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GUIA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

PRÁCTICA N° 10: PERFIL HEPATICO: SÍNTESIS

Integrantes:
Sección : …………………………………………………………………………………
Docente : Mg. Beatriz Rafael Peña …………………………………………………………………………………
Fecha : Duración: 90 min …………………………………………………………………………………
Tipo de práctica: Individual ( ) Grupal ( ) …………………………………………………………………………………

1. PROPÓSITO:
Determinación de proteínas totales en suero por el método colorimétrico.
Conocer los valores normales de proteínas totales, albúminas, globulinas.

2. SIGNIFICACION CLINICA

Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares, ampliamente distribuidos

en el organismo, esenciales para la vida. Actúan como elementos estructurales y de
transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de
coagulación, etc.

En el plasma, las proteínas contribuyen a mantener el volumen del fluido circulante,

transportan sustancias relativamente insolubles y actúan en la inactivación de
compuestos tóxicos y en la defensa contra agentes invasores.

La determinación de proteínas totales es útil para el monitoreo de cambios

ocasionados por diversos estados de enfermedad. En condiciones patológicas como
pérdidas renales, desnutrición, infecciones prolongadas, etc., suelen presentarse
hipoproteinemias, mientras que en otras como mieloma múltiple, endocarditis
bacteriana y hemoconcentración de diversos orígenes, (ej.: deshidratación) se
observan hipoproteinemias.

3. FUNDAMENTOS DEL METODO

Los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con el ión cúprico en medio
alcalino, para dar un complejo color violeta con máximo de absorción a 540 nm, cuya
intensidad es proporcional a la concentración de proteínas totales en la muestra.

4. CONCEPTOS BÁSICOS:

PROTEINAS EN LA FUNCIÓN HEPATICA:

Las proteínas son el 50-70% del peso seco de la célula, se encuentran en todos los líquidos
corporales y son responsables de las secreciones y excreciones celulares. La mayoría de proteínas
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se sintetizan en el hígado, excepto las inmunoglobulinas que son producidas en los linfocitos B y
luego se transforman en células plasmáticas listas para producir muchos anticuerpos.

El hígado realiza las siguientes funciones:

Las pruebas para el hígado se hacen en relación a:

➢ SINTESIS: Medición del total de las proteínas en una muestra de suero.

Proteínas totales: 6-8 g/dL
Albúmina: 3,5 -5,5 g/dL
Globulinas: 2,6 – 3,1 g/dL

5. MATERIALES:

CANTIDAD EQUIPO
01 ESPECTOFOTÓMETRO MANUAL O AUTOMÁTICO
01 FOTOCOLORÍMETRO
01 BAÑO DE AGUA 37°C

CANTIDAD MATERIALES CAPACIDAD

01 MICROPIPETA 100 uL
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01 PIPETA 5 mL
02 CUBETAS ESPECTROFOTOMÉTRICAS
01 GRADILLA
02 TUBOS DE ENSAYO 13 X 75 mm
06 PUNTERAS
01 VARILLA

6. NOTAS DE SEGURIDAD:
• Utilizar los materiales de laboratorio con mucho cuidado.

7. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

PREPARACION DEL REACTIVO DE TRABAJO

El color de la reacción es estable durante 12 horas por lo que la absorbancia debe ser leída
dentro de ese lapso.

MUESTRA: SUERO
a) Recolección: debe obtenerse suero libre de hemólisis.
b) Aditivos: no se requieren.
c) Sustancias interferentes conocidas: no se observa interferencia por bilirrubina hasta 100 mg/l,
ni hemólisis ligera y en ningún caso se presenta turbiedad por quilomicrones. Referirse a la
bibliografía de Young para los efectos de las drogas en el presente método.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: si no se procesa inmediatamente el suero
puede conservarse hasta 3 días en refrigerador (2-10oC) o una semana en congelador.

a. TECNICA MANUAL:
En tres tubos marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), colocar:

BLANCO STANDAR DESCONOCIDO

1er Tubo 2do Tubo 3er Tubo
CALIBRADOR/SUERO - 20 uL -
PATRÓN
MUESTRA - - 20 uL
REACTIVO A 2.0 mL 2.0 mL 2.0 mL

Mezclar con varilla. Incubar durante 15 minutos a 37oC. Leer en espectrofotómetro a 540
nm o en fotocolorímetro con filtro verde (520-560 nm) llevando a cero con el Blanco de
Reactivo.

VALORES DE REFERENCIA:
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8. CÁLCULO DE RESULTADOS:

• PROTEÍNAS TOTALES:

PT =D x f donde f = [S] [S]= 7g/dL

As

PT = Am x [S]
As

• ALBÚMINA:

Alb = Am x [S] g/dL [S] = 5 g/dL

As

• La relación entre albúmina y globulinas:

Alb / Glo = Alb

PT – Alb

9. Determinar los valores para los siguientes pacientes y analizar los resultados en función de los
valores normales: (resultados, interpretación y diagnóstico)

PROTEÍNAS PACIENTE 1 PACIENTE 2

Proteínas totales 11,75 g/dL As= 0,523 Am= 0,445

Albúminas 55,2% * As= 0.959 Am= 0,577
Globulinas 8,85 g/dL 2,1 g/dL
Relación A/G 0,328 g/dL

* Alb = % x 5 g/dL * PT = % x 7 g/dL

100 100

BIBLIOGRAFÍA
- Gasbarro, L.; Bandinelli R. & Tomassini, G. - Clin. Chim. Acta 36/1:275 (1972).
- Strickland, R.D.; Freeman, M.L. & Gurule E.T. - Anal. Chem. 33:545 (1961).
- Pastewka, J. W. & Ness, A.T. - Clin. Chim. Acta 12:523 (1965).
- Peters, T. Jr. - Clin. Chem. 14:1147 (1968).
- Henry, R., Sobel, C. & Berkman, S. - Anal. Chem. 29/10:1491 (1957).
- Kachmar, J.F. - Fundamentals of Clinical Chemistry - Tietz, Saunders, pág. 177 (1970).
- Rojkín, M.L.; Olguín de Mariani, M.C.; Drappo, G.A. y Sosa, C.F. - Bioq. del Atlántico VI/63:
1931 (1974).
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests", AACC Press, 4th ed., 2001.