FACULTAD DE MEDICINA HUMANA
INFORME DE LABORATORIO
PRÁCTICA N°1
ESPECTROFOTOMETRÍA
CURSO:
BIOQUÍMICA
INTEGRANTES:
MESA: 1
DOCENTES:
FECHA DE PRÁCTICA:
LIMA - PERÚ
2020 - II
I. INTRODUCCIÓN
La espectrofotometría es un método para analizar de una manera cualitativa para
determinar elementos constitutivos de los organismos, con esta podemos medir la
intensidad de luz transmitida como absorbida, siempre en una determinada longitud
de onda. Es caracterizada por su sensibilidad, precisión y su aplicación en moléculas
de distinta naturaleza. Esta técnica está basada en que las moléculas absorban las
radiaciones electromagnéticas, y también que la cantidad de luz que ha sido
absorbida dependa linealmente de la concentración.
Para poner en práctica este método, es necesario el empleo del espectrofotómetro
que es fundamental en el laboratorio clínico y que permite realizar estas medidas, en
él se pueden distinguir la longitud de onda de la luz que traspasa por una solución y
la medición de la cantidad de luz absorbida por la misma.
Existen diversos métodos espectrofotométricos los cuales igualmente tienen la
finalidad de medir la intensidad de la luz y están basados en la medida de la
radiación electromagnética que es absorbida o emitida por una sustancia. Entre
todos, se puede observar principalmente los siguientes tres métodos:
❖ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN: Se fundamenta en el descenso
de la potencia de un haz de radiación electromagnética al interactuar con una
sustancia. Para lo cual se va a medir la absorbancia que está relacionada con
la concentración por lo que se dice que son directamente proporcionales.
❖ESPECTROFOTOMETRÍA DE EMISIÓN: Se fundamenta en la radiación que
transmite una sustancia cuando es anticipadamente excitada mediante otro
tipo de energía (térmica, eléctrica, etc.). La radiación emitida tiene relación
con la concentración que transmite la luz cuando regresa desde un estado
excitado a su estado basal. También, es por ello que se afirma que la emisión
es directamente proporcional a la concentración.
❖ESPECTROFOTOMETRÍA DE FLUORESCENCIA: Se fundamenta en la
radiación que traspasa la sustancia cuando es anticipadamente excitada por
un haz de radiación electromagnética.
II. OBJETIVOS
❖ Conocer de manera general cómo manipular el espectrofotómetro
❖ Conocer las aplicaciones del espectrofotómetro
❖ Aplicar la ley de Lambert-Beer
❖ Determinar una curva de calibración, factor de calibración usando solución de
azul de metileno 1 mg/dL
III. MATERIALES Y MÉTODOS (PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL)
A. MATERIALES
❖ 01 gradilla
❖ 05 tubos de ensayo 13x100mm
❖ 01 piseta con agua destilada
❖ 02 pipeta graduada 10mL
❖ 01 solución de azul de metileno 1mg/dL frasco 100mL
❖ 01 espectrofotómetro
❖ 01 micropipeta 100-1000 µL y/o de 5-50µL
❖ 12 cubetas para espectrofotometría
❖ º12 puntas descartables respectivas
B. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
❖ Solución azul de metileno 1mg/dL Pesar en la balanza analítica 1mg de azul de
metilo. Mezclar 1mg/dL de azul de metileno previamente pesados en 100mL de
agua destilada. Agitar hasta que se disuelva completamente.
❖ Primero se halló el promedio total de la concentración estándar (mg/dL) y de la
absorbancia.
❖ Después se hace la curva de calibración en Excel seleccionando la
concentración estándar y la absorbancia y nos saldrá una gráfica.
❖ Se calcula el factor de calibración con la formula FC = Concentración
estándar/absorbancia y después se multiplica por la absorbancia que nos dan de
la mesa N°1 (0.528).
❖ Se calcula la ecuación de la recta reemplazando los datos que nos dio la
gráfica.
❖ Por último, se halló la función de tendencia con una fórmula en Excel
IV. RESULTADOS
La concentración de la muestra de azul de metileno en la mesa N°1 salo los
siguientes resultados.
En el Factor de calibración nos salió 4.678.
En la ecuación de la recta 4.631.
En la función de tendencia 4.5868982 redondeando a 4.587.
V. CONCLUSIONES
❖ Se llegó a conocer cómo manejar el espectrofotómetro de manera adecuada.
❖ Se entendió correctamente las aplicaciones que se le da al espectrofotómetro.
❖ Se utilizó la ley de Lambert-Beer durante el procedimiento para llegar a
emplear de forma adecuada el espectrofotómetro.
❖ Se definió la curva de calibración y el factor de calibración utilizando la solución
de azul de metileno 1 mg/dL.
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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