UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E
HISTOPATOLÓGICO

GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

PERÍODO ACADÉMICO OCTUBRE 2019 - MARZO 2020
ASIGNATURA ANÁLISIS CLÍNICO SEMESTRE: 6to PARALELO:
NOMBRE DEL DOCENTE MGS. ELENA BRITO
FECHA 08 de Octubre del 2019
NÚMERO DE PRÁCTICA 02 HORA: 18H00-21H00 DURACIÓN: HORAS
NOMBRE DE LOS GRUPO 3
ESTUDIANTES. 25. ROMERO COLCHA ERIKA ESTHEFANÍA
LUGAR DE LA PRÁCTICA LABORATORIO E200
TÍTULO DE LA UNIDAD UNIDAD 1
TEMA DE LA PRÁCTICA TUBIDIMETRÍA

RESULTADO DE APRENDIZAJE.
Aplica conocimientos teórico-prácticos mediante procedimientos y técnicas manuales y/o automatizadas de
análisis de laboratorio en las diferentes áreas: Hematología, Bioquímica, Serología e Inmunología, Uroanálisis,
Microbiología, Parasitología, Toxicología, Terapia Transfusional, Citología y Técnicas Histológicas, Técnicas
forenses y Biología molecular en muestras biológicas para formar profesionales competitivos.

OBJETIVO GENERAL Aplicar en la práctica una determinación tubidimetríca.

Objetivos específicos Obtener la absorbancia de una muestra turbia
FUNDAMENTO TEÓRICO:

TÉCNICAS TURBIDIMÉTRICAS

La turbidimetría es una técnica analítica de medición que determina cuánto se atenúa un haz de luz que se traslada
a través de una suspensión. Esta atenuación se produce gracias a los fenómenos de absorción y dispersión que
experimenta la luz debido a las partículas. Entonces, se pueden deducir las dimensiones de las partículas presentes
en una suspensión mediante la medición de la turbidez que hay en esta. En este sentido, este procedimiento se usa
para cuantificar la absorción y dispersión de la luz: se demuestra su dependencia de las dimensiones de las
partículas y de la concentración de estas en la suspensión.

La turbidimetría se fundamenta en la medición de la intensidad de la radiación lumínica que se transmite a través

de un medio constituido por partículas que manifiestan cierta dispersión, las cuales poseen un índice de refracción
distinto al de la suspensión donde se encuentran. Esta técnica consiste en hacer que la luz atraviesa un filtro,
mediante lo cual se produce una radiación de la que se conoce su longitud de onda; después, esta radiación
atraviesa una cubeta en la que se encuentra una solución y es recolectada por una celda de naturaleza
fotoeléctrica. Así se obtiene una cuantificación de la luz que se ha absorbido.

Dicho de otro modo, esta técnica se utiliza para cuantificar la turbidez que posee una solución, basándose en
medir los efectos que ejerce esta propiedad sobre los procesos de dispersión y transmisión de la radiación
lumínica. Cabe destacar que para estos análisis es indispensable que la suspensión sea uniforme, debido a que la
falta de uniformidad puede afectar los resultados de la medición.

- Turbidez

Se puede decir que la turbidez de un fluido se debe a la presencia de partículas que se encuentran finamente
divididas en suspensión; por lo tanto, al hacer que un haz de luz atraviese una muestra que posee cierta turbidez,
se observa la disminución de su intensidad debido a la dispersión. Asimismo, la cantidad de radiación lumínica
que se ha dispersado es dependiente de la distribución de las dimensiones de las partículas y su concentración, y
se mide a través de un dispositivo llamado turbidímetro.

Como en las mediciones turbidimétricas se determina la intensidad de la radiación lumínica que se transmite a
través de la muestra, mientras más dispersión exista menor será la intensidad de la luz transmitida.
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De modo que cuando se realizan estimaciones de transmisión, tal como sucede con las de absorción, el
decrecimiento de la intensidad de la luz depende de la concentración de las especies que se encuentran en la celda
con cierta dispersión, sin variaciones en la longitud de onda. Cuando se emplea la teoría de la dispersión de la luz
se obtienen las mediciones de turbidez y se determinan las dimensiones de las partículas, así como su distribución
en la suspensión.

- Principio de medición de turbidez.

Cuando el haz de luz atraviesa el fluido de la muestra, los sólidos suspendidos dispersan la luz en todas
direcciones. La reducción de la intensidad del haz de luz se debe a la difusión del haz por dichos sólidos
suspendidos en el medio. Sin embargo, la absorción de la radiación incidente por sustancias coloreadas disueltas,
también reduce la intensidad de la luz y debe tenerse en cuenta para contrarrestar este efecto, de forma manual o
automática. En el análisis de bajas cantidades de sólidos suspendidos, se suele usar la medida de la luz dispersa,
debido a que los fotodetectores detectan pequeños cambios de la intensidad de la luz en contraste con un fondo
oscuro. Sin embargo, este método tiene como desventaja que con grandes cantidades de sólidos disueltos en la
muestra, se produce una dispersión múltiple que limita la cantidad de luz que recibe el detector. A elevadas
concentraciones de sólidos suspendidos, se deben emplear métodos de medición alternativos, tales como los de
absorción.

- Turbidímetro

Se conoce como turbidímetro al instrumento empleado en la medición de la claridad relativa que posee un fluido,
al cuantificar la radiación lumínica en una muestra de fluido que ha sufrido dispersión ocasionada por partículas
suspendidas. Estas partículas que se encuentran suspendidas dificultan que la radiación sea transmitida a través de
los fluidos, obstaculizando su paso. Entonces, la turbidez de una sustancia podría originarse debido a una sola
especie o a un conjunto de especies químicas.

Generalmente, un sistema para la medición de turbidez consta de la fuente de luz, la muestra en análisis y del
fotodetector (fotodiodo, fotorresistencia, etc.) . En estos sistemas, la fuente de emisión de luz (ejemplo los LEDs),
tiene la capacidad de emitir a una longitud de onda determinada, existe un recipiente cristalino o frasco donde se
coloca la muestra en estudio y el fotodetector se comporta como receptor de los fotones o sensor óptico. Dicho
fotodetector se encuentra antes de un bloque de acondicionamiento, que permite amplificar y filtrar las señales
emitidas por él en forma de impulsos eléctricos. Estas señales pueden ser introducidas en una Unidad Central de
Procesamiento y Control (UCPC) encargada de la conversión analógicodigital de la señal de entrada y de cumplir
con las tareas del procesamiento digital, como la cuantificación y el procesamiento matemático con el objetivo de
proporcionar el resultado requerido, además de mostrar el valor de la turbidez medida después del procesamiento
digital. Asimismo, la UCPC es capaz de generar y controlar una señal con determinadas características para
estimular la fuente de emisión de luz.
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MATERIALES Y MÉTODOS
Equipos Materiales Reactivos
Espectrofotómetro Tubos de ensayos Orina
PROCEDIMIENTO / TÉCNICA:

1. En tres tubos marcados B (Blanco) S (Standard) y D (Desconocido) colocar: B en este caso se determinó
la concentración de glucosa.

Blanco Muestra Estándar

Estándar - - 10 ul
Muestra - 1000 ul -
Reactivo Trabajo 1ml 250 ul 1ml

2. Incubar 5 minutos en baño de agua a 37o C o 25 minutos a 15-25o C

3. Leer las absorbancias en el espectrofotómetro
4. Realizar los cálculos respectivos

RESULTADO (Gráficos, cálculos, etc.)

No hay resultados en esta practica

OBSERVACIONES

- La absorbancia de una muestra de orina turbia es mayor que la absorbancia de una orina incolora
- Los sistemas para la medición de turbidez operan sobre la base de los fenómenos ópticos que se
producen al incidir un haz de luz a través de un medio.
- La luz se dispersa debido a la existencia de partículas suspendidas en el interior del medio en análisis,
que también intervienen en la reducción de la intensidad del haz de luz resultante.

CONCLUSIONES

- Se determinó que en las técnicas turbidimetrícas la absorbancia es inversamente proporcional a la

concentración.

- Se definió que la turbidimetría es una técnica analítica de medición que determina cuánto se atenúa un
haz de luz que se traslada a través de una suspensión. Esta atenuación se produce gracias a los
fenómenos de absorción y dispersión que experimenta la luz debido a las partículas. Entonces, se pueden
deducir las dimensiones de las partículas presentes en una suspensión mediante la medición de la
turbidez que hay en esta. En este sentido, este procedimiento se usa para cuantificar la absorción y
dispersión de la luz: se demuestra su dependencia de las dimensiones de las partículas y de la
concentración de estas en la suspensión.

RECOMENDACIONES

- Siempre validar los resultados que se obtiene en los análisis de las muestras, antes de enviarlos o
entregarlos, aunque en algunas ocasiones estos valores se encuentren elevados en sus niveles.
- Desarrollar la practica con todas las normas de bioseguridad y con el mayor cuidado posible

CUESTIONARIO:

1. Describa las técnicas turbidimétricas.

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La turbidez se mide utilizando las técnicas de turbidimetría o nefelometría. La relación directa entre los
datos de turbidez y la concentración de sólidos suspendidos depende de muchos factores, entre los cuales
se incluye el tamaño de las partículas, la forma, la distribución y el estado de la superficie, índice de
refracción de las partículas de dispersión y de la longitud de onda de la luz utilizada.

El nefelómetro cuantifica la intensidad de la luz dispersada por la muestra bajo análisis. El sensor se
encuentra montado en un ángulo normalmente de 90° del rayo de luz incidente. Este diseño tiene una
precisión limitada a elevadas turbiedades. A medida que aumenta la turbidez aumenta la cantidad de luz
dispersa, ocurriendo una dispersión múltiple que disminuye la intensidad de luz difusa que llega al
detector situado a los 90°.

El turbidímetro mide la absorbancia de la muestra en estudio. Es uno de los instrumentos más

utilizados y la técnica empleada consiste en el uso de un cultivo de microorganismos en un medio
líquido, que actúa como una suspensión coloidal, la cual bloquea y refleja la luz que pasa a través de él.
La luz es absorbida de manera directamente proporcional a la concentración de células que hay en el
cultivo.

El turbidímetro que revela la tasa o relación de intensidades luminosas, mide tanto la transmisión
de la intensidad de la luz como su dispersión. Este diseño es muy apropiado para los productos
líquidos que presenten colores intensos y para muestras de gran turbidez.5 Esta configuración es la clave
para obtener buenas características de rendimiento en las mediciones de turbidez, así como una buena
estabilidad, linealidad, sensibilidad, baja luz difusa y rechazo del color.14 Además de estas técnicas de
medición, la de retrodispersión se refiere a la medición de la luz dispersada en un ángulo entre 90° y
180°.10,18 La espectrometría de retrodispersión Rutherford (RBS) es una poderosa técnica analítica,
basada en la medida de un haz de iones retrodispersados de elevada energía que incide sobre una
muestra. En este método, la luz dispersada se detecta en direcciones determinadas, siempre
correspondientes a ángulos de dispersión mayores de 90º. Esta técnica brinda información sobre las
masas atómicas en el medio y determina la distribución de los elementos en el medio en función de su
profundidad.

2. Describa la relación de la absorbancia del blanco y sus constantes.

La absorbancia es más útil en espectrofotometría que la transmitancia, debido a que la representación gráfica
de la concentración versus la absorbancia produce una línea recta. La representación gráfica de la
concentración versus la transmitancia es exponencial. El -log calcula el inverso de la transmitancia, de tal
manera que la absorbancia aumenta con la concentración creciente de colorante.

BIBLIOGRAFÍA
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HISTOPATOLÓGICO

- Zubieta, M. Asignatura: Bioquímica Clínica I Carrera: Bioquímica Ciclo lectivo: 2017 Docentes:
Docente Coordinador: Bioq. Juan Antonio Verna; Jefe de Trabajos Prácticos: Bioq.
- Navaza, M. D. C. D. O., García-Saavedra, M. J. G., & García, J. C. V. (2005). Fundamentos y técnicas
de análisis bioquímico: laboratorio de diagnóstico clínico. Paraninfo.
- Cardozo, C., Linares, R., Pose, G., & Alallón, W. Evaluación de Lipoproteína (a) por turbidimetria y
electroforesis. Dra. Alicia Olascoaga Revista Uruguaya de Patología Clínica, 14.

RESPONSABLE DEL
DIRECTOR/A DE CARRERA DOCENTE LABORATORIO
Mgs. Ximena Robalino Mgs. Elena Brito Lic. Franklin Ramos