CARRERA: MEDICINA HUMANA

PRACTICA DE LABORATORIO

CURSO: BIOQUÍMICA

PROFESORA: MUÑOZ CABANA, MILAGROS YOVANA

INFORME DE PRÁCTICA N°01

TÍTULO: ESPECTROFOTOMETRÍA

INTEGRANTES:

ALUMNO CÓDIGO PARTICIPACIÓN

ALZUGARAY HUAMANI ,DAYLU BRIGGITH 100111583 100%
CHARAJA CONDORI, MARIA FERNANDA 100108598 100%
CORINA

MERA TORRES ELQUI ALVER 100117184 100%

 ÍNDICE

1. Introducción......................................................................................

2. Objetivos............................................................................................

3. Materiales y Métodos........................................................................

4. Procedimiento experimental............................................................

6. Discusión...........................................................................................

7. Conclusiones.....................................................................................

8. Recomendaciones.............................................................................

9. Bibliografía………………………………………………………………..
 ESPECTROFOTOMETRÍA

1. Introducción

El análisis de oxígeno disuelto en el agua se viene realizando desde

inicios del presente siglo, mayormente por el método de Winkler
(Maisterrena, 2020). Cuando se da la evaluación del oxígeno
medianamente aguas naturales o estuarinas, el método Winker es
sometido a diversas interferencias de tipo químico, estás interferencias
son posibles de eliminarlas, agregando modificaciones que ya se han
visto implementados a la técnica original.
De igual forma, el análisis
como paso final implica la
titulación de yodo con
tiosulfato sódico, teniendo
posibilidades de llegar a
cometer errores en la estandarización del tiosulfato o en el proceso de
titulación, en años moderadamente reciente se ha podido proponer la
espectrofotometría ultravioleta como ultimo paso ante el proceso
analitico.
La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales
mayormente usada, para la detección de moléculas específicas. Se
destaca su precisión, sensibilidad y su aplicación a moléculas que son
de distintas naturalezas, así como también, los estados de agregación.
 2. Objetivos:

2.1 Lograr describir el uso y aplicación del espectrofotómetro

2.2 Definir la concentración del azul de metileno (solución) usando el
factor de calibración
2.3 Realizar una curva de calibración con los datos que se obtendrán
del espectrofotómetro.
3. Materiales y Métodos:

3.1 Materiales en la mesa de los estudiantes

- 01 gradilla
- 06 tubos de ensayo 13 x 100 mm
- 01 piseta con agua destilada
- 02 pipeta graduada 10 mL
-
3.2 Materiales en la mesa del profesor
- 01 solución de azul de metileno 1 mg/dL
frasco 100 mL
- 01 espectrofotómetro
- 01 micropipeta 100 - 1000 μL y/o de 5 - 50 μL
- 12 cubetas para espectrofotometría
- 12 puntas descartables respectivas

MÉTODOS:
Uso del Espectrofotòmetro se usa agua destilada para la calibración, siempre va en
la celda número uno. se cierra la tapa correctamente de este, hacemos clic en la
opción de “auto cero”, de modo que, esperamos a que la lectura sea 0.000
confirmando que el equipo está correctamente calibrado.
 - Continuando con el proceso, preparamos las muestras , estas van en las celdas
2, 3, 4, 5 y 6. Cerramos la tapa del espectrofotómetro y en la pantalla del mismo
hacemos clic en la opción + esta se encuentra en la parte inferior de la pantalla y
es la opción a seleccionar.
- Luego, colocamos la longitud de onda () que queremos medir y la unidad en la que
se encuentra, que en este caso fue de mg/dL.
- Continuando, hacemos clic en configuraciòn, donde modificaremos la cantidad de
celdas por tomar en cuenta en la medición, elegiremos la opción de 8 celdas ya que
es la cantidad de celdas que hay en nuestro espectrofotómetro, pero solo
seleccionaremos las celdas 2, 3, 4, 5 y 6. Pues la celda 1, es del calibrador por lo
tanto su absorbancia siempre saldrá 0.000 y las dos últimas celdas restantes no
contienen alguna muestra (en este caso), de forma que también serán excluidas del
conteo.
- Pulsamos la flecha de “retroceder” y seleccionamos la opción de “continuar”.
- Finalmente, le damos clic a la opción de “iniciar”.

RESULTADOS:
● Curva de Calibración
- Experiencia 1:

longitud de 560 580 600 620 640 660 680 700

onda (nm)

Absorbancia 0,135 0,243 0,478 0,622 0,777 1.136 0,679 0,100

 ● concentración:

Ejm.

C1V1=C2.V2
1(0.5)=C2.5
0.1=C2

Experiencia 2:

concentración 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8

absorbancia 0.025 0.050 0.100 0.150 0.200

6.Discusión
Uno de los primeros gráficos expresa lo que es la absorción versus longitud
de onda en la cual tenemos que revisar el pico más alto , en el caso del
segundo gráfico vemos al igual que el gráfico inicial absorbancia solo que
ahora sobre concentración este dato en específico se saca con cada uno de
los casos de la tabla mediante la fórmula C1xV1=C2xV2 esos resultados son
colocados en el eje x del gráfico donde va la concentración siendo a mayor
concentración la absorbancia también se va elevar dando una recta
inclinada.Generando que todos nuestros datos vayan de acorde a la
experimentación.
7.Conclusiones.
-Al realizar la experimentación con la curva de calibración usando el reactivo de azul
de metileno definimos que la absorbancia es directamente proporcional a la
concentración, es decir que a mayor absorción mayor concentración.
-Llegamos al punto de lo que queríamos realizar en la experimentación adjuntando
la data correspondiente y usando los materiales adecuados .
- El uso correcto del espectrofotómetro ha permitido tener los resultados exactos
con una óptima calidad analítica y con unos óptimos resultados.

8.Recomendaciones.
- usar bata en el laboratorio y abrocharse correctamente.
- usar los epp correctos según la práctica lo requiera.
- Emplear el uso adecuado del equipo espectrofotométrico.
- seguir las recomendaciones del docente durante la clase.
- manipular correctamente las celdas o cubetas para no alterar los resultados.

9. Biografía.
- AGQ Labs Chile S.A. (2017). Análisis médico, medir es comparar. AGQ.
Recuperado 8 de abril de 2023, de
https://agqlabs.cl/wp-content/uploads/Analisis-quimico-medir-es-comparar.pdf
- Maisterrena, V. D. (2020, 22 octubre). Valoración de oxígeno disuelto.
https://repo.unlpam.edu.ar/handle/unlpam/5646