Introducción.

El sistema ABO se usa para agrupar la sangre humana en diferentes tipos de acuerdo con la
presencia o ausencia de ciertos marcadores en la superficie de los glóbulos rojos. Los cuatro
tipos principales de sangre son A, B, O y AB.
La determinación del grupo ABO es la prueba más importante del banco de sangre ya que es
la base fundamental para determinar la compatibilidad de esta

El sistema ABO tiene asociados los anticuerpos anti-A y anti-B, que constituyen una defensa
natural contra antígenos extraños y se llega a encuentran en el plasma.

Los anticuerpos del Sistema ABO son principalmente IgM e IgG y muy raramente IgA los
primeros (IgM) también son denominados naturales, aglutinantes o completos, se
desarrollan regularmente después que el individuo ha sido expuesto a la inmunización
ambiental. En los individuos con anticuerpos como el anti-A y anti-B en su suero y que
tienen un estímulo inmunizante específico pueden producir anticuerpos inmunes de la
misma especificidad, pero con diferente comportamiento biológico.

Así los antígenos presentes en la membrana eritrocitaria y anticuerpos correspondientes

presentes en el plasma. Bajo condiciones normales, todos los individuos poseen anticuerpos
contra los antígenos que no estén presentes en sus propias células. Por
ejemplo: El grupo A tiene el antígeno A. Este grupo reconoce al antígeno B como extraño y
puede formar anticuerpos anti-B y de la misma manera con el antígeno B de esta manera se
establece una interrelación constante y predecible entre los antígenos y anticuerpos del
sistema, lo cual constituye la base fundamental para que en la determinación del Sistema
ABO y se realicen dos pruebas:

1. Prueba celular para determinar los antígenos

presentes en la membrana eritrocitaria.

2. Prueba sérica o inversa, para determinar los

anticuerpos presentes.

De esta se lograra agrupar de manera adecuada

el tipo de sangre de la persona

(Figura 1)

Objetivos.
 Generales:
 Aprender a manejar las nuevas técnicas de determinación de grupo sanguíneo (ABO)
así como reforzar lo estudiado con anterioridad del tema
Específicos:

 Demostrar la reacción antígeno-anticuerpo en antígenos de superficie (aglutinación).

 Identificar los antígenos de superficie del sistema ABO en los eritrocitos humanos
mediante el uso de antisueros para determinar el grupo sanguíneo.
 Discutir la importancia de la identificación del grupo sanguíneo en la práctica clínica.

Hipótesis.
Se espera que al realizar el procedimiento adecuado que se indica en la información dada
con anterioridad el resultado concuerde con la información recibida del paciente tomando
en cuenta que se realizó de manera adecuado cada uno de los procedimientos en la
muestra así como el análisis de resultado que conlleva cada uno de ellos esperando que sea
un buen resultado esperado.

Material y método.
Material e instrumentos:

• Sangre venosa anticoagulada

• Suero

• Pipeta Pasteur con bulbo

• Aplicadores de madera (palillos)

• Centrífuga clínica

• 6 tubos de ensayo

• Gradilla

• 2 Tubos de ensayos 1 rojo y 1 con EDTA por cada paciente

• Placa para determinación de tipo de sangre

•Lanceta

Reactivos:

• Solución salina fisiológica (SSF) al 0.85%

• Suero comercial anti-A monoclonal (color azul)

• Suero comercial anti-B monoclonal (color amarillo)

• Suero comercial anti-AB policlonal (incoloro)

• Eritrocitos fenotipados A1, A2, B y O suspendidos

Procedimiento:
PRUEBA EN PLACA

1. Suministrada colocar 1 o 2 gotas de la sangre, periférica o venosa 1 (tapón rojo) en 3

lugares diferentes de la placa ya sea directamente del dedo (punción periférica) o con
pipeta Pasteur.
2. Añadir 1 o 2 gotas de Anti-suero A (líquido azul) en las gotas de sangre.

3. Añadir 1 o 2 gotas de Anti-suero B (líquido amarillo) en las gotas de sangre.

4. Añadir 1 o 2 gotas de Antisuero D (Rh) (líquido transparente) en las gotas de sangre.

5. Esperar 1 minuto. Utilizando un palillo diferente para cada reacción, mezclar las gotas de
sangre con las de Anti-suero durante 20 segundos. Evitar la contaminación entre reacciones.

6. Examinar las mezclas, si se forman gránulos, la aglutinación ha tenido lugar. Si por el

contrario la mezcla es homogénea, no hay aglutinación.

OBSERVACIÓN:

La reacción de aglutinación Rh+ es diferente a la que observamos en los grupos A y B, se

forman grumos, pero se mantiene el color rojo en toda la mezcla que puede llevar a error.

PRUEBA CELULAR EN TUBO

1. Lavado de eritrocitos:

Colocar 0,5 ml de sangre total anticoagulada en el tubo de 13 x 100 mm, adicionarle

solución salina fisiológica (0,85%) hasta ¾ partes del tubo, colocar un tapón adecuado al
tubo y mezclar invirtiendo con cuidado hacia arriba y hacia abajo. Centrifugar a 3000 rpm
durante 5 minutos. Eliminar el sobrenadante, de preferencia con una pipeta Pasteur.

2. Eliminar el sobrenadante y preparar una suspensión de eritrocitos al 5% en SSF (por

ejemplo:

0,25 ml de eritrocitos en 4,75 ml de SSF.

3. Seleccionar 3 tubos de 13 x 100 mm e identificarlos con marcador como A, B y AB

respectivamente.

4. Colocar en el tubo marcado A, una gota de suero anti-A (azul); en el tubo B, una gota de
anti-B (amarillo) y en el tubo marcado AB (incoloro) una gota de suero Anti-AB.

5. Agregar a cada tubo una gota de la suspensión de eritrocitos al 5% y mezclar.

6. Centrifugar a 3400 rpm por 15 segundos o 1000 rpm por 1 minuto.

7. Desprender el botón de células del fondo del

tubo agitándolo suavemente, inclinarlo hasta la
posición horizontal para apreciar completamente
la aglutinación y cuantificarla en cruces.

8. Anotar inmediatamente tubo en mano, los

resultados de la aglutinación (figura 2).
(Figura 2)

PRUEBA SÉRICA EN TUBO

1. El tubo de muestra colectada sin anticoagulante (así como está desde que se vació en el
tubo) se centrifuga a 3000 rpm durante 5 minutos.

2. En caso de que aún se vea la fibrina después de centrifugar y no se pueda extraer el

suero, ésta se despegará de las paredes del tubo con un aplicador de madera (o en su
defecto con la punta de una pipeta Pasteur) empujándola hacia el fondo y sin sacar nada del
tubo; se vuelve a centrifugar (si se remueve y se saca el coágulo, éste atrapa suero y en
ocasiones no se logra obtener el suero deseado. Es recomendable desechar el concepto de
que para obtener suero se debe remover el coágulo).

3. Se separa el suero de los eritrocitos. El suero debe colocarse en otro tubo debidamente
identificado.

4. Identificar apropiadamente 4 tubos de 13 x 100 mm, de la siguiente manera: A, A1, B y O.

5. Colocar 2 gotas de suero en estudio en cada tubo.

6. Agregar una gota de eritrocitos fenotipados como A1 al tubo marcado como A1, una gota
de eritrocitos identificados como A2 al tubo marcado con A2, una gota de eritrocitos B en el
tubo marcado como B y una gota de eritrocitos O en el tubo marcado como O.

7. Mezclar agitando los tubos. Si desea potenciar la aglutinación, los tubos pueden ser
incubados durante 5 minutos o más a la temperatura del laboratorio.

8. Centrifugar a 3400 rpm 15 segundos o a 1000 rpm 1 minuto.

9. Observar el sobrenadante contra un fondo blanco bien iluminado para detectar hemólisis.

10. Desprender el botón de células del fondo del tubo con movimientos giratorios suaves,
inclinarlo hasta la posición horizontal y leerlo contra un fondo bien iluminado para apreciar
completamente los aglutinados dispersos

Observaciones
Muestra en tubo:

 Para la muestra en tubo (imagen 1.0), metimos a centrifugar el tubo con muestra de
nuestra compañera Daniela Rojas. Al tener listo el suero (imagen 1.1), sacamos con
una pipeta Pasteur 3 gotas y los colocamos en los 3 tubos de ensayo
 Se proceso con una gota de sangre por medio de la punción capilar. Se le agrego el
reactivo y definimos el grupo de sangre de nuestra compañera (imagen 1.2).

Imagen 1.2

Imagen 1.1

Imagen 1.0

Muestra en placa:

 Se extrajo la muestra por punción capilar de 4 compañeros

 Una gota por cada espacio
 En cada espacio una gota de anti a, anti - B y anti - D
 Observamos la aglutinación en cada espacio y con ello confirmamos su grupo
 La aglutinación se observa al arrastrar el palillo en las muestras con el antígeno, se
observan mini partículas

Muestra de nuestros compañeros y con el antígeno

agregado (imagen 1.3)
Imagen 1.3

Muestra en tubo (técnica alternativa)

 Se extrajo la muestra de un compañero

 Colocamos 100 microlitros de sangre y ¾ de solución fisiológica
 Se metieron a centrifugar 1800 rpm x 1 min.
 De ahí se colocan 50 microlitros en tres tubos de ensayo
 Se colocaron los respectivos reactivos
 Al homogenizar el tubo se observa la aglutinación en el tubo D+ en los demás, no hay
ni una.

Los resultados de esta técnica con la técnica alternativa a la

propuesta inicialmente (Imagen 1.4)

Imagen 1.4

Análisis de resultados.
*Los resultados fueren tomados con referencia de los siguientes datos

El grupo sanguíneo del individuo corresponderá a la casilla en la que la sangre se ha

coagulado; es decir:

Si se observan coágulos en el recuadro de Anti-A, el individuo será del grupo A.

Si se observan coágulos en el recuadro de Anti-B, el individuo será del grupo B.

Si se observan coágulos en los dos recuadros, Anti-A y Anti-B, el individuo será del grupo AB.
Si no se observan coágulos en ninguno de los recuadros, Anti-A, Anti-B, el individuo será del
grupo O.

Imagen 1.5

También se observa en las imágenes, que posee el

suero Anti-D.

Si aparecen coágulos significa que el individuo es Rh

+.

Como se muestra en la imagen:

Interpretación de resultados

 En la primera prueba se pudo notar la aglutinación en Anti A y Anti-D lo que arrojó

un resultado A +.
 La segunda prueba arrojo un resultado con aglutinación en Anti A y Anti-D que es A +
 En la tercera se logró observar un tipo de sangre B +
 Por último, obtuvimos un resultado positivo en A y B lo que indica que es AB +

Imagen 1.6

+: Presencia de aglutinación -: Ausencia de aglutinación p. 1, 2, 3, 4: Pruebas realizadas

Imagen 1.7

Aquí se observa que no hubo aglutinación en el antígeno A y B, pero si en el D lo que nos

dice que la sangre es tipo O+

Imagen 1.8

Hubo aglutinación en el antígeno A y D por lo que la sangre es tipo A+

Por último, una imagen de referencia sobre la compatibilidad de la sangre para donaciones:
 Conclusión.
El saber el tipo de sangre de las personas es de gran importancia ya que, si en algún
momento de su vida es necesario realizar alguna transfusión sanguínea debido a una
pérdida de sangre o incluso alguna enfermedad relacionada con ella, se debe saber con qué
tipo es compatible por qué si no lo es puede tener complicaciones o en el algunos de los
casos la muerte. En esta práctica vimos los procesos de cómo se pueden identificar los tipos
de sangre, realizamos tres técnicas diferentes, dos proporcionadas por el profesor y una que
nos explicaron nuestros compañeros de servicio social, para realizar la práctica se obtuvo
sangre de tres diferentes pacientes y al realizar los tres procedimientos se observó que
teníamos pacientes con tres tipos de sangre diferentes, el primer paciente con A+, el
segundo con B+ y el tercer paciente con AB+, este último nos sorprendió ya que el
porcentaje de la población con este tipo de sangre es baja. Durante la práctica de manejo
general no se tuvieron complicaciones.
 Bibliografía
https://www.bancsang.net/blog/es/los-grupos-sanguineos-mayoritarios-el-abo-y-el-rh/

https://medicinaylaboratorio.com/index.php/myl/article/view/425

https://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0016-38132021000200181

https://inakiresa.wordpress.com/2010/05/03/determinacion-de-los-grupos-sanguineos/