Bitácora laboratorio Inmunología Veterinaria

Práctica 7. Inhibición de la hemaglutinación.

Introducción
La hemaglutinación es uno de los métodos indirectos más comunes para cuantificar
partículas virales y/o antígenos virales hemaglutinantes en suspensión. Con esta técnica
los eritrocitos se pueden sensibilizar con diversos antígenos y se pueden usar como un
indicador. Así, si se descubren los anticuerpos, la reacción se revelará como una
hemaglutinación que se puede advertir a simple vista.
La inhibición de la hemaglutinación es una prueba rápida y fácil de realizar; es
considerada estandarizable y reproducible. Esta consiste en la acción que ejercen los
anticuerpos específicos contra el virus aglutinante, es decir, evitan la unión del virus a los
glóbulos rojos lo cual es visible macroscópicamente.
Objetivo
Conocer que son y cómo funcionan las pruebas de inhibición de la hemaglutinación;
además de cómo se realizan correctamente.
Fundamento
Fue descrita por Hirts en 1942 a propósito de la influenza. El virus causal de esta
enfermedad tiene la propiedad de aglutinar glóbulos rojos de distintas especies animales;
está acción es inhibida por anticuerpos específicos o antiaglutininas. Tomando en cuenta
estas nociones, se efectúa la prueba de inhibición de la hemaglutinación; para ello se
hacen mezclas de un virus conocido, glóbulos rojos y el suero problema; si hay
aglutinación, el virus investigado carece de antiaglutininas; en cas contrario, si la
hemaglutinación es inhibida, se deberá a la acción de los anticuerpos sobre el virus, al
cual le impiden ejercer su acción aglutinante. Esta prueba es la que arroja un mayor
grado de sensibilidad; la aparición y duración de los anticuerpos inhibidores de la
hemaglutinación está en un punto intermedio respecto a los anticuerpos neutralizantes y
los que fijan el complemento.
Metodología
1. Obtener el suero de las muestras de perro.
2. Centrifugar la sangre obtenida en un tubo sin anticoagulante a 2500 rpm por 5
minutos.
3. Preparar una suspensión de eritrocitos de un perro sano al 1%.
4. Centrifugar la sangre en un tubo con anticoagulante:
▪ Aspirar y descartar el plasma y tomar del botón celular rojo 10 μL de eritrocitos
(evitar la zona de células blancas).
▪ Adicionar 1 mL de Tampón Fosfato Salino (PBS).
▪ Centrifugar a 3000 rpm durante 1 minuto. Aspirar y descartar el sobrenadante
y lavar dos veces más repitiendo el procedimiento.
▪ Resuspender el botón celular en volumen final de 1 mL de PBS.
5. Preparar la dilución seriada de los sueros a evaluar (1:2 hasta 1:64), en placa de 96
pozos:
▪ Adicionar 25 μL de PBS a 6 pozos (correspondientes a cada dilución de 1:2
hasta 1:64).
▪ Adicionar 25 μL del suero a evaluar al primer pozo de dilución (1:2),
homogenizar 5-10 veces y transferir 25 μL al siguiente pozo (dilución 1:4).
Repetir sucesivamente con cada uno de los pozos.
6. Posteriormente adicionar 25 μL del antígeno viral (vacuna) a cada uno de los pozos.
7. Incubar durante 30 minutos.
8. Finalmente adicionar 25 μL de la suspensión de eritrocitos al 1% a cada uno de los
pozos e incubar durante 30 minutos a 37°C.
9. Observar hasta que pozo se presenta la inhibición de la hemaglutinación y reportar el
título.
Referencias
• Inhibición de la Hemaglutinación. (2020). DIVAAGEN.
https://www.divaagen.com/inhibicion-de-la-hemaglutinacion/
• De Mucha, J. (1963). Generalidades sobre el diagnostico de laboratorio de las
enfermedades por virus. Salud Pública. Época V. Vol. V, Núm. 2.
https://www.saludpublica.mx/index.php/spm/article/view/3987/3870