TEST DE COOMBS
GENERALIDADES
De los sistemas serológicos para demostrar la presencia de antígenos o anticuerpos de grupos sanguíneos, la Prueba de Coombs o antiglobulina humana es considerada como la más eficiente y de mayor valor en el Banco de Sangre. Principio de la prueba: Detectar inmunoglobulinas de la clase IgG y/o fracciones del complemento ( C3d ) unidos a los G.R. Obtención: El reactivo de antiglobulina se prepara inyectando a conejos gamma globulina humana purificada para obtener suero antiglobulina, y otras son inyectadas con componentes purificados del complemento ( C3 ) para producir anticuerpos específicos contra ellos .
FUNDAMENTOS DE LA PRUEBA DE COOMBS Los anticuerpos y complemento humano son globulinas y además son diferentes a otras especies; por lo tanto, se comportan como antígenos cuando se inyectan a otras animales. Si un animal es inyectado con globulinas humanas purificadas o con suero total, este animal elaborará anticuerpos contra ellas, estos anticuerpos tendrán especificidad antiglobulina humana. El suero antiglobulina humana ( Suero de Coombs ) reaccionará específicamente contra las globulinas humanas. Si los G.R. están sensibilizados por las inmunoglobulinas, el suero de Coombs se combinará con ellas.
MECANISMO DE ACCION DEL REACTIVO ANTIGLOBULINA HUMANA
GENERALIDADES
La sensibilización de los G.R. se puede producir de dos formas: a) In vivo, es decir, cuando la reacción del antígeno con su correspondiente anticuerpo se efectúa en el organismo, cuando ambos están circulando como sucede, por ejemplo, en caso anemias hemolíticas autoinmunes, enfermedad hemolítica del recién nacido, etc. b) In vitro, la sensibilización de los G.R. por el anticuerpo se realiza en un tubo de ensayo en el laboratorio. Si en el suero existen anticuerpos contra los antígenos presentes , se producirá la reacción antígeno-anticuerpo y los G.R. quedaran sensibilizados. Para demostrar la sensibilidad de los G.R. sea in vivo o in vitro existen dos modalidades en la prueba de antiglobulina
PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA
Detecta la sensibilización de G.R. in vivo. Tiene valor dx. en: * Enfermedad hemolítica del recién nacido * Anemia hemolítica autoinmune * Anemia hemolítica y sensibilización inducida por drogas * Investigación de reacciones transfusionales. Procedimientono Interpretación: a) Si la prueba de Coombs muestra aglutinación, se interpreta positiva, significa que hubo sensibilización de los G.R. in vivo, se señala en cruces, vg. 4 + b) Si no hubo aglutinación, la prueba es negativa y significa que no existe autosensibilización eritrocítica. La prueba negativa será válida si la prueba control es positiva.
COOMBS DIRECTO
PROCEDIMIENTO
1
PREPARACIÓN PARA LA PRUEBA
a. Lavar los eritrocitos del paciente cuando menos 3 veces en solución salina con una concentración al 4 %
2
Adición del Suero Anti-Humano
a. Colocar en un tubo de ensayo una a dos gotas del suero de Coombs b. Agregar una gota de eritrocitos lavados al tubo de ensayo c. Mezclar bien con una suave agitación. Centrifugar 20 seg. a 3,400 RPM
3
REACCIÓN
a. Resuspender los eritrocitos para ver aglutinación macroscópica b. Una reacción negativa confirmarla por medio de examen microscópico
4
INTERPRETACIÓN
a. TUBO SUPERIOR: Aglutinación
eritrocitos cubiertos con anticuerpo Anticuerpos no demostrados en los
b. TUBO INFERIOR : Sin aglutinación G.R.
PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA
Permite detectar G.R. sensibilizados in vitro. El suero en estudio es incubado con los G.R. por el tiempo adecuado, luego se lavan para eliminar anticuerpos y otras inmunoglobulinas que no se han fijado en el eritrocito. Se investiga anticuerpos irregulares en el suero La detección de anticuerpos presentes en el suero se realiza con: a) G.R. especialmente seleccionados: células detectaras, en las cuales se encuentran presentes los antígenos de grupos sanguíneos correspondientes a los anticuerpos de mayor frecuencia e importancia clínica. b) G.R. de genética conocida ( panel ). Se usa después de haber demostrado anticuerpos irregulares mediante las células detectoras. c) Con G.R. desconocidos como en la Prueba de compatibilidad.
COOMBS INDIRECTA
PROCEDIMIENTO PARA DETECTAR LA PRESENCIA DE ANTICUERPOS EN EL SUERO ( PRUEBA CRUZADA MAYOR )
1
PREPARACIÓN PARA LA PRUEBA
a. Lavar G.R. del donante en solución salina normal con una concentración al 4 % b. Coloque dos gotas del suero del receptor en cada uno de los tubos. Agregar tres gotas de albúmina bovina al 22 % a uno de los tubos
2
SENSIBILIZACIÓN DE LOS ERITROCITOS
a. Agregue una gota de eritrocitos lavados a cada uno de los tubos de ensayo b. Mezcle con suave agitación e incube durante 15 a 60 minutos a 37º C
3
LAVADO DE LOS ERITROCITOS ANTES DE LA PRUEBA DE COOMBS
a) Lave los eritrocitos tres veces con una solución salina normal, decantando tanta solución como sea posible después del último lavado
4
ADICIÓN DEL SUERO ANTI-HUMANO
a) Agregue una o dos gotas del suero de Coombs. b) Mezclar bien y centrifugar y resuspender los eritrocitos. Observar si hay aglutinación. c) Una reacción negativa puede ser confirmada por examen microscópico
5
INTERPRETACIÓN
TUBO SUPERIOR: Aglutinación incompatible TUBO INFERIOR : sin aglutinación
Prueba cruzada mayor Prueba cruzada mayor
PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA
Interpretación a) Si hay aglutinación: prueba de Coombs indirecta positiva, presencia de anticuerpos irregulares en el suero. b) Si no hay aglutinación : Coombs indirecto negativa. Es válido el resultado si la prueba control de Coombs es positiva, y si esta última es negativa, la prueba es inválida. Debe repetirse el procedimiento. Indicaciones * Como screening en: embarazo, donantes de sangre, *Pacientes que está recibiendo transfusiones o ya las ha recibido * Identificar cualquier anticuerpo encontrado en el screening * Pruebas de compatibilidad * Determinación de ciertos grupos sanguíneos, como Du, Kell, Kidd, Duffy
RESULTADO DE TECNICAS DE AGLUTINACION Y DE ELISA EN PACIENTE CON PRUEBA DE COOMBS NEGATIVA
