9.

4 Procedimiento

Método Indirecto de Beth Vincent:

1. Colocar una gota de sangre en un portaobjeto.

2. Agregar 1 gt. del suero tipificado anti-A y 1 gt. del suero tipificado anti-B, mezclar y
observar.

Si no hay aglutinación el grupo será CERO.

Si hay aglutinación en la gota de sangre con el suero anti-A será GRUPO A
Si hay aglutinación en la gota de sangre con el suero anti-B: grupo B.
Si hay aglutinación en ambos el grupo será AB.

FACTOR Rh.-
En una lámina de porcelana se coloca 1 gota de sangre mas 1 gta. del anti-Rho (D). Mezclar y
observar.
Si hay aglutinación es Rh positivo.
Si no hay aglutinación es Rh negativo.
B. VARIANTE Du DETERMINACION DEL ANTIGUO Rho DEBIL O D

9.4 Procedimiento

1. Hacer una suspensión globular al 2% en SSF.

2. En un tubo pequeño depositar:
1 gota de suero anti-Rh + 2 gotas de la suspensión globular al 2%.

2. Incubar a 37 oC por 60 minutos para sensibilizar a las células.

4. Sacar el tubo de la incubadora y lavar las células 3 veces en tubo de ensayo llenos de
solución salina hasta cerca del borde del tubo. Decantar completamente después del
último lavado, acercando a la boca del tubo un papel de filtro para absorber el líquido.
(centrifugación a 2,000rpm por 5 minutos)
5. Agregar 2 gotas del suero antihumano de Coombs. Agitar bien el tubo para homogenizar.

6. Centrifugar a 1000 rpm por 1 minuto.

 7. Retirar el tubo y suspender nuevamente las células empaquetas mediante agitación
moderada y examinar si existe aglutinación o no.
Si hay aglutinación: Du es Rh positivo
Si no hay aglutinación: Du es Rh negativo

C. PRUEBA DE COOMBS
9.4 Procedimiento
A. PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA:
Se emplea para detectar isoanticuerpo circulantes en el suero que cubren pero no aglutinan a
los glóbulos suspendidos en solución Salina fisiológica.
La aglutinación solo se produce al tratar los glóbulos recubiertos con suero de Coombs.

1. Prepara suspensión globular al 2% en solución salina fisiológica de la sangre del grupo O

Rh positivo.
2. En un tubo de ensayo: 2 gotas de la solución preparada + 2 gotas del suero de la madre
3. Incubar en B.M. a 37 oC por 60 minutos.
4. Llenar con solución salina fisiológica. Mezclar. Centrifugar a 2000 rpm por 5 minutos.
5. Decantar el sobrenadante. Repetir por 3 veces dicho lavado. Absorber con papel filtro.
6. Al sedimento que queda agregar 2 gotas del suero antihumano de Coombs.
7. Mezclar.
8. Centrifugar a 1000 rpm por 1 minuto.
9. Retirar el tubo y agitar moderadamente a las células.

Examinar el Tubo: Si hay aglutinación POSITIVO (contiene anticuerpos anti-Rh incompleto

o bien anticuerpos cuya especificidad y nombre está determinado por la calidad de
glóbulos empleados).
No hay aglutinación NEGATIVO.

B. PRUEBA DE COOMBS PRUEBA DIRECTA:

Es empleada para detectar anticuerpos que se han fijado en los glóbulos del paciente in vivo,
por ejemplo en la eritroblastosis hemolítica del recién nacido, en ciertas anemias hemolíticas
auto-inmunes y pacientes que hay recibido transfusiones incompatibles.
En los niños no tratados de eritoblastosis fetal, la reacción positiva persiste durante varias
semanas, mientras que en las exanguineo - transfusión va seguida de una negativización a los
pocos días.
1. En un tubo de ensayo se colocan 5 gotas de la sangre en estudio y se llena con solución
fisiológica.
2. Mezclar invirtiendo el tubo varias veces, y centrifugar a 1500 rpm durante 5 minutos.
Decantar el líquido sobrenadante.
3. Repetir el lavado dos veces, retirando cada vez todo el líquido remanente.
4. Luego se prepara una suspensión de hematíes al 2% en SSF.
5. En un tubo se coloca: 1 gota de susp. Globular + 1 gota del suero antiglobulínico
6. Centrifugar 1 minuto a 1000 rpm y observar si hay aglutinación.
La aglutinación en el tubo contenido los hematíes problemas y su ausencia en el tubo testigo
evidencia su sensibilización.
Esta prueba es utilizada para el diagnóstico de la eritroblastosis fetal (ictericia hemolítica del
recién nacido).
Se estudia la sensibilización de los eritrocitos de la sangre umbilical.
Como profilaxis de la enfermedad, se buscan los Anticuerpos antes del parto en el suero de la
madre mediante la prueba indirecta.
También se emplea para el diagnóstico de algunos tipos de anemias hemolíticas.
9.7 Fuentes de información
1. Aiquel F. Manual de análisis clínicos. 6a ed. Buenos Aires: Médica panamericana; 1999.
2. Gónzales De Buitrago JM. Técnicas y métodos de laboratorio clínico. 2a ed. Barcelona:
Masson; 2005.
3. Muñoz J. Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos. Madrid:
Masson; 2005.
4. Merck Sharp Dohme. El Manual Merck.11a ed. Madrid: Elsevier; 2007.
5. Turgeon ML. Hematología clínica. Teoría y procedimientos. México D.F.: Manual
moderno, 2006.
6. Vives JLL, Aguilar JLL. Manual de técnicas de laboratorio en hematología. 3a ed. Madrid:
Elsevier-Masson; 2006.
Mg.Enrique León M.