Siembra e identificación de microorganismos mesófilos

en ambientes y superficies

Resumen
Para la siembra de microorganismos mesófilos se dispuso de 3 cajas de Petri con Agar Plate
Count las cuales se expusieron a diferentes ambientes y superficies para posteriormente
observar el crecimiento de los microorganismos presentes en estos medios; la primera caja
de Petri que se tomó, se llevó a un ambiente determinado, en este caso el baño, más
específicamente la zona abajo del inodoro, esto para determinar la presencia de
microorganismos mesófilos que pueden estar presentes en este ambiente, seguidamente en
otra caja de Petri se realizó la inoculación de los microorganismos mesófilos presentes en
tejidos vivos, en este caso un pie (planta, dedos y uñas), finalmente se tomó la última caja
de Petri para inocular los microorganismos mesófilos presentes en una superficie, para este
caso se usó un goupillón (cepillo para cejas), todas las cajas se pusieron a incubar durante
48 horas a una temperatura entre 30 – 37 °C ya que esta es la temperatura optima de
desarrollo para microorganismos mesófilos.

Pasados las 48 horas se procedió a la observación e identificación de los microorganismos

que crecieron en cada una de las cajas, observando que en la primera se desarrollaron 5
tipos de colonias pero muy poca cantidad, en la segunda se observaron también 5 tipos de
colonia distribuidas por casi toda la caja y en la última se observaron igualmente 5 tipos de
colonias en una cantidad más moderada, seguidamente se identificaron las características
individuales de cada colonia formada y se realizó la tinción a las colonias que se
consideraron más interesantes; una vez realizado el procedimiento de tinción y secado de
las placas, estas fueron llevadas al microscopio para la identificación de los
microorganismos, los cuales se podían clasificar como cocos o bacilos, gram positivos o
gram negativos.

Palabras clave: Siembra, inoculación, tinción, microorganismos mesófilos, agar, ambiente,

superficie, tejidos vivos, características, colonias, identificación, cocos, bacilos, gram
positivos, gram negativos, microscopio.

1. Introducción
Los microorganismos mesófilos son
organismos que se encuentran en casi
todos los productos, esto debido a que
su temperatura de desarrollo (30 ºC)
es la temperatura óptima para muchas
de las formas de vida libre; además se
encuentran ampliamente difundidas
en el medio ambiente.
El medio de cultivo empleado para
esta siembra fue Agar Plate Count
(PCA) o agar para recuento en placa,
el cual, es un medio de crecimiento
microbiológico comúnmente utilizado
para evaluar o monitorear el
crecimiento bacteriano "total" o viable
de una muestra. PCA no es un medio
selectivo.  zag sobre toda la superficie del
La siembra o inoculación es la
introducir artificial de una porción de
muestra (inóculo) en un medio
adecuado, con el fin de iniciar un
cultivo microbiano, para su desarrollo
y multiplicación.
Las poblaciones microbianas son
demasiado diversas y se agrupan o
clasifican dependiendo de diferentes
factores, uno de ellos es la
temperatura de crecimiento y para las
formas mesófilas se tiene que lo hacen
mejor a temperaturas entre 30 - 37ºC.
Existen diferentes tipos de siembra de
acuerdo con el medio de cultivo
utilizado y los requerimientos del
microorganismo a estudiar.
En este caso el procedimiento se lleva
a cabo de dos formas:
1. Mediante la exposición del medio
de cultivo por un tiempo
determinado a un ambiente con
carga microbiana en el aire.
2. Realizando frotis con un hisopo
estéril humedecido con agua
peptona en una superficie inerte o
tejidos vivos (según sea el caso),
seguido de la inoculación en el
medio de cultivo realizando una
estría en sentido vertical en el
centro del agar, y posteriormente,
realizando estrías en forma de zig-
medio de cultivo.
El agua peptona tamponada es un
medio de cultivo que sirve como
diluyente y permite el crecimiento de
microorganismos.
La identificación de microorganismos
se realiza inicialmente observando las
características de las colonias
formadas que son conjuntos de
bacterias de la misma especie que se
acumulan de forma característica
cuando encuentran recursos
favorables para su reproducción.
Pueden distinguirse las especies (entre
otras características); por la forma,
tamaño, color de estas colonias.
 Por último, se realiza tinción a las
bacterias tomando las colonias
consideradas mas interesantes para su
posterior observación en el
microscopio e identificación
morfológica.
Las bacterias pueden presentar ciertas
variaciones morfológicas, algunas de
estas son: bacterias esféricas
o cocos, las alargadas o bacilos y las
bacterias curvadas o espirilos que
pueden ser también comas,
espiroquetas y vibrias; y que pueden
clasificarse como grampositivas o
gram negativas.
2. Materiales y métodos
2.1 Microorganismos mesófilos del aire
Inicialmente se tomo la primera caja de
Petri con agar Plate Count, se retiró la
tapa y se expuso a un ambiente, en este
caso el baño de mujeres debajo de un
inodoro durante 15 minutos.
2.2 Microorganismos mesófilos de
tejidos vivos o mucosas
Seguidamente se tomo otra caja de Petri y
cerca al mechero se tomó un hisopo
estéril, se humedeció con agua peptona
0,1 % y se frotó sobre la planta del pie,
dedos y uñas; luego se procedió a
depositar el inoculo realizando una estría
en sentido vertical en el centro del agar, y
posteriormente, realizando estrías en
forma de zig-zag sobre toda la superficie
del medio de cultivo.
2.3 Microorganismos mesófilos de
superficies
Con la última caja de Petri igualmente se
tomo un hisopo estéril, se humedeció con
agua peptona 0,1% cerca al mechero y se
froto sobre una superficie inerte, para este
procedimiento se empleo un goupillón
(cepillo para cejas), finalmente se
deposito el inoculo sobre el agar como se
mencionó en el procedimiento anterior.
Todas las cajas se taparon y se dejaron en
incubación durante 48 horas.
2.4 Identificación de microorganismos
Pasadas las 48 horas se procedió a
observar detenidamente cada una de las
cajas de Petri para identificar las colonias
que crecieron en cada una de estas y así
mismo asignar sus respectivas
características.
1. En la caja #1 (imagen 1)
correspondiente a la exposición en el
baño se observaron 5 colonias
diferentes, este fue un valor bajo
considerando el lugar de exposición, lo
que indica que el baño estaba muy bien
aseado.
2. En la caja #2 (imagen 2)
correspondiente al frotis en tejidos
vivos (pie) se observó una gran
cantidad de colonias distribuidas sobre
toda la superficie de la caja y de las
 cuales se identificaron 5 tipos
diferentes.
3. En la caja #3 (imagen 3)
correspondiente al frotis sobre una
superficie inerte (cepillo para cejas) se
observaron una cantidad moderada de
colonias identificando también 5 tipos
diferentes.
A estas colonias se les realizó un análisis
para determinar sus características las
cuales se registran en la tabla 1.
Finalmente se llevaron al microscopio
para realizar la identificación morfológica
de cada una de las bacterias, para estos
casos fue necesario observar en el
objetivo de 100X para obtener un
correcto resultado, teniendo en cuenta que
para este es necesario emplear aceite de
inmersión ya que este brinda la propiedad
de concentrar la luz cuando esta pasa a
través del objetivo de 100X del
microscopio, aumentando su poder de
resolución.

Para la realización de la tinción se

eligieron 4 colonias consideradas las mas 3. Resultados y discusión
interesantes; una correspondiente a la
exposición al ambiente, una del frotis a Para la siembra de microorganismos
tejidos vivos y dos del frotis a una mesófilos se obtuvieron los siguientes
superficie inerte. resultados después de 48 horas de
realizada:
Para esto se realizó la tinción de gram la
cual consiste en poner una pequeña gota
de agua destilada sobre el centro de un
portaobjetos, seguido se tomó una
pequeña cantidad de la bacteria
empleando un asa de redondel
previamente esterilizada y se esparció
sobre el portaobjetos sin sobrepasar las
marcas realizadas con anterioridad, se fijó
la bacteria secando el portaobjetos con la
llama del mechero. Imagen 1. Exposición al ambiente
Seguido se realizó la tinción agregando 4 (baño).
sustancias: Cristal violeta (1 min), Lugol
(1 min), Alcohol-acetona (30 s) y
Safranina (1 min).

Una vez realizada la tinción, las placas se

introdujeron durante unos minutos en la
incubadora para secar.
 A continuación, se tiene una tabla con las
observaciones realizadas en cada una de
las cajas de Petri.

Tabla 1. Características de las colonias.

Según los resultados registrados en la

Imagen 2. Frotis a tejidos vivos (pie).
tabla 1 se obtuvieron varios tipos de
unidades formadoras de colonias para
cada uno de los lugares analizados las
cuales se clasificaron por tamaño
comparándolas entre ellas mismas, de
estas se tomaron 4 para hacerles tinción y
realizar la identificación morfológica.

A continuación, se mencionan los

Imagen 3. Frotis a superficie inerte
(cepillo para cejas).
resultados obtenidos por la compañera
Magdiris Ospina sobre las características
de las colonias formadas para cada uno de
los lugares que ella analizó; esto para
realizar una comparación de resultados.

Ambiente Características de las colonias Ambiente Características de las colonias

o Super- o
superficie Color Tamaño Forma ficie
Borde superficie Color Tamaño Forma Superficie
Redon- Irregular En el centro
Blanco pequeña Circula Conexa deado Blanco Circulo (Plana
Circular- Redon- Nevera  (Un poco Grande con Convexa)
Crema Media Irregular Cráter deado amarilla) bordes Bordes
Gris Flamen- Redon- ondulados planas
opaco Grande tosa Plana deado Circulares
Baño Trans- Flamen- Flamen-  Cuero Amarillas Pequeñas e Plana
parente Grande tosa Plana tosa Cabelludo y blancas irregulares
Redon- Pequeñas, Amarilla
Rosado chiquita Circular Plana deado Amarilla pero más (Plana
Redon-  Audífonos grande Circular convexa)
Blanco Chiquitas Circular Plana deado - Blanca que la Blanca
Redon- anterior (Plana)
Blanco Pequeñas Circular Convexa deado
Amarillo Redon-
Claro Chiquitas Circular Plana deado
Tabla 2. Características de colonias
Amarillo Redon- Magdiris Ospina.
Pie Claro Pequeñas Circular Convexa deado
Redon- Como se puede observar con los
Crema Media Irregular Plana deado
Anaran- Redon- resultados obtenidos en ambas tablas,
jado Media Circular Plana deado tanto los lugares como las características
Anaran- Flamen- Redon-
jado Media tosa Plana deado
Blanque Redon-
-cina Media Circular Plana deado
Cepillo Blanque Media y Ondu-
-cina Grande Circular Plana lado
para cejas
Amarillo Ondu-
Claro Grande Irregular Plana lado
de las colonias formadas son muy
diferentes y seria lo esperado ya que en
todos los ambientes y superficies hay
gran variedad de microorganismos
presentes.

Continuando con el procedimiento de la Imagen 7. Colonia 4 (Cepillo para cejas).

práctica, se realizó la tinción a las
siguientes colonias:

Imagen 4. Colonia 1 (Baño).

Imagen 8. Tinción de colonias.

Una vez realizada la tinción se procede a

la identificación morfológica de cada una
de las colonias; como se dijo
anteriormente esto se realizó empleando
el objetivo de 100X y los resultados
obtenidos fueron los siguientes:
Imagen 5. Colonia 2 (Pie).

Imagen 9. Morfología colonia 1.

Imagen 6. Colonia 3 (Cepillo para cejas). Esta corresponde a la exposición al
ambiente, en este caso el baño, donde se
observa la presencia de cocos gram - Corynebacterium spp
positivos y gram negativos. - Malasseiza spp

Las bacterias mas comunes que se pueden Bacillus subtilis es una bacteria Gram
encontrar en un baño son Estreptococos y positiva, Catalasa-positiva, aerobio
Estafilococos lo que concuerda con la comúnmente encontrada en el suelo.
morfología obtenida en la identificación. Miembro del Género Bacillus, B. subtilis
tiene la habilidad para formar una
resistente endospora protectora,
permitiéndole tolerar condiciones
ambientalmente extremas.

Según lo mencionado anteriormente se

puede plantear que los bacilos observados
podrían corresponder a este tipo de bacilo
(Bacillus subtilis).
Image
n 10. Morfología colonia 2.

Esta corresponde al frotis de tejidos

vivos, en este caso el pie, donde se
observa la presencia de cocos gram
positivos y bacilos gram positivos con
endosporas.

Los bacilos grampositivos formadores
Imagen 11. Morfología colonia 3.
de esporas son bacterias de los géneros
de Bacillus y Clostridium.
Estos bacilos son universales y, debido a
su capacidad para formar esporas, pueden
vivir en el ambiente por varios años. Los
géneros de Bacillus son aerobio y, los de
Clostridium son anaerobio.

Los microorganismos que forman parte

de la flora normal de los pies son:
- Propionibacterium acnes
- Staphylococcus epidermidis
- Brevibacterium spp
- Bacillus subtilis
- Staphylococcus aureus
- Microoccus spp
Imagen 12. Morfología colonia 4.
Estas corresponden al frotis de una
superficie inerte, en este caso un goupillón
(cepillo para cejas); en ambas colonias se
observaron cocos gram positivos.
Los microorganismos más comunes que
pueden estar presentes en un goupillón
son: Pseudomonas aeruginosa,
Staphylococcus aureus y Candida
albicans; según esta información y los
resultados obtenidos, estos cocos podrían
corresponder a Staphylococcus aureus.
4. Conclusiones
 Se demostró la existencia de
microorganismos en ambientes
naturales ya que en todos los medios
de cultivo se desarrollo el
crecimiento de colonias.
 Se determino que los baños estaban
bien aseados ya que la carga
bacteriana presente en la caja de Petri
expuesta a este ambiente fue mínima.
 Se conoció la importancia de la
clasificación de los microrganismos
según su temperatura optima de
crecimiento.
 Se cumplió con la finalidad de la
practica ya que en los medios de
cultivo de todos los compañeros se
obtuvo crecimiento de
microorganismos.
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