Técnicas de siembra
Ángela Álvarez Coral; diego Jiménez
Universidad De Nariño - Facultad De Ciencias Exactas Y Naturales
diegofer1414@hotmail.com, angevanne02@gmail.com.
Introducción
La inoculación o siembra es poner en
contacto los microorganismos o la
muestra bacteriológica con los medios
de cultivo. Hay diferentes métodos,
dependiendo del objetivo que se persiga
con la siembra por ejemplo:
Siembra para inoculación: se puede
inocular para medio líquido o para medio
solido, se toma una pequeña porción de
la muestra y se la dispersa en el medio
de cultivo.
Siembra para aislamiento: se utiliza para
obtener cultivos puros, se siembra en
cajas de Petri que contienen medios de
cultivos sólidos, siembra por estría
múltiple: es en general el método mas
útil de sembrar en caja, se toma una
muestra del cultivo de microorganismos y
se extiende sobre un área pequeña de la
superficie de la placa con agar nutritivo,
en forma de estrías muy juntas, pero sin
hacer presión para no dañar el agar.
Técnica de los cuatro cuadrantes: Se
divide la placa en cuatro cuadrantes, se
toma el inoculo y se siembra
consecutivamente en 1-2-3-4.Incubar, en
el cuarto cuadrante, al menos,
obtendríamos colonias aisladas.
Siembra por agotamiento: Se realiza una
descarga y se realiza estría por toda la
placa. Existen variadas técnicas de
siembra que permiten llevar a cabo los
objetivos de la práctica los que se
utilizaron para esta practica fueron
anteriormente mencionados.
En la naturaleza los microorganismos se
encuentran formando poblaciones
mixtas, esto quiere decir que cada sepa
se encuentra en un lugar con otras sepas
o clases de microorganismos, esto se
convierte en un problema cuando se
requiere estudiar un microrganismo en
específico, y en realidad, si se quiere
caracterizar completamente a un
organismo microscópico en particular se
lo debe hacer investigando sepas
aisladas, es decir, sepas que sean solo
de ese microrganismo.
Objetivos.
- realizar distintos métodos de cultivo de
microorganismos.
- Reconocer el medio adecuado para
cada microorganismos
-Identificar y describir todas las colonias
presentes en los medios de cultivo, así
como también en los tubos de ensayo
MATERIALES Y MÉTODOS
Se limpió y esterilizó el área de trabajo,
se prendió los mecheros, se ajustó la
flama hasta que se presentó un cono
azul bien marcado.
a) Siembra en medio líquido: caldo
tioglicolato.
Se transfirió asépticamente con el asa de
argolla o redonda, una pequeña muestra
de los microorganismos, desde la caja
que contenía muestra nasofaríngea
(estafilococos) hasta el tubo con medio
de cultivo estéril. Se sumergió el asa en
el líquido y se agitó para desprender y
diluir la muestra.
b) Siembra en medio semisólido: (SIM ó
MIO) Cualquier medio de movilidad.
Esta técnica se llevó a cabo con un asa
recta esterilizada, con el cual se tomó la
muestra de la caja que contenía material
nasofaríngeo; el medio quedó inoculado
cuando se introdujo el asa en
profundidad hasta el fondo del tubo,
retirándola posteriormente por la misma
trayectoria utilizada anteriormente.
c) Técnicas de estriado: Estriado simple:
EMB ó McConkey (cualquier medio
selectivo).
Se esterilizó el asa de siembra en argolla
y se tomó la parte de la caja de Petri que
contenía el medio de cultivo sembrado,
que en este caso es estreptococos, se
realizo una siembra en estría simple el
cual consiste en distribuir por todo el
medio la muestra mediante un balanceo
sucesivo y rápido de la muñeca.
d) Siembra para aislamiento por estría
(cuadrantes): agar sangre.
Se esterilizó el asa, se dejó enfriar y se
tomó una colonia de la caja problema, se
Resultados y discusión.
Se examinó cada una de las cajas Petri
y se contó el número de colonias
desarrolladas, obteniéndose los
siguientes resultados:
1-siembra de estriado simple en caja
con agar sangre, con muestra de
estreptococos: se contó un total de 3
colonias; el cual presentaron las
siguientes características:
sembró sobre un extremo de la caja a
preparar trazando una estría, y se volvió
a quemar el asa para evitar una mayor
carga bacteriana. Seguidamente se
estrió el segundo plano perpendicular al
primer plano realizado y se repitió de la
misma manera con el ultimo estriado,
logrando completar todo el espacio de la
placa.
e) Siembra en agar inclinado: (TSI).
Se tomó una colonia del cultivo puro con
el asa recta previamente esterilizada, se
destapó el tubo con agar inclinado y se
flameó la boca y se introdujó el asa sin
tocar las paredes del tubo, se pico el
fondo y se sacó el asa deslizándola
suavemente por la superficie en zig –
zag.
f) Siembra masiva (antibiograma):
Mueller Hinton (MH).
a) disco-placa. Con este sistema se
puede probar la eficacia de varios
antimicrobianos al mismo tiempo
realizando una siembra de una
suspensión bacteriana, con un inóculo
normalizado sobre la superficie de un
medio sólido, colocando sobre los
mismos discos de papel impregnados de
una cantidad conocida de antibiótico.
Colonia 1: de forma circular, con color
amarillento a verdoso, un aspecto
superficial pulido, consistencia
mantecosa, elevación plana y borde
redondeado.
Colonia 2: de forma rizoide, presentó un
color blanco amarillento, de aspecto
superficial áspero, una consistencia
seca, elevación plana y un borde
filamentoso.
Colonia 3: presentó forma redondeada,
color café oscuro, aspecto superficial con
anillos concéntricos, consistencia fibrosa,
elevación plana y borde redondeado.
Cabe anotar que estas colonias son muy
poco visibles en las fotografías.
El agar sangre aporta muchos factores
de enriquecimiento. Se usa también para
ver la capacidad hemolítica de los
microorganismos patógenos (que es un
factor de virulencia). Observando los
halos hemolíticos alrededor de las
colonias se determina el tipo de
hemólisis que posee: alfa, beta y gamma.
En nuestro caso corresponde a alfa:
halos verdosos (reducción de la
hemoglobina de los glóbulos rojos a
metahemoglobina en el medio)
2-Siembra para aislamiento por estría
(cuadrantes): agar EMB ó McConkey,
con muestra de klebsiella: se contó un
total de 1 colonia, el cual presento la
siguiente característica:
-Colonias grandes planoconvexa,
mucoides, brillantes, forma irregular,
también se observan redondeadas,
bordes ondulados, color rosado claro
Agar MacConkey es un medio de cultivo
específico para bacterias gram negativas
y cepas que fermenten la lactosa. Al
utilizar la lactosa en el medio, bacterias
Lac+ como Escherichia coli, Enterobacter
y Klebsiella producen acidez, lo cual baja
el PH bajo 6,8 lo que tiene como
consecuencia la aparición de colonias de
color rosadas o rojas.
3. siembra en agar manitol salado, con
muestras de Staphylococcus aureus.
Se encontró un total de 1 colonia, la cual
presento las siguientes características:
Tipo de colonia: circular
-Aspecto de la superficie: pulida
-Consistencia: mantecosa
-Elevación: convexa
-Borde: redondeado
El agar manitol salado es un medio de
cultivo altamente selectivo, pues tiene
una alta concentración de cloruro de
sodio (7.5 por ciento) que impide el
crecimiento de la mayoría de las
bacterias, pero tolerada por el grupo de
los estafilococos. Además, el medio
contiene manitol como único
carbohidrato y rojo de fenol como
indicador de PH, cuyo ámbito de viraje
está entre pH 8.4 (rojo) y pH 6.8
(amarillo). Cuando hay producción de
acido a causa de la fermentación del
manitol, las colonias aparecen rodeadas
de un halo amarillo.
4. Siembra masiva (antibiograma):
Mueller Hinton (MH). Con muestra de
Klebsiella.
Para este procedimiento, se trabajó con
tres sensidiscos diferentes los cuales
corresponden a:
1. ENR 5 Enrofloxacin baytril 5mg
2. AML 10 amoxycillin 10mg
3. CL 30 Cephalexin 30 mg
Un concepto importante sobre el que es
necesario insistir es que no se pueden
realizar pruebas de sensibilidad in vitro
con cultivos mixtos, sólo los cultivos
puros proporcionarán resultados válidos
sobre la eficacia de un antibiótico.
La determinación de la Concentración
Inhibidora Mínima (CIM) es la base de la
medida de la sensibilidad de una bacteria
a un determinado antibiótico. La CIM se
define como la menor concentración de
una gama de diluciones de antibiótico
que provoca una inhibición de cualquier
crecimiento bacteriano visible. Es el valor
fundamental de referencia que permite
establecer una escala de actividad del
antibiótico frente a diferentes especies
bacterianas.
Para un determinado antibiótico, una
cepa bacteriana es, según la NCCLS
(National Committee for Clinical
Laboratory Standards):
-Sensible, si existe una buena
probabilidad de éxito terapéutico en el
caso de un tratamiento a la dosis
habitual.
-Resistente, si la probabilidad de éxito
terapéutico es nula o muy reducida. No
es de esperar ningún efecto terapéutico
sea cual fuere el tipo de tratamiento.
-Intermedia, cuando el éxito terapéutico
es imprevisible. Se puede conseguir
efecto terapéutico en ciertas condiciones
(fuertes concentraciones locales o
aumento de la posología).
El resultado final fue que el sensidisco
que inhibió el medio y dio paso a la
formación del halo fue el correspondiente
a ENR Enrofloxacin Baytril 5mg, lo que
indica que esta bacteria es muy sensible
a este antibiótico.
 Staphylococcus intermedius se sitúa en
menos del 0.25 microgramo/ml.
5. Siembra en medio semisólido: (SIM
ó MIO) Cualquier medio de movilidad.
Esta prueba se la realizo para determinar
la movilidad del microorganismo, esta
medio se sembró a partir de muestra
nasofaríngea y se observó en el tubo que
el crecimiento de la bacteria se dio en
mayor cantidad cerca de la superficie del
medio.

6. Siembra en medio líquido: caldo

tioglicolato.
Este medio se sembró a partir de
muestra nasofaríngea, la cual formo una
especie de precipitado en la parte
El Enrofloxacin baytril es un superior del medio con lo cuál se infiere
antimicrobianos del tipo fluoroquinolona que esta bacteria es de carácter aerobio.
presentan un amplio espectro de
actividad tanto contra las bacterias Gram El medio de cultivo, tiene por sus
negativas como las Gram positivas. La componentes la calidad nutricional del
mayoría de los uropatógenos son caldo tripteína soya. Este permite el
aerobios; las fluoroquinolonas son muy desarrollo de una amplia variedad de
eficaces contra ellos. microorganismos, incluidos los
nutricionalmente exigentes. Además, se
Baytril se fija muy poco sobre proteínas observa que las bacterias estrictamente
del plasma, lo cual permite una fácil aerobias, crecen en la parte superior,
penetración a través de varias mientras que las anaerobias facultativas
membranas hasta alcanzar o anaerobias estrictas crecen en las
concentraciones altas en la mayor parte profundidades del medio. Las sustancias
de los tejidos. La concentración reductoras como tioglicolato de sodio y
inhibitoria mínima de baytril para el 90% cisteína proporcionan una anaerobiosis
de los aislados de casi todas las suficiente y debido a los grupos -SH- de
enterobacterias y cepas de
estos compuestos, se neutralizan los
efectos bacteriostáticos de los derivados
mercuriales, arsenicales y de otros
metales pesados. La presencia de una
baja cantidad de agar, retarda la
dispersión de CO2 y O2.
Siembra en agar inclinado - Agar triple
azúcar y hierro (TSI)
El agar triple azúcar hierro, es un medio
nutritivo y diferencial que permite la
identificación de enterobacterias o
bacterias Gram negativas, (en este caso
de Klebsiella) fermentadoras de
carbohidratos, es decir capacidad de
producción de ácido y gas a partir de
glucosa (0,1%), sacarosa (1%) y lactosa
(1%) y como indicador de pH el rojo de
fenol en un único medio. También
permite la detección de la producción de
H2S mediante el tiosulfato de sodio y
sulfato ferroso. En nuestro caso
observamos que presento desarrollo de
colonia en la parte superior del medio.
Conclusiones.
 Mediante esta practica de laboratorio se
logró identificar algunas técnicas de
siembra que permiten identificar y
describir colonias mas especificas
 El antibiograma es una técnica muy útil
para probar la eficacia de varios
antimicrobianos al mismo tiempo
realizando una siembra de una
suspensión bacteriana.
 La siembra en medios diferenciales nos
permite aislar más fácilmente un
microrganismo para su posterior
estudio.
Cuestionario.
1. Cuando tomas un inoculo de un
cultivo bacteriano. ¿por qué es
necesario tocar una parte estéril
del agar con el asa antes de tocar
el crecimiento bacteriano?
El proceso de esterilización del asa
se realiza mediante el calentamiento
de esta en el mechero hasta que el
instrumento alcanza el rojo vivo; para
tomar el inoculo es necesario tocar
con el asa una parte estéril del agar
para enfriarla, ya que la temperatura
del instrumento puede dañar la
integridad de la colonia, haciendo
que las células en esta sufran daños
irreparables y mueran por estrés
físico.
2. ¿Por qué el asa debe ser
flameada antes y después de
todos los procedimientos de
siembra?
El flameado se usa en el asa
bacteriológica por algunos segundos
sobre el instrumento para esterilizar;
se pone el asa sobre el mechero
hasta que se encuentre al rojo vivo.
Este modo de esterilizaciones por los antimicrobianos en especies de
medio de calor seco donde existe la Streptococos.
combustión incompleta de los
BIBLIOGRAFIA.
contaminantes dejando residuos de
carbono sumamente minúsculos.  Manual práctico de microbiología
Carlos Gamazo Ignacio López-
Goñi Ramón DíazElsevier
3. ¿Por qué las placas de agar España, 2005
deben mantenerse invertidas  Manual de Bioseguridad Y
durante la incubación? Control de la Infeccion de
PracticaOdontologicaUNAM 2004
Se mantienen las placas de agar  Rodriguez E. Bacteriología
invertidas para evitar que la General: Principios Y Prácticas de
evaporación causada por el calor Laboratorio, UNAM 2004.
dentro de la estufa caiga en el medio
 http://www.bayersanidadanimal.c
y este pierda su consistencia solida;
om.mx/static/documents/revista_b
las temperaturas usualmente usadas
ayvet/bayvetno.5.pdf
para incubar microorganismos y
 http://www.microinmuno.qb.fcen.u
pueden causar vapores dentro de la
ba.ar/SeminarioAntibioticos.htm
caja son comúnmente 350 a 370.
 http://hdteenpornmovies.com/mus
4. Para realizar el antibiograma a cular-dude-spreading-babe-s-ass-
Streptococos que agar o medio cheeks-while-fucking.html
utilizamos y por qué? 
Para realizar el antibiograma a
Streptococos se utiliza el agar
mueller Hilton que es un medio de
cultivo nutritivo no selectivo que
promueve el desarrollo microbiano.
Por su composición, ha sido
recomendado para ser utilizado en
forma rutinaria en la realización del
antibiograma en medio solido, debido
a que presenta buena productividad
lote a lote en las pruebas de
sensibilidad, su contenido en
inhibidores de sulfonamidas,
trimetoprima y tetraciclina es bajo, la
mayoría de los patógenos
microbianos crece satisfactoriamente
y una gran cantidad de datos
adicionales que han sido evaluados y
avalados usando este medio de
cultivo. Cuando se suplementa con
sangre de carnero al 5% permite
realizar las pruebas de sensibilidad a