Guía Unificada de Laboratorios Código FLA-23 v.

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Departamento de Bacteriología y Lab. Clínico
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1.Título

Guía 4. Siembras y morfología de colonias bacterianas

2. Objetivo

Aplicar las diferentes técnicas de siembra para el aislamiento, cultivo e identificación de

bacterias y describir los diferentes aspectos de la morfología de las colonias bacterias
como una de las herramientas guía para la identificación.
.

2.1 Objetivos Específicos

- Aplicar las diferentes técnicas de siembra que se emplean para el estudio y

aislamiento de bacterias.
- Relacionar la presentación del medio de cultivo con la técnica de siembra.
- Describir las características de la morfología macroscópica de las bacterias.

3. Marco Teórico

El proceso de colocar las bacterias en medios de cultivo recibe el nombre de siembra,

ésta la podemos realizar a partir de muestras biológicas (orina, pus secreciones, etc.), de
análisis para control de calidad (alimentos, aguas, cosméticos, medicamentos, etc.) o de
un cultivo bacteriano a otro; si la realizamos de un cultivo a otro la denominamos
subcultivo o repique.

Para el estudio de las bacterias es necesario además de conocer su morfología

microscópica conocer su morfología macroscópica a partir de su crecimiento en medios
de cultivo; esta se observa en las colonias bacterianas; adicionalmente es posible evaluar
el comportamiento de ellas frente a los diferentes compuestos nutritivos o proporcionarles
aquellos nutrientes adecuados para favorecer su desarrollo.

Existen técnicas adecuadas para realizar estos cultivos. Algunos elementos importantes
para realizar siembras son: el mechero (de alcohol o de bunsen), el asa bacteriológica
(que puede ser de argolla o recta) y los medios de cultivo ya preparados y atemperados a
37ªC en la incubadora; contando con estos implementos podemos realizar la siembra.

TECNICAS DE SIEMBRA
La técnica más usada en el Laboratorio de Microbiología es la transferencia de
microorganismos de un ambiente a otro con el propósito de cultivarlos. Para determinar
los caracteres de cultivo de las bacterias, es preciso obtenerlas en cultivo axénico, se
entiende por cultivo axénico una población de células, las cuales todas proceden de una
misma célula, para ello existen gran variedad de técnicas.
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TIPOS DE SIEMBRA

1. SIEMBRAS EN CAJAS DE PETRI:

Siembra por Agotamiento:

Es un buen método para el aislamiento de colonias, mediante ella buscamos obtener
colonias separadas a partir de un inóculo.
Para su realización se toma la caja de petri en la palma de la mano (aquella que utilice
con mayor frecuencia) ligeramente inclinada;
con la mano contraria se manipula el escobillón estéril o el asa de argolla previamente
esterilizada por flameado directo a la llama del mechero y se siguen pasos descritos en la
figura 1:

Figura 1 Técnica de siembra por agotamiento

Distribución de cuadrantes

(a)Inicio de la inoculación y distribución de la muestra con asa bacteriológica (b) y (c), distribución de los
cuadrantes 2 y 3 se toca una o dos estrías del cuadrante anterior (d) el cuarto cuadrante se toca una o dos
estrías del cuadrante y se hace la distribución con estrías separadas con la finalidad de obtener colonias
aisladas. Terminada la distribución en cada cuadrante se flamea el asa. Nótese que el procedimiento es en
sentido de las manecillas del reloj.
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Siembra masiva:
Este método es muy utilizado para obtener un gran número de microorganismos. Esta
técnica de siembra utiliza un hisopo el cual se pasa por toda la superficie de la placa en
distintas direcciones y finalmente por el borde para que el crecimiento de los
microorganismos sea total en la superficie de la placa. Figura 2

Figura 2. Siembra masiva

2. SIEMBRA EN TUBOS:
La siembra de medios contenidos en tubos requiere mayor cuidado puesto que un solo
organismo contaminante del aire puede superar en crecimiento al microorganismo de
interés, por lo tanto se deben tener las siguientes precauciones:
 Mantener inclinado el tubo que contiene el cultivo que se va a transferir, de modo
que los microorganismos del aire caigan en las paredes externas del tubo y no en
la boca de éste.
 Las tapas o tapones se deben mantener en la mano contraría a aquella que
contiene el tubo, sosteniéndolos entre el dedo meñique, el anular y el dedo del
corazón. Nunca deben colocarse sobre la mesa de trabajo o algún otro lugar.
 Flamear la boca del tubo.
 Esterilizar el asa.
 Sumergirla en el medio sin tocar las paredes del tubo.
 Enfriarla en una parte del medio.
 Tomar el inóculo con el asa.
 Después de practicar la siembra, esterilizar el asa y flamear nuevamente la boca
del tubo.

CLASES DE SIEMBRA EN TUBO

a. EN MEDIO SOLIDO

- Siembra en estría:
Se realiza en un tubo, con medio sólido inclinado en bisel y deslizando el asa sobre la
superficie de manera que se marquen surcos o estrías. Figura 3.a

- Siembra en picadura:
Se designa con este nombre a la siembra que se realiza con asa recta en tubos con
medios sólidos y semisólidos generalmente sin inclinar. Se realiza introduciendo el asa
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cargada con el microorganismo al medio de cultivo por el centro de la superficie y

llegando con el extremo del asa a la mitad o al fondo del tubo, dependiendo del medio de
cultivo a sembrar. Figura 3.b

- Siembra mixta:
Se realiza igualmente siembra en picadura hasta el fondo del tubo y luego siembra en
estría, deslizando el asa por la superficie en bisel marcando estrías. Figura 3.c

Figura 3. Métodos de siembra en tubo

a. Estría b. Picadura c. Mixta

b. EN MEDIO LÍQUIDOS:
Para transferir material a partir de un medio líquido o sólido a otro líquido, puede usar el
asa bacteriológica o en algunos casos pipetas estériles o en otros escobillones. Si usted
utiliza asas bacteriológicas inocule el asa en el medio líquido haciéndola rotar. Figura 4

Figura 4. Técnica de siembra en tubo

.
Figura 4. (a) Se flamea el asa bacteriológica. (b) se enfría y se recolecta
la muestra. (c) se introduce en el tubo con medio líquido y se gira el asa
para que se desprenda la muestra. (d) se cierra el tubo y se flamea el
asa. El proceso se realiza cerca de la flama del mechero
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NOTA
En cualquier siembra que se realice, se debe marcar previamente las cajas de petri o los
tubos de manera clara, completa, legible, con la identificación respectiva y la fecha.

Para análisis clínico marcar siempre las cajas en la base de la caja de petri. Luego de
realizada la siembra, se debe proporcionar la temperatura y el tiempo adecuado para la
proliferación o crecimiento bacteriano, para ello dispone de la incubadora o en dado caso,
un lugar adecuado a temperatura ambiente. Las cajas de petri se incuban invertidas, si el
inoculo no se ha adsorbido, espere 10 minutos, si este tiempo no es suficiente, incube las
cajas con la tapa hacia arriba por 30 minutos antes de invertirlas. Para impedir que el
agua de condensación que pueda formarse en la tapa de la caja y caiga sobre el medio
dispersando el crecimiento bacteriano y evitando la formación clara de las colonias.

MORFOLOGIA MACROSCÓPICA
Cuando los microorganismos crecen sobre medios de cultivo exhiben diferencias en la
apariencia macroscópica de su crecimiento, estas diferencias llamadas características
macroscópicas son la base para la separación de ellos en grupos taxonómicos. Las
características del cultivo de los microorganismos conocidos son consignadas en
Bergey´s Manual of Systematic Bacteriology y determinadas por el cultivo de los
microorganismos en cajas de petri o en medios líquidos.

CULTIVOS EN MEDIO LÍQUIDO

Son evaluados según su distribución y apariencia del crecimiento como sigue:
1. Turbidez fina uniforme: Crecimiento fino y totalmente disperso.
2. Floculante: crecimiento en agregados escamosos totalmente disperso.
3. Película: crecimiento en la superficie como plataforma, grueso.
4. Sedimento: Concentración del crecimiento en el fondo del caldo; puede ser
granular, escamoso o floculante.

Figura 5. Crecimiento en medio líquido

Turbio Floculento Película Sedimento

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CULTIVOS EN MEDIO SOLIDO (CAJA DE PETRI – SIEMBRA POR AGOTAMIENTO)

Su descripción se realiza de colonias aisladas y se evalúa de la siguiente manera:

a. Tamaño: Grande, mediano, pequeño y puntiforme.
b. Forma: redonda, ovalada, irregular
c. Borde:
* De borde regular: continuo, entero.
* De borde irregular: lobulado, ondulado, dentado, filamentoso, festoneado y
arborescente.
d. Elevación
* No elevada: plana.
* Elevada: convexa, mamelonada o acuminada, umbilicada y papilar
e. Consistencia: Blanda, dura o mucoide.
f. Brillo: brillante u opaco
g. Pigmento: amarillo, rojo, verde, etc.
h. Hemólisis: parcial o alfa; total o beta y no hemólisis. Sólo se informa cuando el
medio de cultivo sembrado es Agar Sangre.

La morfología de las colonias es un parámetro importante en el proceso de identificación

bacteriana siendo las características comunes entre cada género bacteriano. Sin embargo
la morfología puede alterarse por el tiempo de incubación, composición del medio de
cultivo (excesiva desecación o humedad), etc.

Figura 6. Morfología de las colonias bacterianas

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4. Materiales, equipos e Insumos

Equipos:
Incubadora

Materiales:

 Gradillas
 Cinta de enmascarar
 Asas bacteriológicas
 Escobillones estériles
 Bolsas plásticas

5. Reactivos y Medios de cultivo

 Cajas de Agar Nutritivo
 Cajas de Agar Sangre
 Cajas de Agar MacConkey
 Tubo con medio sólido inclinado-TSI
 Tubo con medio semisólido -Motilidad
 Tubo con Caldo Nutritivo
 Cultivos bacterianos

6. Procedimiento
A partir de la cepa bacteriana entregada por el docente:

1. Siembre por agotamiento las cajas de agar nutritivo, Agar sangre y Agar MacConkey.
2. Realice siembra masiva en la caja de Agar nutritivo
3. Siembre por picadura hasta la mitad del tubo un medio semisólido: Motilidad
4. Siembre de manera mixta en un tubo de agar inclinado: TSI
5. Siembre en un tubo de caldo nutritivo.
6. Una vez sembrados los medios de cultivo, realice la incubación a 37°C por 24 horas
7. Describa las características de crecimiento en los tubos (medio líquido, semisólido y
sólido) y en las cajas de acuerdo con lo descrito en el marco teórico de la guía.
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RESULTADOS:

Género y especie bacteriana: ________________________________________________

Presentación del Características de desarrollo Resultados

medio de cultivo y
método siembra
Caldo inoculado con Turbio
asas Floculento
Película
Sedimento
Picadura en medio Características de crecimiento
semisólido Movilidad (positiva o negativa)
Agar inclinado con Forma del crecimiento (perlado o
siembra mixta arborescente)
Color
Consistencia
Siembra por Presencia de colonias separadas
agotamiento en agar Tamaño
nutritivo Forma
Borde
Elevación
Consistencia
Brillo
Pigmento
Siembra por Presencia de colonias separadas
agotamiento en Agar Tamaño
sangre Forma
Borde
Elevación
Consistencia
Brillo
Pigmento
Hemólisis
Siembra por Presencia de colonias separadas
agotamiento en agar Tamaño
MacConkey Forma
Borde
Elevación
Consistencia
Brillo
Pigmento
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7. Nivel de Riesgo

Nivel 2 (Riesgo Medio)

8. Bibliografía

BROOKS Geo F., Batel Janet S., Morse Stephen A., Microbiología Médica de Jawetz,
Melnick y Adelberg. Editorial Manual Moderno. 26ª Edición.2014.
http://veterinaria.uaemex.mx/_docs/607_970_MP%20Bacteriolog%C3%ADa%20y%20Mic
olog%C3%ADa.pdf

9. Anexos

CONSULTA
1. Cuál es el objetivo o finalidad de una siembra por agotamiento?
2. Describa de manera ordenada los pasos a seguir para realizar una siembra.
3. Qué es un inóculo?
4. Para qué procedimientos en microbiología se realizan cultivos por diluciones?