Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
En Placa
1. Siembra por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre
el mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este método se
utiliza para microorganismos aerobios.
2. Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por inmersión. Una
vez solidificado el medio se vierte una cantidad extra de medio necesaria para
cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.). Este método se utiliza para
microorganismos anaerobios facultativos y microaerofílicos.
3. Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo
fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo. Con ayuda
de una espátula de Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción total por
el medio de cultivo. Este tipo de siembra se recomienda para microorganismos
aerobios estrictos.
4. Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido
y se deja solidificar.
Existen distintas técnicas para la siembra en estrías, el objeto es obtener
colonias aisladas.
En Tubo
1. Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el
caldo simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del
asa cargada con el material bacteriológico, se agita, con movimientos
moderados.
2. Siembras por estrías en superficie: Se siembra el material en la superficie del
agar inclinado en un tubo de ensayo, allí se extiende por toda la superficie con
el asa bacteriológica, previamente esterilizada y cargada con el material a
sembrar, haciendo estrías no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se
inicia por la parte más profunda de la superficie inclinada y se termina la estría
en la parte más cerca de la boca del tubo.
3. Siembra por punción: Como es obvio, el instrumento de siembra a emplear será
la aguja de platino y el medio de cultivo sólido, generalmente, en tubo de
ensayo. Las manipulaciones y la observancia de las precauciones de asepsia, son
similares que cuando se utiliza el asa. La particularidad que tiene este método,
es que la aguja (con el inoculo) debe atravesar perpendicularmente el medio de
cultivo.
En placa
1. Técnica de siembra por estría en placa: Es el método más fácil y el más usado
para obtener cultivos axénicos. Para ello, con un asa de siembra se toma una
muestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre la
superficie de un medio sólido preparado en una placa Petri (a las placas Petri
también se les denomina simplemente placas). Conforme se van haciendo
estrías en zigzag con el asa, cada vez se van depositando en la superficie del
medio menos microorganismos. A continuación, se flamea el asa, se toca en la
región donde se han realizado las últimas estrías y se continúa la siembra con la
misma técnica, en la superficie de medio sin sembrar aún. Repitiendo este
proceso varias veces se logra separar células individuales. A continuación, las
placas se incuban en un lugar adecuado, permitiendo que las células aisladas
experimenten un número suficiente de divisiones para formar colonias visibles.
Aunque cada colonia posiblemente representa un clon derivado de una sola
célula, no podemos asegurarlo. Quizás, dos células quedaron depositadas tan
juntas que han originado una única colonia mixta. Por tanto, para asegurarnos
de que hemos obtenido un cultivo axénico, conviene repetir el procedimiento a
partir de una colonia bien aislada en la primera placa. Las colonias que se
desarrollen la segunda vez, serán, casi con toda seguridad, cultivos axénicos.
2. Técnicas de extensión en placa: Las muestras diluidas se siembran directamente
en la superficie de la placa de agar, extendiéndolas con ayuda de un asa de
Drigalsky de cristal estéril. La suspensión se absorbe en el agar, dejando las
células microbianas sobre la superficie. En ambas técnicas las placas se incuban
hasta la aparición de las colonias. Como en el método de siembra por estría, no
existe la seguridad de que las colonias que aparecen en las placas sembradas
por extensión o en el agar solidificado sembrado por el método del vertido en
placas sean cultivos axénicos hasta que se repita el proceso. Las dos técnicas de
siembra por dilución presentan la ventaja de que permiten obtener un mayor
número de colonias aisladas que el método de siembra por estría, por tanto, se
eligen cuando se ha de seleccionar una cepa a partir de una mezcla con varios
tipos de microorganismos.
En tubo
3. Siembra por picadura: Asa recta, tomar la muestra, sembrar en agar semisólido,
en el tubo de ensayo hasta que la muestra quede bien impregnada al agar.
4. Siembra por vertido en placa: Diluciones en varios tubos, pipeta 1cc de muestra o
dilución, agregar tubo de ensayo estéril, se agrega medio licuado, mantener a
55°C, movimientos rotatorios, solidificar.
AISLAMIENTO DE MICROORGNISMOS
Técnicas de aislamiento
I. Métodos generales
Se basan en las características del germen que se quiere aislar. Hay que tener en cuenta
que puede haber gérmenes que poseen idénticos comportamientos frente a un mismo
agente físico o químico.