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Guía Nº 3: Digestión
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Ingeniería Genética Guía de Ejercicios Nº 3
d- Usted digiere el plásmido pParc con EcoRI para comprobar si tiene sitio de
reconocimiento para dicha enzima. Como resultado, usted encuentra que luego
de una digestión total con EcoRI se generan dos fragmentos: uno de 3150 pb y
otro de 3260 pb. Para determinar la ubicación física de dichos sitios en pParc
usted realiza digestiones dobles totales teniendo los siguientes resultados:
EcoRI-HincII: 1950 pb, 1750 pb, 1200 pb, 1000 pb, 510 pb.
EcoRI-PstI: 2150 pb, 1510 pb, 1050 pb, 1000 pb, 700 pb.
EcoRI-BamHI: 3150 pb, 1450 pb, 1060 pb, 750 pb.
Ladder
pb distancia (cm)
100 3,96
200 3,25 ER Distancia migrada (cm)
300 2,7 PstI 2,93 2,25 1,55
400 2,45 BamHI 3,67 0,72
500 2,1 XhoI 4,26 1,93 1,44
600 1,8 PstI-XhoI 4,26 3,67 2,25 1,79
700 1,5 XhoI-BamHI 5,26 4,26 1,93 1,55
800 1,3 PstI-BamHI 3,67 2,93 2,25 1,93
900 1,1
1000 0,8
1400 0,2
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Ingeniería Genética Guía de Ejercicios Nº 3
3) El DNA del plásmido pHUB1 es circular, de cadena doble y tiene 5,7 kpb. Este
plásmido lleva un gen cuyo producto proteico confiere resistencia a la bacteria
huésped al antibiótico tetraciclina (tetR). Además, este cccdsDNA tiene un sitio único
de corte para las enzimas de restricción, EcoRI, HpaI, BamHI, PstI, SalI y BglII. Por
otro lado, el clonado en los sitios BamHI y SalI anula el fenotipo resistencia a
tetraciclina, mientras que esto no sucede cuando se utilizan estrategias basadas en la
apertura con las otras endonucleasas mencionadas.
Con el objetivo de confeccionar el mapa físico del plásmido, se realizaron digestiones
con distintas combinaciones de enzimas de restricción. Los productos de dicha
reacción fueron fragmentos cuyos tamaños se muestran en la tabla.
Con toda esta información, dibuje el mapa correspondiente al plásmido pHUB1.