UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR

FACULTAD DE INGENIERÍA Y ARQUITECTURA

ESCUELA DE INGENIERÍA QUÍMICA E INGENIERÍA DE ALIMENTOS
ANÁLISIS INSTRUMENTAL

LABORATORIO N°4 A:
“Determinación del espectro de absorción del K2Cr22O7”

INSTRUCTOR:
Ingra. Lucy Sosa

GRUPO:
03

INTEGRANTES:

Nombre Carnet
Gallegos Velasco, Karen Beatriz GV14036
González Escobar, Christian Alexander GE16001
Hernández Escalante, Luis Manuel HE16002

Ciudad Universitaria, 03 de mayo de 2019

 ÍNDICE

RESUMEN .............................................................................................................. 3

OBJETIVOS ............................................................................................................ 4

Objetivo General ........................................................................................... 4

Objetivos Específicos ................................................................................... 4

MATERIALES Y MÉTODOS APLICADOS .............................................................. 5

Fundamento ................................................................................................. 5

Tramitancia y Absorbancia ........................................................................... 6

Ley de Lambert-Beer .................................................................................... 7

Descripción del equipo ....................................................................... 8

Diagrama de bloques ......................................................................... 9

ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS ........................................... 10

CONCLUSIONES .................................................................................................. 14

BIBLIOGRAFÍA ..................................................................................................... 15

ANEXOS ............................................................................................................... 16
 RESUMEN

A continuación, se presenta un informe donde se explica detalladamente lo

realizado durante la práctica de laboratorio titulada “Determinación del espectro de
absorción del K2Cr22O7”. Se tiene como objetivo principal elaborar el espectro de
absorción de una sustancia pura para conocer la longitud de onda a la cual posee
su máxima absorción de energía para luego elaborar una curva de calibración a
partir de ésta.

Para conocer el espectro de absorción del dicromato de potasio se partió de una

solución madre de 1000 ppm y 50 mL de para preparar una solución intermedia de
100 ppm y 50 mL. A partir de la solución intermedia se prepararon soluciones hijas
de 5, 10, 15, 20 y 25 ppm de 50 mL cada una. Posteriormente, se fueron
transfiriendo cada una de las soluciones a una de las celdas del espectrofotómetro
para la elaboración del espectro de absorción y también se obtuvo su longitud de
onda máxima.

Finalmente, se comprendió el uso y el correcto manejo del espectrofotómetro UV;

el cual se tenía como objetivo principal en la elaboración de esta práctica de
laboratorio.

3
 OBJETIVOS

Objetivo General:
Elaborar el espectro de absorción de una sustancia pura para conocer la longitud
de onda a la cual posee su máxima absorción de energía y luego elaborar una
curva de calibración.

Objetivos Específicos:

- Aprender a manejar el espectrómetro haciendo un uso adecuado de éste.

- Medir la absorbancia y la concentración de una muestra.

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 MATERIALES Y MÉTODOS APLICADOS

Fundamento

El estudio a nivel bioquímico de cualquier biomolécula requiere la utilización de

técnicas analíticas que permitan su determinación cualitativa y cuantitativa, así
como su caracterización físico-química y biológica. Uno de los métodos más
sencillos, accesibles, útiles y utilizados es la espectroscopia, en general, y la
espectroscopia ultravioleta-visible, en particular. Se pueden identificar y cuantificar
biomoléculas en solución y en muestras biológicas, con el empleo de reactivos
específicos que reaccionan con el compuesto a analizar y forman un producto
coloreado que permite detectarlo en muestras complejas.

La espectroscopia de absorción es la medida de la cantidad de luz absorbida por un

compuesto en función de la longitud de onda de la luz. En general, e irradia una
muestra con una fuente de luz y se mide la cantidad de luz transmitida a varias
longitudes de onda, utilizando un detector y registrando el fenómeno en un gráfico.
Al contrario que en los ensayos químicos, la mayoría de las técnicas
espectroscópicas no son destructivas, es decir, no destruyen las muestras durante
el análisis; se pueden realizar diferentes tipos de espectros sin pérdida o perdiendo
muy poco de muestra.

El fundamento de la espectroscopia se debe a la capacidad de las moléculas para

absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UV visible. Las
longitudes de onda de las radiaciones que una molécula puede absorber y la
eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atómica y de las
condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza iónica, constante dieléctrica), por lo
que dicha técnica constituye un valioso instrumento para la determinación y
caracterización de biomoléculas.

Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de

energía interna. Esto permite poner en funcionamiento ciclos vitales como la
fotosíntesis en plantas y bacterias. Cuando la luz es absorbida por una molécula se
origina un salto desde un estado energético basal o fundamental, E1, a un estado
de mayor energía (estado excitado), E2. Y sólo se absorberá la energía que permita
el salto al estado excitado. Cada molécula tiene una serie de estados excitados (o
bandas) que la distingue del resto de moléculas.

5
En espectroscopia el término luz no sólo se aplica a la forma visible de radiación
electromagnética, sino también a las formas UV e IR, que son invisibles. En
espectrofotometría de absorbancia se utilizan las regiones del ultravioleta (UV
cercano, de 195-400 nm) y el visible (400-780 nm).

La región UV se define como el rango de longitudes de onda de 195 a 400 nm. Es

una región de energía muy alta. Provoca daño al ojo humano, así como quemadura
común. Los compuestos con dobles enlaces aislados, triples enlaces, enlaces
peptídicos, sistemas aromáticos, grupos carbonilos y otros heteroátomos tienen su
máxima absorbancia en la región UV, por lo que ésta es muy importante para la
determinación cualitativa y cuantitativa de compuestos orgánicos.

En la región visible apreciamos el color visible de una solución y que corresponde a

las longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El color que absorbe
es el complementario del color que transmite. Por tanto, para realizar mediciones
de absorción es necesario utilizar la longitud de onda en la que absorbe luz la
solución coloreada.

Tramitancia y Absorbancia

Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda de intensidad Io incide

perpendicularmente sobre una disolución de un compuesto químico que absorbe
luz o cromóforo, el compuesto absorberá una parte de la radiación incidente (Ia) y
dejará pasar el resto (It), de forma que se cumple:

Io = Ia + It

6
La tramitancia (T) de una sustancia en solución es la relación entre la cantidad de
luz transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la muestra, It, y la
cantidad de luz que incidió sobre ella, Io, y se representa normalmente en tanto por
ciento:

% T = It/Io x 100

La transmitancia nos da una medida física de la relación de intensidad incidente y

transmitida al pasar por la muestra. La relación entre %T y la concentración no es
lineal, pero asume una relación logarítmica inversa.
La absorbancia (A) es un concepto más relacionado con la muestra puesto que nos
indica la cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el logaritmo de
1/T, en consecuencia:

A = log 1/T = -log T = -log It/ Io.

Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales (Io = It), la transmitancia

es del 100% e indica que la muestra no absorbe a una determinada longitud de
onda, y entonces A vale log 1 = 0.

La cantidad de luz absorbida dependerá de la distancia que atraviesa la luz a través

de la solución del cromóforo y de la concentración de éste.

Ley de Lambert-Beer

Esta ley expresa la relación entre absorbancia de luz monocromática (de longitud
de onda fija) y concentración de un cromóforo en solución:

A = log I/Io = ε·c·l

La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su concentración a

mayor número de moléculas mayor interacción de la luz con ellas; también depende
de la distancia que recorre la luz por la solución y, por último, depende de ε, una
constante de proporcionalidad denominada coeficiente de extinción que es
específica de cada cromóforo. Como A es adimensional, las dimensiones de ε
dependen de las de c y l. La segunda magnitud (l) se expresa siempre en cm
mientras que la primera (c) se hace, siempre que sea posible, en M, con lo que las
dimensiones de ε resultan ser M-1·cm-1. Este coeficiente así expresado, en términos
de unidades de concentración molar (o un submúltiplo apropiado), se denomina
coeficiente de extinción molar (εM). Cuando, por desconocerse el peso molecular
del soluto, la concentración de la disolución se expresa en otras unidades distintas

7
de M, por ejemplo, g·L-1, las dimensiones de ε resultan ser distintas, por ejemplo,
g-1·L·cm-1, y al coeficiente así expresado se denomina coeficiente de extinción
específico (εs).

La ley de Lambert-Beer se cumple para soluciones diluidas; para valores de c altos,

ε varía con la concentración, debido a fenómenos de dispersión de la luz,
agregación de moléculas, cambios del medio, etc.

Descripción del equipo

El equipo utilizado para la determinación del espectro de absorción es un

Espectrofotómetro UV-vis 1800.

El UV-1800 ofrece compatibilidad con 9 ítems JIS: exactitud de longitud de onda,

repetitividad de longitud de onda, resolución, luz espuria, exactitud fotométrica,
repetitividad fotométrica, uniformidad de la línea de base, estabilidad de la línea de
base, y nivel de ruido.

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Diagrama de bloques

• MUESTRA DE K2Cr2O7
GENERADOR
DE SEÑALES
• Señal analitica: El analito (K2Cr2O7)

• ENERGIA ABSORBIDA POR LA MUESTRA

DETECTOR • Señal de entrada: Rayos UV-vis

• DIGITALIZADOR
PROCESADOR
DE SEÑALES
• Señal de salida: Absorbancia

DISPOSITIVO
• MEDIDOR DE ONDA
DE LECTURA

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 ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

 Cálculos previos

Se partió de una solución madre de 1000 ppm y 50 mL de dicromato de potasio

K2Cr2O7 para preparar una solución intermedia de 100 ppm y 50 mL. A partir
de la solución intermedia se prepararon soluciones hijas de 5, 10, 15, 20 y 25
ppm de 50 mL cada una.

Para solución intermedia:

𝐶1 ∗ 𝑉1 = 𝐶2 ∗ 𝑉2
𝐶1 ∗ 𝑉1
𝑉2 =
𝐶2
50𝑚𝐿 ∗ 100𝑝𝑝𝑚
𝑉2 =
1000𝑝𝑝𝑚
𝑉2 = 5 𝑚𝐿

Se agregaron 5 mL de la solución madre para preparar la solución intermedia

de 100 ppm y 50 mL.

- Ejemplo de cálculo para conocer el volumen agregado de la solución intermedia

a las hijas.

Para la solución hija de 5 ppm y 50 mL:

𝐶1 ∗ 𝑉1 = 𝐶2 ∗ 𝑉2
𝐶1 ∗ 𝑉1
𝑉2 =
𝐶2
50𝑚𝐿 ∗ 5𝑝𝑝𝑚
𝑉2 =
100𝑝𝑝𝑚
𝑉2 = 2.5 𝑚𝐿

Se agregó 2.5 mL de la solución intermedia para preparar la solución hija de

5 ppm y 50 mL.

Concentración Volumen

Solución madre 1000 ppm 50 mL

10
 Concentración Volumen Volumen agregado de la
solución madre
Solución 100 ppm 50 mL 5 mL
intermedia

Soluciones Volumen Volumen agregado de la

hijas solución intermedia
5 ppm 2.5 mL
10 ppm 5 mL
15 ppm 50 mL 7.5 mL
20 ppm 10 mL
25 ppm 12.5 mL

Con las soluciones hijas se partió para calcular el espectro del dicromato de potasio.
Primero se procedió a analizar la solución hija más concentrada (25 ppm) con el
espectrofotómetro VIS 1800 en un intervalo de 300 a 700 nm con el fin de obtener
el espectro de absorción de la sustancia para identificar la longitud de onda en la
que se da la máxima absorción.

Se obtuvo una longitud de onda de 370 nm que es a la que se dio la mayor absorción
(0.550 A). Por lo que esta longitud de onda es la que se utilizó para generar la curva
de calibración.

 Curva de calibración

Primero se procedió a medir la absorbancia del blanco y luego la de las

soluciones hijas en el espectrofotómetro VIS 1800:

370 nm
N° Concentración ppm Absorbancia
1 (blanco) 0 0.002
2 5 0.121
3 10 0.244
4 15 0.360
5 20 0.463
6 25 0.556

11
Al graficar la absorbancia contra concentración se obtuvo la curva de calibración:

ABSORBANCIA
0.6

0.5
ABSORBANCIA

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 5 10 15 20 25 30
CONCENTRACION DE DICROMATO DE POTASIO EN PPM

Y luego la ecuación de la curva de calibración:

𝑨𝒃𝒔 = 𝟐. 𝟐𝟑𝟔𝟑𝑬 − 𝟐 ∗ 𝑪 + 𝟏. 𝟏𝟒𝟐𝟒𝑬 − 𝟐

Con un coeficiente de determinación de 𝑟 2 = 0.9974.

 Medición de la absorbancia de una muestra

Posteriormente se procedió a medir la absorbancia de una muestra la cual era

el descarte que se utilizó en la medición de las soluciones hijas. Esta muestra
dio como resultado:

370 nm
Muestra Absorbancia Concentración ppm

Descarte 0.300 12.918

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 Interpretación de resultados experimentales

A partir del espectro de absorción del dicromato de potasio se obtuvo la

longitud de onda máxima de absorción (370 nm). A esta longitud de onda se
calcularon las absorbancias de las soluciones hijas de dicromato de potasio
para generar la curva de calibración, las cuales se observó que, a mayor
concentración, mayor absorbancia, lo que al graficar absorbancia contra
concentración dio como resultado una línea recta. Esto obedece a la ley de
Lambert-Beer la cual establece que para soluciones muy diluidas la
absorbancia mantiene una relación lineal respecto a la concentración del
analito. La ecuación de la curva de calibración obtenida presentó un
coeficiente de determinación de 0.9974, por lo que se puede decir que los
resultados obtenidos son confiables, así como la aplicación de la misma
ecuación. Para finalizar se midió la absorbancia de una muestra (descarte) en
el espectrofotómetro VIS 1800, la cual arrojó una absorbancia de 0.300 y una
concentración de dicromato de potasio de 12.918 ppm, esto tiene sentido ya
que la muestra era una mezcla de todas las soluciones hijas de dicromato de
potasio y los resultados se encuentran dentro de las absorbancias y
concentraciones de dichas soluciones, además son confiables por la precisión
obtenida en la curva de calibración (mayor al 95%).

13
 CONCLUSIONES

- Se logró comprender el uso y los pasos a seguir para el manejo del

espectrofotómetro para la determinación de la absorbancia de una sustancia
pura.

- Se obtuvo la longitud de onda máxima de absorción a partir del espectro de

absorción del dicromato de potasio, la cual fue de 370 nm. A partir de este dato
se elaboró una curva de calibración.

- En base a la curva de calibración obtenida, se pudo observar que, a mayor

concentración, mayor absorbancia. Esto obedece a la ley de Lambert-Beer.

- La ecuación de la curva de calibración obtenida presentó un coeficiente de

determinación de 0.9974, por lo que se puede concluir que los resultados
obtenidos son muy acertados.

- Se midió la absorbancia de una muestra (descarte) en el espectrofotómetro, la

cual arrojó una absorbancia de 0.300 y una concentración de dicromato de
potasio de 12.918 ppm. Dicha muestra era una mezcla de todas las soluciones
hijas. Los resultados obtenidos son aceptables porque se encuentran en el
rango de las absorbancias y concentraciones de dichas soluciones.

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 BIBLIOGRAFÍA

Díaz, N. Abril, Bárcena, J. Antonio, Reyes, E. Fernández, Cejudo, A. Galván,

Novo, J. Jorrín, Peinado, J. Peinado, . . . Fiñana, I. Túnez. (2006).
Espectrofometría: Espectros de absorción y cuantificación colorimétrica de
biomoléculas. Recuperado de https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf

Universidad Pablo de Olavide. (2004). PRÁCTICA 4. ESPECTROFOTOMETRÍA.

Recuperado de
https://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/docencia/quimbiotec/curso0405/pr
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Anónimo. (2009). PRÁCTICA # 1 “ESPECTRO DE ABSORCIÓN”. Recuperado de

https://es.scribd.com/doc/14174282/1-ESPECTRO-DE-ABSORCION

Jenck S.A. (s.f.). Espectrofotómetro UV-Vis Shimadzu UV-1800. Recuperado 1

mayo, 2019, de https://www.jenck.com/productos/producto/uv-
1800/caracteristicas

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 ANEXOS

Figura 1. Soluciones hijas de Figura 2. Espectrofotómetro

5, 10, 15, 20 y 25 ppm. UV-vis 1800.
.

Figura 3. Transferencia de una de Figura 4. Espectro de absorción obtenido

las soluciones hijas a la celda. junto con la longitud de onda máxima.

Figura 5. Ecuación y coeficiente

de determinación obtenido.

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