los reactivos en las muestra como se muestra a continuación:

Tubo Blanco Tubo calibrador Tubo muestra

Muestra (ml) - - 0,01 m. =10 ul

Calibrador o estándar - 0.01 ml -
Reactivo 1 ml 1 ml 1 ml

 Mezclar e incubar por 10 min a 37ºC en baño maría o por 20 min a temperatura
ambiente (>20ºC)

 Color resultante estable por 30 min.

1.8 CALCULOS:

Factor = concentración de calibración

PT (gr/dl) = factor x absorbancia muestra
Absorbancia calibrador
  Concentración del calibrador:

6 gr/dl

 Linealidad: valor máximo hasta que la muestra es lineal

15 gr/Dl

 Limite detección: mínimo valor que puede detectar

0.5 gr/dl

 Sensibilidad

1 gr/dl

1.9 INTERFERENCIAS:

 Hemolisis

 Bilirrubina > 20 gr/dl

 Lipemia
1.10 VALORES DE REFERENCIA:

Especie PT Especie PT

5.2 – 7.6 gr/dl 7 - 9 gr /dl

 5.5 – 7.9 gr/dl

6-8 gr/dl

 
2. ALBUMINAS:

2.1 SIGNIFICANCIA CLINICA:

Albumina : hiperalbuminemia
Sin significado clínico solo deshidratación.

Albuminas: hipoalbuminemia

Problemas hepáticos en la síntesis de proteínas

Mala absorción en intestino delgado
Enfermedades parasitarias (edema subcutáneo)(hipoproteinemia)

2.2 FUNDAMENTO:

 Técnica del RIA (radio inmunoanalisis)

 Pruebas de ELISA

 Electroforesis

Colorante : verde de bromo crisol

2.3 REACTIVO:

 Reactivo BCG ( 4 – 25ºC) (bromo crisol green)

2.4 MUESTRA:

 Suero o plasma

2.5 MATERIALES

 Muestra (libre de hemólisis)

 Micropipetas de 10 y 1000 ul
  Puntas de micropipetas (azules 1000 ul , amarilas 50 ul, blancas hasta 10 ul)

 Tubos de ensayo de 13 x 100 ml

 Cronómetro

 Gradillas

2.6 EQUIPOS:

 Centrifuga

 Baño maría termorregulado

 Fotocolorímetro (con cubetas termoestables 37ºc)

(que tenga un filtro de lectura para leer absorbancia a 620nm (longitud de onda)

Rango : 570 - 640 nm

2.7 TECNICA:

 Llevar el reactivo a la temperatura (el equipo ya lo realiza).

 Colocar los reactivos en las muestra como se muestra a continuación:

Tubo Blanco Tubo calibrador Tubo muestra

Muestra (ml) - - 0,01 m. =10 ul

Calibrador o estándar - 0.01 ml -
Reactivo 1 ml 1 ml 1 ml
  Mezclar e incubar 3 min a temperatura ambiente

2.8 CALCULOS:

Factor = concentración de calibración

Albumina (gr/dl) = factor x absorbancia muestra
Absorbancia calibrador

 Concentración del calibrador:

3 gr/dl

 Linealidad: valor máximo hasta que la muestra es

lineal

8gr/dl

 Limite detección: mínimo valor que puede detectar

1 gr/dl

 Sensibilidad

1 mg/dl

2.9 INTERFERENCIAS:

 Hemoglobina > 0.25 (hemolisis)

 Bilirrubina > 2.5 gr/dl

 Lipemia >750 mg/dl

1.10 VALORES DE REFERENCIA:

Especie Albumina Especie Albumina

2.3 – 4.5 gr/dl 3 – 5 gr /dl

 2.4 - 4 gr/dl

3.5 - 5 gr/dl

RESULTADOS FINALES:

MUESTRA PT refractómetro PT ALBUMINA GLOBULINA

1 8,6 7,4 5,3 2,1
2 8,7 7,48 4,38 3,1
3 8,2 6,92 4,68 2,24