“AÑO DE LA DIVERSIFICACIÒN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA

EDUCACIÒN”.

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

TEMA: TÈCNICAS DE SIEMBRA, ESTUDIO DEL DESARROLLO BACTERIANO EN MEDIOS

LÌQUIDOS, SEMISOÒLIDOS Y SÒLIDOS

DOCENTE: Dra. GLORIA RUIZ SIERRA

CURSO: MICROBIOLOGÌA GENERAL

SECCIÓN: FB7M1

CICLO: VII

INTEGRANTES:

 BARZOLA MONTERO KATHERINE

 CARDENAS CAHUANA LIZ
 CERNA CHAVARRIA JENNY
 COCHACHI BASTERES SHEILA BRENDA
 PALOMINO PILLACA MARGOT
 PAREDES CASABLANCA ALEXIS
 CACERES GARCIA FRANK DIEGO

FECHA DE ENTREGA: 20 DE ABRIL DEL 2015

LIMA-PERÚ
2015
 INTRODUCCIÓN

Los microorganismos tienen muchas características que los hacen

"organismos modelo" ideales. Son pequeños, por lo cual no consumen
muchos recursos, el primer paso para proceder a su estudio es el
aislamiento, es decir la separación de cada uno de los posibles
integrantes microbianos de la muestra.

Existen diversos métodos para conseguir esta separación, la mayoría

de ellos basados en la inmovilización de las células microbianas en la
superficie de los medios de cultivo sólidos. Al depositar una célula
bacteriana o una levadura en un punto del medio de cultivo, ésta
quedará inmovilizada en ese punto y en él se reproducirá por
absorción de los nutrientes del medio. Las nuevas células generadas
permanecerán igualmente inmóviles y tras sucesivas generaciones
conformarán lo que denominamos una "colonia" que no es más que un
montón de células derivadas de una sola célula madre inicial, es decir,
un clon de la bacteria o levadura depositada al sembrar. Esta colonia
es visible al ojo humano y presenta diferentes características según el
microorganismo que la genera. Esto nos permite distinguir las
diferentes poblaciones microbianas que se encuentran en la muestra
sembrada l, a estos cultivos los consideraremos "puros" por poseer un
sólo tipo de microorganismo.
MARCO TEORÌCO
2.1 MÉTODOS DE SIEMBRA

El método de siembra a emplear dependerá de los objetivos que se pretendan

alcanzar con el cultivo, ya que en ocasiones se requiere que el desarrollo del
microorganismo se produzca de forma masiva, mientras que en otras resulta
indispensables que las colonias queden aisladas o que las manifestaciones del
metabolismo tengan lugar con tensiones reducidas o privadas de oxígeno, los
métodos de siembra más empleados son los siguientes:
 Siembra por estrías.
 Siembra por punción.
 Siembra volumétrica.
 Siembra masiva.

Siempre que se utilicen instrumentos de siembra de platino o nicrón, deben ser

calentados en la llama del mechero hasta el rojo vivo, antes y después de realizar la
siembra, con el objetivo de destruir a los microorganismos contaminantes de la
superficie del instrumento.
Con independencia del tipo de medio y el método de siembra a emplear ésta debe
realizarse en las proximidades de la llama del mechero y a que el calor emanado
reduce el número de microorganismos presentes en sus inmediaciones, lo cual es
utilizado como un recurso a favor del
proceder aséptico.
SIEMBRA POR ESTRÍAS
Este método de siembra se realiza sobre la superficie de los medios de cultivo sólidos
distribuidos en placas de "Petry" o en tubos de ensayo solidificados en forma de
cuña.(Slam)
Instrumentos de siembra a emplear.
Para la siembra por estría se utiliza el asa de platino o el hisopo. En algunas
ocasiones, como explicaremos más adelante, se utilizan ambos instrumentos en la
misma siembra.

PROCEDIMIENTO
La técnica para el aislamiento comienza preparando un inóculo de siembra, que es la
deposición de una pequeña porción de la muestra en el medio o en los medios de
cultivo adecuado, en función de las especies microbianas que se espera encontrar.
Por eso existen distintos métodos o tipos de siembra, en función de la muestra de
partida, del medio en el que se siembra y de la finalidad del estudio. Describiremos la
siembra para inoculación y la siembra para aislamiento.
- Siembra para inoculación: La inoculación consiste en tomar una pequeña porción de
la muestra y diluirla para dispersarla y que crezca con más facilidad en el medio de
cultivo. Se puede inocular en medio líquido o en medio sólido.
- Siembra para aislamiento: La finalidad de este tipo de siembras es la de obtener
cultivos puros. Se siembra en placa de Petri que contienen medios de cultivo sólidos.
Existen varios tipos de siembras para aislamiento: Siembra en estría o zig-zag,
siembra por estría múltiple, siembra de los cuatro cuadrantes, siembra de los tres
giros.
LA OBSERVACIÓN
Para estudiar la forma y la movilidad de los microorganismos, es necesario
observarlos mientras están vivos. Además, los cultivos que han de estudiarse han de
ser recientes - jóvenes- ya que los microbios de los cultivos antiguos -viejos- pierden
movilidad. Las técnicas utilizadas para la observación son el examen en fresco, la
coloración y la tinción.
- Examen en fresco: Pueden seguirse dos métodos:
* Método de la gota pendiente.
* Método de la cámara húmeda
CUANDO LA MUESTRA ES TOMADA CON HISOPO.
Si la siembra se va a producir en una cuña de agar, se procede en forma similar que la
siembra con asa en este tipo de medio de cultivo.

Si la siembra se fuera a producir en medios sólidos en placas, el primer segmento se

hace con el mismo hisopo con que se tomó la muestra y los restantes se realizan con
asa estéril, para lograr una diseminación por agotamiento, que posibilite el desarrollo
aislado en los últimos segmentos del microorganismo en estudio. Otra variante es la
diseminación cruzada, en este caso, en lugar de hacer un primer segmento en zig zig
con el hisopo, se procede a trazar en el centro de la plaza una letra "Z" y a
continuación con el asa esteril se procede a deslizarse con un movimiento
ondulatorio sobre la "Z".
SIEMBRA POR DISEMINACIÓN CRUZADA:
a) Trazar con el hisopo que contiene el inóculo una "Z"en la superficie del medio.
b) Completar la siembra con un asa de platino estéril, imprimiendo movimientos
ondulatorios sobre la "Z"
SIEMBRA POR PUNCIÓN
Como es obvio, el instrumento de siembra a emplear será la aguja de platino y el
medio de cultivo sólido, generalmente, en tubo de ensayo. Las manipulaciones y la
observancia de las precauciones de asepsia, son similares que cuando se utiliza el asa.
La particularidad que tiene este método, es que la aguja (con el inoculo) debe
atravesar perpendicularmente el medio de cultivo.
SIEMBRA VOLUMÉTRICA
Este método de siembra consiste en sembrar una muestra liquida cuyo volumen no
puede ser predeterminado, en medio de cultivo sólidos o líquidos. Por ejemplo: En las
muestras de exudado vaginal tomadas con pipetas de Pasteur, no puede
determinarse el volumen, ya que este tipo de pipeta carece de escala de graduación,
sin embargo, la orina empleadas en el urocultivo o la sangre para el hemocultivo se
puede determinar con pipeta o jeringuilla respectivamente el volumen que será
sembrado.
SIEMBRA MASIVA
Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la espátula de
Driglaski. En este caso la gota de muestra liquida se esparce con la espátula por toda
la superficie del medio de cultivo sólido imprimiéndo un movimiento en espiral. La
siembra masiva también se puede realizar con un hisopo grueso embebido de un
cultivo liquido, procediendo a su deslizamiento sobre toda la superficie de una placa
de agar.
OBJETIVOS

 Aplicar la técnica adecuada para preparar el área de trabajo y evitar

contaminaciones.
  Seleccionar y aplicar las técnicas de siembra adecuadas para alcanzar
propósitos específicos.
 Identificar el uso de medios de cultivo de acuerdo al microorganismo a
estudiar.
 Interiorizar al alumno en el reconocimiento de los materiales empleados en la
siembra de microorganismos.
3.2 COMPETENCIAS

 Realiza técnicas de siembra para su cultivo y aislamiento

 Aplica las técnicas de aislamiento hasta la obtención de cultivos puros
 Describe sus observaciones usando la terminología técnica apropiada

3.3 MATERIALES Y EQUIPOS

A) Tecnicas de siembra en medios liquidos, semisólidos y solidos:

- Placas petro con agar TSA

- Tubos con agar inclinado SIM y TSA
- Tubos con caldo TSB
- Cultivo de microorganismos

B) Desarrollo bacteriano:

- Cultivos proporcionados por la profesora sembrados en los distintos medios

3.4 PROCEDIMIENTO

a) Técnicas de siembra en medios líquidos, semisólidos y sólidos:

- Con el asa en aro previamente esterilizada, tomar una asada del cultivo de microorganismos, y
sembrar por el método de dispersión y agotamiento en las placas de TSA.
- Con el asa en punta previamente esterilizada, tomar el inoculo del cultivo de bacterias y sembrar
en agar TSI, por el método de puntura.

- Con el asa en aro, tomar el inoculo del cultivo bacteriano y sembrar en el tubo con agar en pico flauta o
plano inclinado, por el método de estría.

- Con el asa en aro previamente esterilizada tomar una asada del cultivo, y sembrar por el método
de inoculación en el tubo con TSB.
b)
Desarrollo bacteriano
Efectuar la lectura de los cultivos proporcionados y observar. Tener sumo cuidado de no sacudir
los cultivos en caldo ya que esto puede trastornar los crecimientos superficiales; describir.
3.5 RESULTADOS

a) MEDIOS SOLIDOS

EMB 29 unidades formadoras de colonias en toda la placa

17 unidades formadoras de colonias en toda la placa

CARACTERISTICAS:

Forma: IRREGULAR
Borde: ONDULADO
Elevación: ACUMINADA
Superficie: RUGOSA

TSA (Drigalscky) 55 unidades formadoras de colonia en toda la placa

37 unidades formadoras de colonia en toda la placa
 CARACTERISTICAS:

Forma: CIRCULAR
Borde: ENTERO
Elevación: ELEVADA
Superficie: CREMOSA

b) MEDIOS SEMISÓLIDOS

AGAR INCLINADO SIM Y TSA

Se observo la muestra puntiforme

con un color amarillo pálido

GELATINA

Pudimos observar la formación de

una película en la superficie del
medio de cultivo.

c) MEDIOS LIQUIDOS

CALDOS TSB
 No inoculado

D) DILUCIONES SERIADAS

10-1
159x10-1 = 15,9 Ci= 15,9x1x10 = 159 unidades formadoras
de colonia por mL de la muestra original.
 10-2
106x10-2 = 1,06 Ci= 1,06x1x10 = 10,6 unidades formadoras
de colonia por mL de la muestra original.

10-3
78x10-3 = 0,078 Ci= 0,078x1x10 = 0,78 unidades formadoras
de colonia por mL de la muestra original.

DISCUSION

En cuanto a la elección del tipo de técnica de sembrado es importante; además

utilizar el adecuado para cada microorganismos tener las medidas preventivas
adecuadas esto quiere decir, contar con todas las herramientas que nos van a
permitir un correcto sembrado en el medio indicado sin que se corra el riesgo de que
nuestros resultados se puedan alterar por una mala práctica.
Como por ejemplo el no utilizar guantes y mascarilla, y además de realizar la técnica
lo más cerca, posible a la fuente de calor que es el mechero bunsen en el laboratorio
(se recomienda a 30 cm como máximo) la cual con el flameado van a esterilizar
nuestra asa en aro y así reducir la posibilidad de contaminación.
En cuanto en la técnica por agotamiento parece ser la más fácil y cómoda de realizar,
pues una vez controlada el problema de la cantidad de fuerza empleada para así no
dañar el medio, resulta muy fácil la reproducción de estrías, cuando se realicen la
inoculación en el medio de cultivo en placas.
En cuanto a la siembra en tubos resulta más fácil de reproducir la de picadura, en la
que solo se introduce en forma vertical, en comparación a la de siembra por
profundidad, que implica un proceso de inclinación para llevar la muestra hasta el
fondo.
CONCLUSIONES

 Las cepas de gérmenes sembradas dependiendo del medio en que se siembren

darán distintas formas.
  Para placas Petri se siembra con asas en forma de aro, en cambio para tubos se
usa el asa en punta.

 todos los medios deben de estar en placa deben encubarse en forma invertida
en la estufa.

 los colores que presentan las colonias en las placas es debido a los indicadores
de ph que estas poseen.

 se concluye que la siembra bacteriana por resiembra o repique es cuando se

desea mantener una capa y mantener activo el microorganismo

 se concluye que el sembrado por aislamiento nos sirve cuando hay mezcla de
microorganismo y deseamos separar una especie bacteriana.
CUESTIONARIO
1. ¿CON QUÉ PROPÓSITO SE EMPLEAN CADA UNA DE LAS DIFERENTES
TÉCNICAS DE SIEMBRA?

Con la finalidad de obtener colonias aisladas de gérmenes, para su posterior

identificación y estudio bacteriológico, en importante que estas desarrollen bien
para poder visualizarlas y repicarlas, guardarlas o realizar estudios
complementario de identificación bioquímica, teniendo en cuenta que los cultivos
se dividen en cultivos primarios, de repique , de identificación, de enriquecimiento,
etc..

Por estrías: para obtener colonias separadas

Por inoculación: La inoculación consiste en tomar una pequeña porción de la

muestra y diluirla para dispersarla y que crezca con más facilidad en el medio de
cultivo. Se puede inocular en medio líquido o en medio sólido.

Por agotamiento: Se espera que la cantidad del inoculo sea lo suficientemente

bajo como para que se depositen células aisladas y distanciadas en la superficie
del agar de las cuales surjan, tras incubar, colonias aisladas.

2. ¿DESCRIBE LAS CARACTERISTICAS DEL CRECIMIENTO DE CADA UNO

DE LOS CULTIVOS BACTERIANOS PROPORCIONADOS EN LA PRÀCTICA?

AGAR EMB
Es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de
rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales.
 Una vez incubado se observó un precipitado negro en forma de puntos y una
coloración vede metálico indicando que la especie cultivada fue el E. coli.
Tiene la capacidad de formar colonias y de fermentar lactosa en este medio
de cultivo en condiciones de PH acido.
Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.
Placas preparadas: color purpura
La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color
naranja.
El color purpura se restaura por agitación

TSI AGAR
Medio universalmente empleado para la diferenciación de Enterobacterias.
Por fermentación de azucares, se producen ácidos que detectan por medio
del indicador rojo de fenol.
Medio preparado: rojo
Se emplea para detectar producción del ácido sulfhídrico.
La aparición de burbujas en el taco indica que la fermentación se ha
Efectuado con producción de gas.
AGAR MANITOL
Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y
diferenciación de estafilococos.
Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patogénicos a partir de
muestras clínicas, alimentos, productos cosméticos y otros.
Medio preparado: rojo.

3. Describe el método de siembra por incorporación y señala en

qué casos se emplea.

Consiste en incorporar al agar fundido el inoculo para poder realizar

un recuento de colonias o un antibiograma, para realizar crecimientos
anaeróbicos.

SIEMBRA POR INCORPORACIÓN

VENTAJAS DESVENTAJAS
Menor error en el recuento Dificultad para subcultivar
Mejor aprovechamiento de nutrientes
por parte de los microorganismos Difícil visualización de colonias
 Se puede utilizar para el recuento de La T° del agar puede afectar a ciertos
organismos anaerobios. microorganismos.

BIBLIOGRAFÍA

1. Archundia García, Abel (1997). «Capítulo 4:

Esterilización y antisépticos». Educación quirúrgica para el
estudiante de ciencias de salud. México: Méndez-editores. pp.
81–109. ISBN 968-6596-20-8. OCLC 39719626. «ISBN
9789686596205»
2. Levinson,W.E Jawetz,E Microbiología e Inmunología,
ºed. Editorial El Manual Moderno. México,2000
3. Madigan, M. T.; Martinko, J. M.; Parker, J.: Brook
Biología de los Microorganismos. 10 ed, Madrid Prentice Hall
Iberia., 1999.
4.- Prescott L/ Harley J ,/ Klein D 576/P 85 2000
Madrid