CPI MEDICINA – 2017 DR.

CHRISTIAN AGUILAR
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 2
 SEÑALIZACIÓN
DEPENDIENTE DE
PROTEÍNAS
TIROSINAS CINASAS
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 3
 PROTEÍNAS TIROSINAS CINASAS
Las proteínas tirosinas cinasas son enzimas que fosforilan
residuos específicos de tirosina en sustratos proteicos.

Proteínas tirosinas cinasas Proteínas tirosinas cinasas

receptoras (RTK) citoplásmicas (TK)

Son proteínas integrales de membrana Son reguladas en forma indirecta

que se activan en forma directa por por señales extracelulares.
factores extracelulares.

En el genoma humano se codifican más de 90 proteínas tirosinas cinasas diferentes que participan en la regulación
del crecimiento, división, diferenciación, supervivencia, unión con la matriz extracelular y migración de las células.

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 RECEPTORES DE TIROSINAS CINASAS (RTK)
Son proteínas integrales de membrana, monoméricas y bitópicas (de paso único).
Sitios de unión al
ligando extracelular
LIGANDO
SEGMENTO
EXTRACELULAR

Hélice alfa

HÉLICE ALFA TRANSMEMBRANA

Sitios de unión
a sustratos Asa de activación SEGMENTO
Dominio cinasa CITOPLÁSMICO

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La unión con ligando conduce a la DIMERIZACIÓN
y ACTIVACIÓN de un par de RTK.
MONÓMEROS INACTIVOS DÍMEROS ACTIVOS

Molécula señal

Dominio
tirosina
cinasa

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DIMERIZACIÓN DEL RECEPTOR MEDIADA POR LIGANDO
Un ligando se une
con dos receptores
MONÓMEROS INACTIVOS
El ligando contiene 2 sitios
de unión con el receptor
(LIGANDO BIVALENTE)

El ligando bivalente induce

la dimerización directa del
receptor y la inducción de
su actividad cinasa.
DÍMEROS ACTIVOS

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 DIMERIZACIÓN MEDIADA POR RECEPTOR

Los ligandos actúan

como reguladores MONÓMEROS INACTIVOS
alostéricos que
activan la capacidad
de sus receptores El ligando induce un cambio en
Se induce la formación o exposición de
para formar dímeros. la conformación en el dominio
extracelular de un receptor una interfase de dimerización de receptor

MONÓMEROS INACTIVOS

DÍMEROS ACTIVOS

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 ACTIVACIÓN DEL RECEPTOR
Al dimerizarse, quedan en contacto estrecho dos dominios cinasa, lo que permite la
TRANSAUTOFOSFORILACIÓN, en la que la actividad cinasa de un receptor del dímero fosforila
los residuos de tirosina en el dominio citoplásmico del otro receptor del dímero y viceversa.
1º) Fosforilación del asa de activación: activa al dominio cinasa (CINASA ACTIVA)
2º) Fosforilación de los dominios de unión a sustratos: atrae a sustratos específicos

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 Sitios de unión al
ligando extracelular Ligando unido al RTK
LIGANDO

Hélice alfa
transmembrana

Asa de
activación
Protein
Dominio cinasa
cinasa
ACTIVA

Unión del ligando Fosforilación del Fosforilación de sitios

y dimerización asa de activación de unión a sustratos

ACTIVACIÓN DEL CREA SITIOS DE ALTA

DOMINIO CINASA AFINIDAD PARA
DETERMINADOS SUSTRATOS

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Las tirosinas fosforiladas se unen a proteínas de señalización
que contienen dominios específicos.
La activación del receptor conduce a la formación de complejos de señalización.

RTK activo
Dominio de unión con fosfotirosina Dominio Src – homología 2
(dominio PTB) (dominio SH2)

Cinasa activa

Dominio
PTB Dominio
SH2

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 Las proteínas con dominios SH2 y PTB reconocen secuencias
específicas de aminoácidos adyacentes a la tirosina fosforilada.
Heptapéptido que contiene fosfotirosina: Pro – Asn – pTir – Glu – Glu – Ile – Pro

RTK activo
El dominio SH2 de la proteína
RTK activo Src reconoce el motivo
pTir – Glu – Glu – Ile

Cinasa activa
Las proteínas con PTB
reconocen el motivo Los dominios SH2 de la cinasa
Asn – Pro – X – pTir PI3 reconocen el motivo
pTir – Met – X – Met
Algunos dominios
PTB parecen unirse
con tirosinas no Dominio
fosforiladas PTB Dominio
SH2
El dominio SH2 de la proteína
adaptadora Grb2 reconoce el motivo
pTir – X – Asn
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Existen varios tipos de proteínas de señalización
que se unen a las tirosinas fosforiladas del RTK.

Proteínas adaptadoras
Proteína Grb2

Proteínas de acoplamiento
Proteína IRS

Factores de transcripción
Factor de transcripción STAT

Las proteínas señalizadoras

activadas transmiten la
Enzimas de señalización
señal en dirección 3‘  Fosfolipasa: PLC – gamma
(corriente abajo)  Cinasa de lípidos: PI3K
 Fosfatasa de tirosina: Shp2

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 Funcionan como un vínculo entre RTK y otras proteínas.
1. Proteínas adaptadoras: Contienen un dominio SH2 y dos o más dominios de unión a otras proteínas.

Proteína adaptadora Grb2: Tiene un dominio SH2 y dos dominios SH3

 Dominio SH2: se une a la tirosina fosforilada del RTK dentro del motivo Tir – X – Asn
 Dominios SH3: se unen a motivos con secuencias ricas en prolina de las proteínas Sos o Gab.

RTK
pTir
SH2

Proteína
adaptadora
Grb2

Sos Gab

Otras proteínas adaptadoras: Nck, Shc y Crk

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2. Proteínas de acoplamiento: Aportan sitios adicionales para fosforilación de tirosina.

 Contienen un dominio PTB o un dominio SH2 y varios sitios para fosforilación de tirosina.
 Una vez unidos a RTK, el receptor fosforila las Tir de la proteína de acoplamiento.
 Las Tir fosforiladas funcionan como sitios de unión para otras proteínas de señalización.

Proteína de
acoplamiento IRS
Contiene un dominio PTB
para unirse al RTK.

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3. Factores de transcripción: Factor de transcripción STAT
 Tiene un dominio SH2 y un sitio de fosforilación de tirosina.
 Dominio SH2: se une a la Tir fosforilada del RTK
 Sitio de fosforilación de tirosina: es fosforilada por RTK. Se une al dominio SH2 de otro
FT STAT (DIMERIZACIÓN).

RTK
P
SH2

Sitio de Factor de
fosforilación transcripción
de Tir

P
STAT

Al dimerizarse se convierte en FT activo

que ingresa al núcleo y estimula la
transcripción de genes específicos.

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 16


4. Enzimas de señalización:
Contienen dominios SH2 que se
relacionan con RTK activadas
 Proteínas cinasas
 Proteínas fosfatasas: Shp2 (una fosfatasa de Tir)
 Cinasas de lípidos: PI3K
 Fosfolipasas: Fosfolipasa C gamma
 Proteínas activadoras de GTP – asa

Cuando se unen al RTK, estas

enzimas se pueden activar por
3 mecanismos posibles:
1. Fosforilación: mediada por RTK
2. Translocación a la membrana: las
aproxima a sus sustratos
3. Mecanismo alostérico: un cambio
en la conformación en SH2 produce
un cambio en la conformación del
Fosfolipasa dominio catalítico
Fosfatasa de Tir
Cinasa de lípidos

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 17

 Terminación de la respuesta
Participa el complejo proteico Cb1
(lleva una enzima que ubiquitina al receptor)
Cb1 tiene un dominio SH2 para unirse con RTK
 Unión RTK – Cb1
 Ubiquitinización del receptor
 Interiorización del receptor
 Degradación del receptor (casi siempre)

Enzima de
ubiquitinización
Cb1

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 18

Vía cinasa de Vía del receptor
Ras – MAP de insulina

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 19

 Vía cinasa de
Ras – MAP
MAP = Proteincinasa Activada por Mitógenos

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 20

Vía de cinasa de Ras – MAP
Factor de crecimiento – RTK

Grb2

Sos

Ras

Raf MAPKKK
Cinasas MAP

MEK MAPKK

ERK MAPK

Factores de transcripción (Elk – 1)

PROLIFERACIÓN CELULAR
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 21
Proteína adaptadora Grb2: Tiene un dominio SH2 y dos dominios SH3

 Dominio SH2: se une a la tirosina fosforilada del RTK dentro del motivo Tir – X – Asn
 Dominios SH3: se unen a motivos con secuencias ricas en prolina de las proteínas Sos.

Grb2 traslada a Sos a la membrana

plasmática para activar a Ras

SH2

SH3
Activa a la proteína Ras, induciendo el intercambio de GDP por GTP.
Proteína Sos: Sos es un factor de intercambio de nucleótido de guanina (GEF).

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 22

 Es una proteína G monomérica y anclada a lípidos Las proteínas Ras son parte de
Proteína Ras: que reside en la superficie interna de la MP
una superfamilia de más de
150 pequeñas proteínas G,
incluidas Rab, Sar1 y Ran.

ACTIVACIÓN:
Ras se convierte en la forma activa unida a GTP
mediante el intercambio de GDP por GTP,
Ras unido a GDP inducida por las proteínas GEF (factor de
se mantiene intercambio de nucleótido de guanina).
inactiva debido a
su unión con una
proteína GDI La proteína
(inhibidor de Sos es un
disociación de Forma inactiva GEF de Ras
nucleótido de
guanina), que
impide la
liberación de GDP.

INACTIVACIÓN:
Ras se inactiva mediante la hidrólisis del GTP
Forma activa
(actividad GTP – asa intrínseca), que es inducida por
las proteínas GAP (proteína activadora de GTP – asa).

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 23

 Estado inactivo
Ras

Hidrólisis de nucleótidos GEF

GTP → GDP + Pi

Intercambio de nucleótidos
GDP → GTP
GAP Ciclo de las
proteínas G
monoméricas

Ras

Estado activo
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 24
 Tienen un tripéptido cerca de su sitio catalítico con la secuencia
Cinasas MAP Thr – X – Tir. La fosforilación en estos sitios las activa.

Raf MEK ERK

MAPKKK (cinasa de MAPKK (cinasa MAPK (cinasa de MAP)
cinasa de cinasa de MAP) de cinasa de MAP) 2 tipos: ERK1 y ERK2

Es una cinasa Es una cinasa de Son cinasas

de SER/TRE SER/TRE y de TIR de SER/TRE
(doble especificidad)

Hasta ahora se han reconocido 14 Raf, 7 MEK y 13 ERK diferentes en los mamíferos.

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 25

 Pasos de la vía de cinasa de Ras – MAP

Factor de crecimiento Ras – GTP puede interactuar

en forma directa con varios
(EGF o PDGF) blancos en dirección 3'. Uno
de ellos es la cinasa Raf.

RTK

Ras atrae a
Raf a la
superficie
interna de la
membrana
plasmática

Factor de crecimiento + RTK Grb2 Sos (GEF) Ras – GTP

Proteína adaptadora
Dimerización y activación de RTK Ras activado

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 26

 P
P P Proteínas
Atrae a Fosforila a Fosforila a Fosforila a
Ras Raf MEK ERK citoplásmicas
MAPKKK MAPKK MAPK y nucleares
Se han identificado más de 160 proteínas que
pueden ser fosforiladas por las cinasas ERK,
incluidos factores de transcripción, proteínas
cinasas, proteínas citoesqueléticas,
reguladores de la apoptosis, receptores y
otras proteínas señalizadoras.

OBS: Raf se activa por una combinación

de fosforilaciones y desfosforilaciones
(el libro no menciona cuáles son las cinasas y
fosfatasas activadoras de Raf).

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 27

 P
ERK Ingresa al núcleo

Fosforila a

Factores de transcripción (ej: Elk – 1)

Transcripción de genes específicos

Fos y Jun Ciclina D1 Fosfatasa

Transición G1 → S
MKP – 1
Elimina los fosfatos
agregados por ERK

PROLIFERACIÓN
CELULAR DETIENE LA
VÍA MAP

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 28

 Vía de cinasa de Ras – MAP
Factor de crecimiento – RTK

Grb2

Sos

Ras

Raf MAPKKK
Cinasas MAP

MEK MAPKK

ERK MAPK

Factores de transcripción (Elk – 1)

PROLIFERACIÓN CELULAR
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 29
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 30
Vía del receptor
de insulina
Cascada de la insulina

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 31

Receptor de insulina: Es una proteína tirosina cinasa.

El receptor para insulina es un tetrámero que consiste

en dos subunidades α y dos subunidades β.

La subunidad alfa es
extracelular y
contiene el sitio para Las cadenas α y β están
unión con la insulina. S–S unidas por enlaces
disulfuro formando un
heterodímero αβ.
Ambos heterodímeros
La subunidad beta se unen entre sí por
atraviesa la membrana y enlaces disulfuro entre
contiene los dominios las subunidades alfa.
de tirosina cinasa en su
región intracelular.

Los receptores de insulina se encuentran como Mientras que la mayor

parte de las RTK está en
dímeros estables (?) en la membrana celular. la superficie celular como
monómeros.

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 32

Activación del receptor de insulina: Una sola molécula de insulina
se une con las subunidades alfa.

RECEPTOR INACTIVADO RECEPTOR ACTIVADO

Cambio de
conformación
Se fosforilan
3 sitios del
asa de
activación

Yuxtaposición de
los dominios cinasa TRANSAUTOFOSFORILACIÓN
Y ACTIVACIÓN

El receptor activo fosforila a más residuos

Tir adyacentes, entre ellas la Tir 960.

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 33

 El receptor activado se une a las proteínas IRS y fosforila varios residuos Tir presentes en ellas.
Estas Tir fosforiladas actúan como sitios de unión para proteínas de señalización que contienen dominios SH2.
IRS (sustrato del receptor de insulina) Se han
identificado
Los IRS se caracterizan por la presencia de un dominio PH en el extremo N, un por lo menos 4
miembros de la
dominio PTB y una larga cola que contiene sitios de fosforilación de Tir (Y). familia IRS,
siendo los más
importantes
Se une con la pTir 960 IRS 1 y IRS 2.
del receptor de insulina

Cinasa de lípidos Proteína adaptadora Fosfatasa de tirosina

Sitios de fosforilación de tirosina (Y)

Se une a Se unen a proteínas de señalización

fosfoinositidos que contienen dominios SH2
de la MP
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 34
 3 – cinasa de PI (PI3K)
 Subunidad de activación: se une a
pTir del IRS mediante 2 dominios SH2
 Subunidad catalítica: fosforila
fosfoinositidos en el C3 del anillo inositol

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 35

 PI3K activada conduce a la formación de 3 – fosfoinositidos:
3,4 – difosfato de PI (PIP2) y 3,4,5 – trifosfato de PI (PIP3), que a
su vez atraen a proteínas con dominios PH como PKB y PDK1.

3 – cinasa de PI (PI3K)

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 36

 PKB (AKT) PDK1
Cinasa de SER/TRE Cinasa de SER/TRE
Fosforila a PKB

PKB (AKT) Una vez activada, PKB se disocia

activado de la MP y se mueve hacia el
Cinasa mTOR citosol y el núcleo, donde media
la respuesta a la insulina.
P P

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 37

 PKB es el principal
mediador de la
respuesta a la insulina.
IRS – 1

Estas vías conducen al

traslado de PI3K
transportadores de
glucosa a la membrana PDK1
plasmática, síntesis de PKB
glucógeno y síntesis de
nuevas proteínas en la
célula.

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 38

 mTOR
GLUT – 4

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 39

C.F.C.

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 40