UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR

FACULTDAD MULTIDISCIPLINARIA DE OCCIDENTE

DEPARTAMENTO DE QUIMICA

LABORATORIO No 1:
CARACTERISTICAS DE OPERACIN DEL
SPECTRONIC 20

GRUPO DE LABORATORIO #1

INTEGRANTES: ECHEVERRIA MATA, MANOLO ENRIQUE

MENDOZA AREVALO, LUIS EDUARDO
MERINO TORRES, ALEXANDRA ELIZANETH
ROBLES SOLIS, MARIA DEL ROCIO

DOCENTE ENCARGADO: MEd. MIGUEL ANGEL CRUZ.

FECHA: MIERCOLES 11 DE MARZO DEL 2015

OBJETIVO.
Introducir los principios fundamentales de la espectrofotometra y conocer las
caractersticas de operacin de un espectrofotmetro.

INTRODUCCION.
En el presente reporte de laboratorio se comprender el uso y aplicaciones del
Spectronic 20 con el fin de obtener las respectivas curvas espectrometricas con
los datos observados en el espectrofotmetro.
Se comprobar el cambio de color entre el rango de luz UV/visible e infrarrojo.
Al momento de determinar la absorbancia de la solucin de Cr(NO 3)3, primero se
har la prueba en un blanco (agua destilada) a cada longitud de onda para
eliminar interferencia del solvente a la hora de obtener resultados.

TEORA.
La espectrometra de absorcin se refiere a una variedad de tcnicas que
emplean la interaccin de la radiacin electromagntica con la materia. En la
espectrometra de absorcin, se compara la intensidad de un haz de luz medida
antes y despus de la interaccin con una muestra. Las palabras transmisin y
remisin se refieren a la direccin de viaje de los haces de luz medidos antes y
despus de la absorcin. Las descripciones experimentales por lo general asumen
que hay una nica direccin de incidencia de la luz sobre la muestra, y que un
plano perpendicular a esta direccin pasa por la muestra. En la transmisin, la luz
es dispersada desde la muestra hacia un detector en el lado opuesto de la
muestra. En la remisin, la luz es dispersada desde la muestra hacia un detector
en el mismo lado de la muestra. La radiacin remitida puede estar formada por
dos clases de radiacin: reflexin especular (cuando el ngulo de reflexin es igual
al ngulo del frecuencia) y reflexin difusa (en todos los dems ngulos).
Otro descriptor asociado con la espectrometra de absorcin es la variedad de

longitudes de onda de radiacin que se usa en el haz de luz incidente. Por

ejemplo, se habla de espectrometra infrarroja o de microondas, que son a su
vez ejemplos de espectrometra de absorcin. Por otra parte, tambin se
encuentran referencias a otros rangos de longitud de onda, como la
espectrometra de rayos X, que por lo general denotan una espectrometra de
emisin. Este artculo trata principalmente de la espectrometra ultravioletavisible.
La espectrometra UV-visible se refiere a tcnicas donde se mide cunta luz de
una longitud de onda particular (color) es absorbida por una muestra. Ya que el
color a menudo puede correlacionarse con la presencia y/o la estructura de una
sustancia qumica particular, y ya que la absorbancia es una medida fcil y barata
de hacer, la espectrometra de absorbancia se usa ampliamente en clculos
cualitativos, cuantitativos y estructurales. Por ejemplo, el ADN absorbe luz en el
rango ultravioleta (por eso la luz del sol es peligrosa), y por tanto la cantidad de
ADN en una muestra puede ser determinarse midiendo la absorbancia de la luz
ultravioleta.
La relacin entre el color visible y el color de absorbancia es complicada; una
muestra que parece roja no absorbe en el rojo, sino que absorbe en otras
longitudes de onda (colores) de modo que la luz que pasa por la muestra se
enriquece en rojo.
La palabra "color" se usa para indicar que la espectrometra de absorbancia no
slo trata con la luz en rango visible (fotones con una longitud de onda de
aproximadamente 400 a 700 nanmetros), sino tambin con longitudes de onda
que estn fuera del rango de la visin humana (infrarrojo, ultravioleta, rayos X). Sin
embargo, los principios son bastante similares tanto para la luz visible como para
la no visible.
Tcnicamente, la espectrometra de absorcin se basa en la absorcin de
fotones por una o ms sustancias presentes en una muestra (que puede ser un
slido, lquido, o gas), y la promocin subsiguiente del electrn (o electrones)

desde un nivel de energa a otro en esa sustancia. La muestra puede ser una
sustancia pura, homognea o una mezcla compleja. La longitud de onda en la cual
el fotn incidente se absorbe es determinada por la diferencia en los niveles de
energa disponibles de las diferentes sustancias presentes en la muestra. Esta es
la selectividad de la espectrometra de absorbancia, la capacidad de generar
fuentes de fotones (luz) que son absorbidas slo por algunos componentes en una
muestra. Tpicamente, los rayos X se usan para revelar la composicin qumica,
mientras que las longitudes de onda cercanas al ultravioleta y el infrarrojo se usa
para distinguir las configuraciones de diversos ismeros detalladamente. En la
espectroscopia de absorcin, los fotones absorbidos no son emitidos de nuevo
(como en la fluorescencia) sino que la energa que se transfiere al compuesto
qumico en la absorbancia de un fotn se pierde por medios no radiantes, como la
transferencia de energa por calor a otras molculas.
Aunque la intensidad relativa de las lneas de absorcin no vara con la
concentracin, a cualquier longitud de onda dada la absorbancia medida ( log (I /
I0)) es proporcional a la concentracin molar de las especies que absorben y el
grosor de la muestra por la que la luz pasa. Esto se conoce como ley de BeerLambert. El grfico de la cantidad de radiacin absorbida respecto a la longitud de
onda para un compuesto particular se conoce como espectro de absorcin. El
espectro de absorcin normalizado es caracterstico para cada compuesto
particular, no cambia con la concentracin y es como la "huella digital" qumica del
compuesto. En las longitudes de onda correspondientes a los niveles de energa
resonantes de la muestra, se absorben algunos de los fotones incidentes, lo que
provoca una cada en la intensidad de transmisin medida y una pendiente en el
espectro. El espectro de absorcin puede medirse usando un espectrmetro.
Conociendo la forma del espectro, la longitud de ruta ptica y la cantidad de
radiacin absorbida, se puede determinar la estructura y la concentracin del
compuesto.
Los espectros de absorcin de luz visible pueden tomarse en cualquier material
que sea visiblemente claro. El poliestireno, el cuarzo, y las clulas de borosilicato

(Pyrex), son los materiales ms usados. La luz ultravioleta es absorbida por la

mayor parte de cristales y plsticos, por lo que se usan clulas de cuarzo. El Si-O
presente en el cristal y el cuarzo, y el C-C en el plstico absorben la luz infrarroja.
Los espectros de absorcin infrarrojos se realizan generalmente con una delgada
pelcula de la muestra sostenida entre platos de cloruro de sodio. Otros mtodos
implican suspender el compuesto en una sustancia que no absorba en la regin de
estudio. Las emulsiones de aceite mineral (Nujol) y los cristales de bromuro de
potasio suelen ser los ms comunes. El NaCl y KBr, al ser inicos, no absorben el
infrarrojo de forma significativa, y el Nujol tiene un espectro infrarrojo relativamente
sencillo.
Espectrometra como instrumento analtico
A menudo es de inters conocer no slo la composicin qumica de una muestra
dada, sino tambin las concentraciones relativas de varios compuestos de una
mezcla. Para hacer esto debe construirse una escala, o curva de calibracin,
usando varias concentraciones conocidas para cada compuesto de inters. El
grfico que resulta de la concentracin respecto a la absorbancia se hace a mano
o usando un software de ajuste de curvas apropiado, que usa una frmula
matemtica para determinar la concentracin en la muestra. La repeticin de este
proceso para cada compuesto en una muestra da un modelo de varios espectros
de absorcin que en conjunto reproducen la absorcin observada. De esta manera
es posible, por ejemplo, medir la composicin qumica de los cometas sin tener
muestras de ellos en la Tierra.

Un ejemplo simple: un cianuro estndar a 200 partes por milln da una

absorbancia con un valor arbitrario de 1540. Una muestra desconocida da un valor
de 834. Ya que esta es una relacin lineal y pasa por el origen, el valor
desconocido se calcula fcilmente como 108 partes por milln. Con este mtodo
de proporcin no es necesario conocer los valores de los coeficientes
gobernantes, o cromforos, o la longitud de clula experimental.

En la prctica, el uso de una curva de calibracin, ms que un solo punto de

comparacin, reduce la incertidumbre en la medida final por exclusin de la
interferencia aleatoria (ruido) en la preparacin de los estndares.
MATERIALES Y EQUIPO.

Espectrofotmetro Spectronic-20
Celdas para espectroscopia
5 frascos volumtricos de 25 ml
Pipeta de 10 ml
Pipeta de 5 ml
2 beakers de 10 ml
1 frasco volumtrico de 4500 ml
Scout wiper
Pizeta
Agitador de vidrio
Balanza analtica

REACTIVOS Y DISOLVENTES:
NO

Solucin de Cr

0.05 M

Agua destilada.
PROCEDIMIENTO.
A- OPERACIN Y RESPUESTA DEL ESPECTROFOTOMETRO
1. Encienda el espectrofotmetro.
2. Ajuste la perilla de control de amplificador (ubicado al lado izquierdo en el
frente del instrumento) hasta que la aguja del medidor lea 0%T, y deje que
el instrumento caliente al menos por 20 minutos.
3. Mientras tanto, prepare una solucin 0.02 M de Cr(III) a partir de la solucin
stock 0.05M de Cr(III)
4. Despus que el instrumento haya calentado, vuelva a llevar a cero el
instrumento si es necesario.

5. Coloque aproximadamente 3 ml de agua destilada en una celda, secando

con una toallita absorbente en caso de salpicaduras sobre la superficie de
sta.
6. Gire la perilla de control de luz (al frente y derecha del instrumento) en
sentido contrario de las agujas del reloj hasta disminuir apreciablemente la
cantidad de luz que pase al fototubo. Inserte la celda que llen con agua
dentro del receptor de muestra.
7. Gire la perilla de control de longitud de onda a 510 nm
8. Gire la perilla de control de luz en sentido horario hasta que la aguja del
medidor registre cerca del 100%T en la escala.
9. Sin realizar ningn ajuste con las perillas de control de amplificacin o de
luz, corra una curva espectral para la respuestas relativa del colormetro,
registrando las lecturas de la escala de %T a las siguientes longitudes de
onda: 350, 375, 400, 425, 450, 475, 500, 512, 525, 550, 575, 600, 612 y
625 nm.
B- EL ESPECTRO VISIBLE
1. Coloque dentro del recipiente de muestra la celda especial para observar el
color de la luz que pase. Gire la celda hasta que la trayectoria de la luz
golpee la superficie inclinada de yeso.
2. Observe y registre el color del rayo cada 50 nm desde 650 a 350 nm.
Puede ser necesario rotar la perilla de control de luz para incrementar o
disminuir la intensidad de la luz. No permita que la aguja del medidor salga
de la escala.
3. Ajuste la longitud de onda a 600 nm. Note la variacin del color a lo largo de
la banda de luz, Qu rango de longitudes de onda de luz comprende la
banda que observa?
4. Ajuste la longitud de onda a 550 nm. Gire la perilla de control de luz y
observe el cambio en la intensidad de luz.

NO

C-ESPECTRO DE ABSORCION DE UNA SOLUCION DE Cr

1. Seleccione la longitud de onda a 375 nm. Ajuste el instrumento a 0%T (sin

celda) y a 100%T con la celda con agua colocada dentro del
compartimiento de muestra. A partir de este punto asegurarse siempre de
utilizar la misma celda para llenar con agua destilada como blanco.
2. Coloque aproximadamente 3 ml de la solucin de Cr(III) 0.02 M en una
segunda celda. Limpiela con la toallita y colquela dentro del

3.
4.
5.
6.

compartimiento de la muestra. Lea en la escala el %T de la solucin. Repita

la lectura reajustando a 0 y 100 con la celda blanco y obtenga la lectura
promedio.
Ajuste la longitud de onda a 400 nm. Calibre de nuevo a 0 y 100,
utilizando la celda con el blanco.
Coloque la solucin 0.02 M de Cr(III) en el recipiente para muestra y
registre la lectura, repitiendo segn el numeral (2).
Contine con el procedimiento a las longitudes de onda de 402, 415, 425,
440, 455, 470, 490, 500, 520, 530, 540, 550, 570, 580, 600 y 625 nm.
Vacie y enjuague las celdas con agua destilada y asegrese mantener las
celdas distinguidas de tal manera que una celda sea usada para blanco y la
otra para medir todas las muestras en sus experimentos.

INSTRUMENTO UTILIZADO.
Escala
Piloto

Recipiente
Para muestra

Perilla de control
de longitud de onda
Escala de
Longitud de onda

Perilla de control
de cero e interruptor.

Perilla de control de luz

El Spectronic 20 es un espectrofotmetro desarrollado por Bausch & Lomb y

lanzado en 1953. El diseo original utiliz una lnea analgica para la lectura de la
transmisin del 100% T al 1% T (arriba a escala), 0A - 2A (escala inferior).
Utilizando el instrumento original requiere ajuste manual de la longitud de onda y
hacer lecturas de una pantalla analgica en movimiento con aguja. Spectronic 20
es robusta, precisa dentro de los lmites de ancho de banda espectral es de 20
nm, y fcil de
La luz de la lmpara de tungsteno pasa a travs de una rejilla de entrada y es
dispersada por una rejilla de difraccin. Del rayo disperso, una estrecha banda de

longitudes de onda de luz similares pasa a travs de una segunda rejilla hacia la
muestra de solucin a medir. Cualquiera de las longitudes de onda de esta luz que
no es absorbida por la muestra de solucin, pero que atraviesa la solucin, incide
sobre el fototubo, donde la intensidad de la luz transmitida se mide
electrnicamente. La rejilla de difraccin es una lmina plana de vidrio recubierta
de plstico dividida en finos surcos paralelos. La superficie aluminizada para
volverla reflectora de la luz. La luz blanca que incide en la rejilla es dispersada en
un pequeo abanico de rayos con las longitudes de onda cortas y las longitudes
de onda largas en el otro extremo.
DATOS PROCESADOS.
A. Operacin y respuesta del espectrofotmetro.
Longitud de onda, m

Respuesta (relativa) %T

350
375
400
425
450
475
500
512
525
550
575
600
612
625

12
23
37
55
73
91
100
99
91
68
38
13
9
6

Respuesta (relativa)
%T, fototubo
90
98
100
98
91
81
68
61
53
37
21
10
7
5

Respuesta relativa del calormetro vrs longitud de onda.

120
100
80

RESPUESTA RELATIVA

60
RESPUESTA RELATIVA
RESPUESTA RELATIVA
FOTOTUBO

40
20
0

LONGITUD DE ONDA

GRAFICO 1: RESPUESTAS RELATIVAS DEL COLORIMETRO Y FOTOTUBO

VRS LONGITUD DE ONDA.

B. El espectro visible.
Colores observados en el espectro visible para distintas longitudes de onda.
650 nm.

450 nm.

600 nm.

400 nm.

550 nm.

350 nm.

500 nm.

Intensidad relativa de la lmpara.

intensidad relativa=

respuesta delinstrumento 100

respuesta del fototubo

3

o para una longitud de onda de 350

12 100
intensidad relativa=
=4.4
90
3
o para una longitud de onda de 375
23 100
intensidad relativa=
=7.8
98
3
o para una longitud de onda de 400
37 100
intensidad relativa=

=12.3
100
3
o para una longitud de onda de 425
55 100
intensidad relativa=
=18.7
98
3
o para una longitud de onda de 450
73 100
intensidad relativa=
=26.7
91
3
o para una longitud de onda de 475
91 100
intensidad relativa=
=37.4
81
3
o para una longitud de onda de 500
100 100
intensidad relativa=

=49.02
68
3
o para una longitud de onda de 512
99 100
intensidad relativa=
=5 4.1
61
3
o para una longitud de onda de 525
91 100
intensidad relativa=
=57.2
53
3
o para una longitud de onda de 550
68 100
intensidad relativa=
=61.3
37
3
o para una longitud de onda de 575

intensidad relativa=

38 100

=60.3
21
3

o para una longitud de onda de 600

13 100
intensidad relativa=
=43.3
10
3
o para una longitud de onda de 612
9 100
intensidad relativa=
=42.9
7
3
o para una longitud de onda de 625
6 100
intensidad relativa=
=40
5
3
Longitud de onda,
m

Respuesta (relativa)
%T

350
375
400
425
450
475
500
512
525
550
575
600
612
625

12
23
37
55
73
91
100
99
91
68
38
13
9
6

Respuesta
(relativa) %T,
fototubo
90
98
100
98
91
81
68
61
53
37
21
10
7
5

Intensidad
relativa de la
lampara
4.4
7.8
12.3
18.7
26.7
37.4
49.02
54.1
57.2
61.3
60.3
43.3
42.9
40

120
110
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
300

respuesta relativa

respuesta relativa fototubo

intensidad relativa de la lampara

350

400

450

500

550

600

650

longitud de onda

GRAFICO 2: RESPUESTAS RELATIVAS DEL CALORIMETRO Y FOTOTUBO E

INTENSIDAD RELATIVA VRS LONGITUD DE ONDA

C. Espectro de absorcin de una solucin Cr(NO3)3.

Longitud de onda nm
405
415
425
440
455
470
490
500
520
530
540
550
570
575
580

Espectro de absorcin (absorbancia)

0.384
0.361
0.331
0.244
0.150
0.101
0.083
0.101
0.156
0.215
0.253
0.238
0.319
0.324
0.320

600
625

0.271
0.174

espectro de absorcion
90
80
70
60

%T

50

espectro de absorcion

40
30
20
10
0
400 425 450 475 500 525 550 575 600 625 650
longitud de onda (nm)

GRAFICO 3: ESPECTRO DE ABSORCION VRS LONGITUD DE ONDA.

Referencia bibliogrfica.

Principios de anlisis instrumental

Skoog, Douglas A.; Holler, F. James.; Crouch, Stanley R.
(6a.ed mc-grawhill)
Manual de laboratorio de anlisis instrumental