FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y

ZOOTECNIA

INFORME 03: Espectrofotometría

INTEGRANTES:

➢ Calle Garcia, Diego Enrique - 100110195@cientifica.edu.pe

➢ Chambi Mamani, Cristhian Alfredo - 100110482@cientifica.edu.pe

➢ Chambi Mamani, Elisban Abel - 100110481@cientifica.edu.pe

➢ Sernaque Malaga, Ana Belen - 100086294@cientifica.edu.pe

➢ Suni Ruiz, Clara Rosa - 100103985@cientifica.edu.pe

➢ Trigoso Chirinos, Sol Alessandra - 100080473@cientifica.edu.pe

N° MESA:

FECHA:

18/09/22

2022
 INTRODUCCIÓN

El estudio a nivel bioquímico de cualquier biomolécula requiere la utilización de técnicas

analíticas que permitan su determinación cualitativa y cuantitativa, así como su
caracterización físico-química y biológica. Uno de los métodos más sencillos, accesibles,
útiles y utilizados es la espectroscopía, en general, y la espectroscopía ultravioleta-visible, en
particular. Se pueden identificar y cuantificar biomoléculas en solución y en muestras
biológicas, con el empleo de reactivos específicos que reaccionan con el compuesto a analizar
y forman un producto coloreado que permite detectarlo en muestras complejas.

El fundamento de la espectroscopía se debe a la capacidad de las moléculas para absorber

radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UV visible. Las longitudes de onda
de las radiaciones que una molécula puede absorber y la eficiencia con la que se absorben
dependen de la estructura atómica y de las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza
iónica, constante dieléctrica), por lo que dicha técnica constituye un valioso instrumento para
la determinación y caracterización de biomoléculas.

Por otro lado, la medición de absorbancia de la luz por las moléculas se realiza en unos
aparatos llamados espectrofotómetros. Aunque pueden variar en diseño, en especial con la
incorporación de ordenadores para el análisis de datos, todos los espectrofotómetros constan,
según se indica en la figura, de:
1. Una fuente de energía radiante: lámpara
de deuterio y tungsteno.
2. Un monocromador para la selección de
radiaciones de una determinada longitud de
onda: filtros, prismas, redes de difracción.
3. Un compartimento donde se aloja un
recipiente transparente (cubetas o tubos) que
contenga la muestra Pueden ser de vidrio,
cuarzo o plástico transparente. Para medir en
UV se deben usar las de cuarzo o sílice
fundido, porque el vidrio no transmite la
radiación UV.
4. Un detector de luz y un amplificador
convertidor de las señales luminosas en
señales eléctricas.
5. Un registrador o sistema de lectura de
datos.
 OBJETIVOS

- Conocer el uso y aplicación del espectrofotómetro.

- Determinar una curva de absorbancia, usando la solución de azul de metileno.
- Conocer la ley de Lambert-Beer.
- Determinar la concentración de una muestra

III. MATERIALES Y MÉTODOS

- 01 frasco azul de metileno 1 mg/dl

- 01 agua destilada
- 01 espectrofotómetro

● 01 gradilla
● 05 tubos de ensayo 13x100 mm
● 01 piseta con agua destilada
● 02 pipeta graduada 10 ml
● 01 solución de azul de metileno 1 mg/dl frasco 100 ml
● 01 espectrofotómetro
● 01 micropipeta 100 - 1000μl
● 12 cubetas para espectrofotómetro
● 12 puntas descartables

RESULTADOS
I) Realizar la curva de calibración, con los siguientes datos:

ABSORBANCIA CONCENTRACIÓN

0,126 0.1 mg/dl

0,252 0.2 mg/dl

0,530 0.4 mg/dl

0,798 0.6 mg/dl

1 ,088 0.8 mg/dl

Cálculo del factor de calibración promedio:

Fc=concentración del estándar/Absorbancia

Fc1: 0.1/0.126 = 0.793 Fc2: 0.2/0.252=0.793

Fc3:0.4/0.530=0.754 Fc4:0.6/0.798=0.751

Fc5:0.8/1.088=0.735

Fc= FC1+FC2+FC3+FC4+FC5/Nro de Fc

Fc=0.793+0.793+0.754+0.751+0.735/5

Fc=0.7652
DISCUSIONES:

La teoría de ley de Lambert dice que mientras un objeto atrae más luz, la distancia recorrida
de esta se acorta, a más color más concentración, sin importar el número de muestras para
calibrar que nos den. La cantidad de longitudes que nos den a mayor concentración es igual a
mayor absorbancia. Según lo estudiado y analizado a través de este informe, para determinar
la concentración de sustancias utilizamos el factor de calibración. Es decir, la relación
matemática entre una sustancia de valor o concentración conocida y que se utiliza para
determinar la concentración de otras desconocidas. Para ello, se trabaja con una curva de
calibración, que se define como la representación gráfica de un signo que se mide en función
de la concentración de un analito.

Al concluir el informe, los resultados dieron positivos, ya que se llegó a los objetivos que
planteamos, debido a que la curva de calibración junto con los puntos que son la
concentración y absorbancia, son proporcionales entre sí.

CONCLUSIONES

1. La utilización del espectrofotómetro se fundamenta en la medición de la energía

según su longitud de onda o de frecuencia; nos ayuda para la determinación de
estructuras moleculares.
2. La espectrofotometría nos permite determinar la cantidad de concentración en
una solución de algún compuesto utilizando las fórmulas ya mencionadas, en palabras
simples la espectrometría declara la cantidad de luz absorbida por un cuerpo
dependiendo de la concentración en la solución.
3. La absorbancia es la capacidad de algunos compuestos para absorber la radiación
electromagnética, por lo tanto dependiendo a su la longitud a la cual se aplique un
rayo, puede alcanzar un punto máximo de absorción.
4. Se llegó a determinar la curva de calibración usando la solución azul de metileno.
5. Finalmente nos dimos cuenta que el equipo con el que trabajamos cuenta con una
adecuada exactitud y precisión, así pudiendo alcanzar las mediciones correctas.
REFERENCIA:

1. Garcia, Roberto Danel. “Instrumentos que revolucionaron la química: la historia del

espectrofotómetro.” 2018,pp. 79-82,
https://ri.conicet.gov.ar/bitstream/handle/11336/87008/CONICET_Digital_Nro.14279
992-2fa1-48b5-93d6-7674ea150cf9_A.pdf?sequence=2&isAllowed=y
2. Espectrofometría: Espectros de absorción y cuantificación colorimétrica de
biomoléculas- NA Díaz
www.laboratorioseyco.com/portfolio/ensayos-de-espectrofotometria
3. Arenas, I., & Lopez, J. (2004). ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN.
Morelia
4. -https://www.xrite.com/es/learning-color-education/other-resources/what-is-
aspectrophotometer
5. Murray, R., Bender, D., & Rodwell, V. (2013). HARPER BIOQUÍMICA
ILUSTRADA(Spanish Edition) (29th ed.). McGraw-Hill Interamericana de España
S.L.
6. Espectrometría. (2011). Equipos y laboratorio de Colombia. Recuperado el 20 de
Setiembre del 2022 de:
https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articulo-ampliado/espectrofotometria