FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA DE MEDICINA HUMANA
Curso
Bioquímica
Título
ESPECTROFOTOMETRÍA
Integrantes
100047911 Tello Padilla, Mayra Alejandra
100045008 De La Cruz Huayhuas, Nicole Xiomara
100066865 Torres Huaman,Melany Brigeth
100064340 Manrique de Lara De La Torre, Diego
100066875 Sanchez Paucar, Rebeca Madeleine
100054164 Polanco Yauris, Valerie
100066264 Puente Trujillo ,Diana Marleny
Sección
3C-Teoría
3C1-Práctica
Docente: MARCELO RODRIGUEZ,ALVARO JULIAN
LIMA - PERÚ
2020 - 2
Introducción
El Espectrofotómetro es un instrumento muy usado en los laboratorios, ya
que es un aparato de análisis de tipo cuantitativo que fortalece la ciencia de
la espectrofotometría, que se encarga de medir la intensidad de la luz que es
absorbida al pasar por una solución.
En ese sentido, tiene la capacidad de medir la magnitud de las ondas, así
como la relación que éstas tienen con los valores de la fotométrica.
Objetivos
[Link] de manera general como manipular el espectrofotómetro
[Link] las aplicaciones del espectrofotómetro
[Link] la ley de Lambert-Beer
[Link] una curva de calibración, usando la solución de azul de metileno.
Materiales y métodos (Procedimiento experimental)
- Pipeta serológica de 5mL terminal y 1mL terminal
- Tubos de ensayo de 12 x 75 cm (solo 4 mL)
-Tubos de ensayo de 13 x 100 (tope de 5 mL) (primer experimento)
- Cubetas de plástico (1 mL de agua)
-Solución de azul de metileno 1mg/dL frasco 100mL
-Espectrofotómetro
-Micropipeta 100-1000 µL y/o de 5-50µL
-Cubetas para espectrofotometría
-Puntas descartables respectivas
Procedimiento experimental
[Link] el pico de máxima absorción del azul de metileno
1. Primero,adicionamos 4 mL de agua (se agrega con una pipeta serológica de 5mL
terminal)
[Link]és,adicionamos 1 mL de solución de azul de metileno 1mg/dL (pipeta
serológica de 1mL terminal)
[Link], mezclamos
4. Luego,realizamos lecturas (realizando tablas para colocar datos obtenidos a las
diferentes longitudes de ondas.
Longitu
d de 560 580 600 620 640 660 680 700
onda nm nm nm nm nm nm nm nm
(nm)
0.077 0.101 0.195 0.231 0.292 0.088 0.022
Lectura 0.040
(abs)
NOTA: Antes de medir siempre poner 0 de absorbancia y 100% de transmitancia.
El blanco será el agua destilada.
Se coloca la longitud de onda, luego seleccionas blanco colocas el tubo, de ahí se
selecciona la muestra y nos da una absorbancia. Luego se cambia la longitud de
onda, se pasa el blanco, luego la muestra. Y así con los demás.
[Link] con el procedimiento experimental debemos realizar una gráfica en el
papel milimetrado, en donde en el eje de las ordenadas se colocan las Abs (eje Y) y
en el eje de las abscisas las longitudes de ondas (eje X).
[Link] determinamos el pico con máxima absorción en función de las
longitudes de ondas.
[Link]ón de una curva de calibración
1. Identificamos los tubos de ensayo (13 x 100) (1 a 5)
Nota: todo se lee a 660 nm.
[Link] último, realice la curva de calibración en papel milimetrado
Falta la gráfica x2
Conclusión
-Las leyes de Lambert y Beer demuestra que la propiedad de una sustancia para absorber
radiación de una determinada longitud onda es dependiente de su estructura química
mediante su propia ecuación química
-Para encontrar la concentración de una sustancia problema se debe multiplicar el factor de
calibración por la absorbancia del problema .
-Para determinar la concentración de una sustancia se hace uso del factor de calibración o
de una curva de calibración. En el eje de abcisas estarán las concentraciones de la
sustancia y en el eje de ordenadas la absorbancia
Recomendaciones
-Antes de utilizar el espectrofotómetro es indispensable realizar rutinas básicas de
calibración para asegurarnos que el aparato proporcione datos y lecturas confiables.
- Asegúrese de que las cubetas estén limpias y libres de ralladuras,esto debe
hacerse cada vez que va a usarse el espectrofotómetro.
Referencias
