UNIVERSIDAD CIENTÍFICA DEL SUR

FACULTAD DE:

Ciencias de la Salud

PRÁCTICA DE LABORATORIO

CURSO: Bioquímica

PROFESOR: Hurtado Cotillo, Mario Martín

Cie

INFORME DE PRÁCTICA

PRÁCTICA N.º: Informe N.º 1

TÍTULO: Espectrofotometría

GRUPO: 3

INTEGRANTES:

Nombres
Quispe Barrientos Maria Fernanda
Minaya Copa Zahir Haroldo
Sánchez Rodríguez Sara
Espichan Matamala Edgardo Alex Joshua
Ramirez Barrientos, Dalia Mariana
Correos
100128446@cientifica.edu.pe
100123567@cientifica.edu.pe
100108266@científica.edu.pe
100124874@cientifica.edu.pe
100109876@cientifica.edu.pe

HORARIO DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA:

Domingo 07 de abril de 2024 de 11:10 am a 12:50 pm

LIMA, PERÚ

2024-1
➔ Introducción:

La espectrofotometría es un método cuantitativo que usa la luz para medir la

capacidad de absorción de una sustancia, en función de la longitud de onda. Para
ello se usa el espectrofotómetro, que es un instrumento que determina la
composición de una muestra.

Además, es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la detección de

moléculas y se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad. Para
poder realizar este tipo de medidas, se requiere del espectrofotómetro, encargado
de seleccionar la longitud de onda de la luz que atraviesa por una solución y mide la
cantidad absorbida de la luz por la misma. Dentro de sus aplicaciones, es importante
para determinar el análisis cuantitativo y cualitativo de una sustancia,
estandarización de colores en ciertos materiales, detección de impurezas, reactivos
y contaminación (1).

El espectrofotómetro, es un equipo óptico que se utiliza para medir la relación entre

valores de una misma magnitud fotométrica a dos hace de radiaciones, en función
de la longitud de onda, sus aplicaciones son: Análisis cuantitativo y cualitativo de
una sustancia, determinar impurezas en alimentos y reactivos, detección
contaminación la estandarización de colores de ciertos materiales. Este tiene 4
partes, el panel o pantalla, fuente de luz, porta celdas y digitadores. Las celdas o
cubetas tienen 4 caras, dos lisas o transparentes y dos rugosas o turbias, el haz de
luz atraviesa las caras lisas, por lo que no se pueden tocar las caras lisas de las
celdas, ya que a causa de esto el resultado podría ser alterado.

Para poder usar el espectrofotómetro se tienen que seguir 3 pasos, el primero es

encenderlo, luego configurar la longitud de onda óptima y el tercero calibrar el
espectrofotómetro (con una absorbancia de A= 0.000).

➔ Objetivos:

✓Manipular el espectrofotómetro para obtener correctamente absorbancias de la

solución de azul de metileno 1 mg/dL.

✓Describir las aplicaciones del espectrofotómetro.

✓Describir la ley de Lambert-Beer.

✓Determina la longitud de onda óptima de la solución de azul de metileno 1 mg/dL

con una curva de espectro de absorción.

✓Determinar una curva de calibración, factor de calibración usando solución de

azul de metileno 1 mg/dL.

➔ Materiales y métodos:

- Materiales en la mesa de los estudiantes

 ● 01 gradilla

● 06 tubos de ensayo 13x100 mm

● 01 piseta con agua destilada

● 02 pipeta graduada 5 ml

● 01 solución de azul de metileno 1 mg/dl frasco 100 ml

- Materiales en la mesa del profesor

● 01 espectrofotómetro

● 04 micropipeta 100 - 1000 y/o de 5 50

● Cubetas para espectrofotometría

● Puntas descartables respectivas

➔ Resultados:

1) Espectro de absorción

Tubo Absorbancia Concentración

1 0.067 0.1

2 0.203 0.2

3 0.498 0.4

4 0.877 0.6

5 1.167 0.8
 2) Métodos de cuantificación

Tubos Azul de Agua (mL)

metileno
1mg/dl (mL)

1 0.5 4.5

2 1 4

3 2 3

4 3 2

5 4 1

Resultados obtenidos:

Tubo Absorbancia

1 0.067

2 0.203

3 0.498

4 0.877

5 1.167

Hallar concentración:
 Fórmula: C1 × V1 = C2 × V2

Tubo 1: 1 mg/dL × 0.5 mL = C2 × 5 ml → C2 = 0.1 mg/dL

Tubo 2: 1 mg/dL × 1 mL = C2 × 5 ml → C2 = 0.2 mg/dL

Tubo 3: 1 mg/ dL × 2 mL = C2 × 5 ml → C2 = 0.4 mg/dL

Tubo 4: 1 mg/dL × 3 mL = C2 × 5 ml → C2 = 0.6 mg/dL

Tubo 5: 1 mg/dL × 4 mL = C2 × 5 ml → C2 = 0.8 mg/dL

2.1) Curva de Calibración:

- gráfico en papel milimetrado

2.2) Factor de Calibración:

Fórmulas:

● Fórmula del total del factor de calibración

FC total = FC1+FC2+FC3+FC4+FC5 / n

● Fórmula por cada uno de las distintas concentraciones

FCn = Concentración del estándar / Absorbancia a 660 nm

Factor de Calibración de cada tubo:

Tubo 1: 0,1 / 0.067 = 1.492

Tubo 2: 0,2 / 0.203 = 0.985

Tubo 3: 0,4 / 0,498 = 0,803

0Tubo 4: 0,6 / 0.877 = 0.684

Tubo 5: 0,8 / 1.167 = 0.685

Factor de Calibración promedio:

(1.492 + 0.985 + 0.803 + 0.684 + 0.685) / 5 = 0.9298

➔ Discusiones:

● Luego de realizar el trabajo propuesto en clase y con base en el marco teórico, se

puede decir que los resultados obtenidos en la parte experimental fueron los
esperados. Sabemos que nuestros resultados son satisfactorios porque las curvas
dibujadas combinando los puntos obtenidos con respecto a la absorción y la longitud
de onda son comparables entre sí. Sin embargo, dado que este no es un trabajo
 realizado en el laboratorio correspondiente, no hay muchos factores involucrados
que puedan comprometer los cálculos de absorción y longitud de onda.

➔ Conclusiones:

- La aplicación de la ley de Lambert-Beer nos permitió determinar la absorbancia de

muestras de azul de metileno disueltas en agua destilada, lo que facilitó el cálculo de
las concentraciones de dichas soluciones. Esta ley es fundamental ya que establece
que la cantidad de luz absorbida por un material es directamente proporcional a su
concentración.
- La utilización del fotómetro es esencial para medir las concentraciones en muestras
basadas en la absorción de luz, y es crucial comprender sus componentes,
funciones y aplicaciones para obtener resultados óptimos en cada experimento.
- La construcción de una curva de calibración nos brinda un método efectivo para
determinar la concentración de una sustancia a partir de su absorbancia. En este
proceso experimental, utilizando el factor de calibración y conociendo las
concentraciones de las muestras, calculamos su absorbancia para luego graficar la
curva de calibración. Este enfoque resulta útil para análisis cuantitativos precisos.

➔ Recomendaciones:

➢ La espectrofotometría es una técnica analítica que se utiliza para medir la

cantidad de luz absorbida o transmitida por una muestra en función de la longitud de
onda. Para llevar a cabo esta práctica de manera segura y precisa, es importante
seguir medidas de bioseguridad y recomendaciones adecuadas.

1. Preparación del espacio:

● Trabajar en un área limpia y despejada.

2. Higiene personal:

● Lavarse las manos antes y después de manipular muestras y equipos.

● Usar batas de laboratorio, guantes y gafas de seguridad para protegerse.

3. Manipulación de muestras:

● Utilizar bien los materiales de laboratorio para evitar romperlos y así

derramar el contenido que en muchos casos es peligroso para nuestra salud

● Evitar el contacto directo de las muestras con la piel y las mucosas.

● Al trabajar con sustancias químicas peligrosas, asegurarse de utilizar una

campana de extracción para evitar la inhalación de vapores.

4. Limpieza de equipos:

● Limpiar las superficies de trabajo y los equipos antes y después de su uso.

 ● Descartar adecuadamente los materiales contaminados, como puntas de
pipeta usadas , etc.

5. Manipulación de reactivos:

● Evitar el contacto con la piel y los ojos al manipular reactivos corrosivos o

tóxicos.

6. Calibración y verificación:

● Calibrar el espectrofotómetro con estándares adecuados antes de cada uso.

● Realizar verificaciones periódicas de la precisión y exactitud del instrumento.

● No tocar la cubeta de muestra por el lado liso que es por donde pasa la luz,
agarrarlo por el lado más poroso.

➔ Referencias bibliográficas:

1. Cromtek - Equipos Analíticos de Laboratorio [Internet]. Espectrofotometría UVVIS -

Cromtek; [consultado el 8 de abril de 2024]. Disponible en:
https://www.cromtek.cl/espectrofotometria-uv-vis/
2. Eyco L. ¿Para qué se utiliza la espectrofotometría UV-VIS y cómo funcionan los
equipos de medición? [Internet]. Laboratorios EYCO. 2021 [citado el 8 de abril de
2024]. Disponible en:
https://www.laboratorioseyco.com/para-que-se-utiliza-la-espectrofotometria-uv-vis-y-
como-funcionan-los-equipos-de-medicion/
3. Cumba, A., & Calderón, C. (2011). Desarrollo y Validación de un Método
Espectrofotométrico para Cuantificación de Claritromicina en Comprimidos. Química
Central, 2(1), 13–18. [citado el 8 de abril de 2024]. Disponible en:
https://doi.org/10.29166/quimica.v2i1.540
4. Artedinamico. RECOMENDACIONES Y CUIDADOS DE LOS
ESPECTROFOTÓMETRO. [citado el 8 de abril de 2024]; Disponible en:
https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articulo-ampliado/recomendaciones-y-cui
dados-de-los-espectrofotOmetro

➔ Anexos:

- Resultados del espectrofotómetro

● Tubo 1
● Tubo 2

● Tubo 3

● Tubo 4

● Tubo 5
- Comparación de los tubos