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Inhibición de Hemaglutinación Veterinaria

Este documento describe el procedimiento para realizar una prueba de inhibición de hemaglutinación. La prueba mide la capacidad de los anticuerpos en un suero para inhibir la aglutinación de eritrocitos causada por un antígeno viral. El procedimiento implica diluir muestras de suero, mezclarlas con el antígeno viral y eritrocitos, e incubar para ver si la aglutinación es inhibida, indicando la presencia de anticuerpos. La prueba es rápida, estandarizable y sensible para detectar anticuer

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Inhibición de Hemaglutinación Veterinaria

Este documento describe el procedimiento para realizar una prueba de inhibición de hemaglutinación. La prueba mide la capacidad de los anticuerpos en un suero para inhibir la aglutinación de eritrocitos causada por un antígeno viral. El procedimiento implica diluir muestras de suero, mezclarlas con el antígeno viral y eritrocitos, e incubar para ver si la aglutinación es inhibida, indicando la presencia de anticuerpos. La prueba es rápida, estandarizable y sensible para detectar anticuer

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Bitácora laboratorio Inmunología Veterinaria

Práctica 7. Inhibición de la hemaglutinación.

Introducción
La hemaglutinación es uno de los métodos indirectos más comunes para cuantificar
partículas virales y/o antígenos virales hemaglutinantes en suspensión. Con esta técnica
los eritrocitos se pueden sensibilizar con diversos antígenos y se pueden usar como un
indicador. Así, si se descubren los anticuerpos, la reacción se revelará como una
hemaglutinación que se puede advertir a simple vista.
La inhibición de la hemaglutinación es una prueba rápida y fácil de realizar; es
considerada estandarizable y reproducible. Esta consiste en la acción que ejercen los
anticuerpos específicos contra el virus aglutinante, es decir, evitan la unión del virus a los
glóbulos rojos lo cual es visible macroscópicamente.
Objetivo
Conocer que son y cómo funcionan las pruebas de inhibición de la hemaglutinación;
además de cómo se realizan correctamente.
Fundamento
Fue descrita por Hirts en 1942 a propósito de la influenza. El virus causal de esta
enfermedad tiene la propiedad de aglutinar glóbulos rojos de distintas especies animales;
está acción es inhibida por anticuerpos específicos o antiaglutininas. Tomando en cuenta
estas nociones, se efectúa la prueba de inhibición de la hemaglutinación; para ello se
hacen mezclas de un virus conocido, glóbulos rojos y el suero problema; si hay
aglutinación, el virus investigado carece de antiaglutininas; en cas contrario, si la
hemaglutinación es inhibida, se deberá a la acción de los anticuerpos sobre el virus, al
cual le impiden ejercer su acción aglutinante. Esta prueba es la que arroja un mayor
grado de sensibilidad; la aparición y duración de los anticuerpos inhibidores de la
hemaglutinación está en un punto intermedio respecto a los anticuerpos neutralizantes y
los que fijan el complemento.
Metodología
1. Obtener el suero de las muestras de perro.
2. Centrifugar la sangre obtenida en un tubo sin anticoagulante a 2500 rpm por 5
minutos.
3. Preparar una suspensión de eritrocitos de un perro sano al 1%.
4. Centrifugar la sangre en un tubo con anticoagulante:
▪ Aspirar y descartar el plasma y tomar del botón celular rojo 10 μL de eritrocitos
(evitar la zona de células blancas).
▪ Adicionar 1 mL de Tampón Fosfato Salino (PBS).
▪ Centrifugar a 3000 rpm durante 1 minuto. Aspirar y descartar el sobrenadante
y lavar dos veces más repitiendo el procedimiento.
▪ Resuspender el botón celular en volumen final de 1 mL de PBS.
5. Preparar la dilución seriada de los sueros a evaluar (1:2 hasta 1:64), en placa de 96
pozos:
▪ Adicionar 25 μL de PBS a 6 pozos (correspondientes a cada dilución de 1:2
hasta 1:64).
▪ Adicionar 25 μL del suero a evaluar al primer pozo de dilución (1:2),
homogenizar 5-10 veces y transferir 25 μL al siguiente pozo (dilución 1:4).
Repetir sucesivamente con cada uno de los pozos.
6. Posteriormente adicionar 25 μL del antígeno viral (vacuna) a cada uno de los pozos.
7. Incubar durante 30 minutos.
8. Finalmente adicionar 25 μL de la suspensión de eritrocitos al 1% a cada uno de los
pozos e incubar durante 30 minutos a 37°C.
9. Observar hasta que pozo se presenta la inhibición de la hemaglutinación y reportar el
título.
Referencias
• Inhibición de la Hemaglutinación. (2020). DIVAAGEN.
[Link]
• De Mucha, J. (1963). Generalidades sobre el diagnostico de laboratorio de las
enfermedades por virus. Salud Pública. Época V. Vol. V, Núm. 2.
[Link]

Bitácora laboratorio Inmunología Veterinaria Práctica 7. Inhibición de la hemaglutinación. Introducción La hemag
Metodología 1. Obtener el suero de las muestras de perro. 2. Centrifugar la sangre obtenida en un tubo sin anticoagulan

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