Escuela Profesional de Toxicología

Departamento de Bioquímica
Asignatura: Toxicología Bioquímica

Interacción de agentes tóxicos con receptores hidrocarburos

aromáticos, receptores de tirosina quinasa. Mecanismo de
acción de los inhibidores y desacopladores de la cadena
transportadora de electrones

Carmen Gladys Peña Suasnabar

Carmen.pena@unmsm.edu.pe

Lima, 13 de junio del 2022

 RECEPTORES DE MEMBRANA

• Receptores asociados a
canales iónicos
• Receptores asociados a
proteína G
• Receptores asociados a
enzimas
 Receptores asociados a enzimas
Características de los receptores
Proteína-Tirosina Quinasa
La unión del L a este
tipo de R estimula la
fosforilación del Aa
tirosina de proteínas
Con actividad
intrínseca
Autofosforilación
PROTEÍNA-
TIROSINA QUINASA

Asociados a T-Q
extrínseca
No posee
actividad PT-Q
 RECEPTORES P-TQ CON
ACTIVIDAD INTRINSECA

Unión de insulina al
receptor

ESPACIO
EXTRACELULAR

Dominio
tirosina
quinasa
Sitios de
Dominio carboxilo autofosforilación
terminal

Proteína
blanco

CITOSOL Efecto intracelular de la

insulina
RECEPTORES CON ACTIVIDAD TIROSINA QUINASA
EXTRINSECA

Receptores de Citoquinas
Prolactina

Cuando se forma la unión L-R

Dimerización
No tienen actividad T-Q propia
Interacción con tirosina quinasa
citosólica
El receptor fosforilado en tirosina
favorece la unión de proteínas (SH2)

5
 Receptores con Actividad de Cinasa de Tirosina (RTKs)
o Tirosina Quinasa

La familia del RTK Receptores de la

transmembrana se insulina y factor de
compone de 59 crecimiento son los
miembros en el más complejos en la
genoma humano. familia RTK.

RTK exhiben similares

estructuras y características
funcionales

La mayoría de RTK son monómeros, y su estructura

de dominio incluye una unión a L extracelular
dominio, un dominio transmembrana y un dominio
intracelular que posee la actividad de la tirosina
quinasa..
Receptores Fosforiladores
DISTINTOS TIPOS DE RECEPTORES
con actividad Tirosina Quinasa
DIMERIZACIÓN MEDIADA POR UN
LIGANDO
Inhibidores del EGFR
• Bloquea la dimerización del receptor, la fosforilación tirosin-kinasa y la transmisión de señales
• Evita la reparación del DNA radio-inducido
• Potencia la apoptosis
• Inhibe la progresión del ciclo celular y la progresion metastásica
• Frena la angiogénesis
• Bloquea el EGFR mutante
• Estimula la citotoxicidad mediada por anticuerpos
 EL RECEPTOR DE HIDROCARBUROS AROMÁTICOS (AhR)

• Se encuentra en el citosol Hidrocarburos

de las células (hígado) Aromáticos

Características:
✓ unión a dioxinas saturable
AhR
(105 sitios aprox.)
✓ Reversible
✓ Alta afinidad
Genes
Cyt P450 CYP1A1, CYP1A2 y
CYP1B1
 AhR como Hif1a y Sim AhR Se activan por la
requieren la dimerización
con ARNT para la unión a ligando
activación de genes

Miembro de la superfamilia
de factores de transcripción
Participa en procesos
Otro miembro es la con secuencias básicas de crecimiento y
proteína que media la hélice-bucle-hélice (bHLH)
activación de genes por diferenciación de
anoxia, llamado Hif1a. tejidos.

Esta superfamilia de Esta familia alberga

factores de transcripción se también a los reguladores
llama normalmente de la transcripción Per,
bHLH/PAS (Per, Arnt, Sim). ARNT y Sim

• Per (Period, proteína del ritmo

circadiano de Drosophila)
• ARNT (translocador nuclear del
receptor Ah)
• Sim (Single minded, proteína
reguladora que participa en el
desarrollo del SNC.
 CARACTERISTICAS DEL RECEPTOR
En ausencia del ligando, AhR se encuentra en el citosol como un complejo
oligomérico, unido a 2 moléculas de hsp90 (proteína de choque térmico) y
posiblemente a otras proteínas como AIP, c-Src (60 kD), además de contener la
subunidad de unión al ligando (ALBS).
La asociación con hsp90 se piensa que es necesaria para mantener el plegamiento
adecuado del AhR para su unión al ligando y también se cree que limita el paso del
AhR al núcleo por bloqueo de una secuencia de localización nuclear en el extremo N-
terminal.
 LIGANDOS DEL AhR

ORGANOCLORADOS
Existen 75 congéneres teóricos
clorados para las
dibenzodioxinas, 135 para los
dibenzofuranos y 209 para los
bifenilos.
La toxicidad de los diferentes
congéneres es función de las
posiciones cloradas, siendo unos
treinta de todos ellos los que
mayor riesgo implican.
 FUENTES DE ORGANOCLORADOS

• Incineración de residuos urbanos • En la producción de metales

• Incineraciones hospitalarias • Fabricación del PVC
• Fabricación de papel • Combustión del caucho
• En la industria del cemento • Productos petrolíferos
• Fabricación de herbicidas
VIAS DE EXPOSICIÓN A ORGANOCLORADOS

Oral (90%)

Pulmonar

Absorción Placentaria

Lactancia

Cutánea
(restringida)
 Son compuestos muy estables.
Tienen una elevada liposolubilidad,
asociándose a grasas, aceites y disolventes
orgánicos.
 INTERACCIÓN TCDD Y AhR

• El ligando (TCDD), debido a 2,3,7,8-Tetraclorodibenzo-p-dioxina

su estructura lipofílica,
entra en la célula por
difusión pasiva a través de
la membrana celular, y se
une en el citosol al AhR.
• La afinidad en la unión
depende de las
características del receptor, TCDD
del huésped y de las
propiedades del ligando. AhR
La unión del ligando implica la disociación del oligómero, desplazándose las
moléculas de hsp90, tras lo cual se pueden seguir dos rutas tóxicas:
 Apoptosis

Rutas tóxicas del TCDD

Translocación del complejo L-

Activación AhR al núcleo donde forma un
tirosina quinasa heterodímero con ARNT.
1. ACTIVACIÓN DE LA TIROSINA QUINASA

TCDD + AhR

• Aumento rápido de la
actividad tirosinquinasa.
Segunda proteína
• Esta actividad está nuclear ARNT
mediada por el AhR y no se
debe a la acción directa de
las TCDD sobre las AhR-ARNT

proteinquinasas

Activación
tirosina-quinasa
 Activación de los
receptores tirosina quinasa

Supervivencia
Transcripción
Progresión del ciclo celular Señales citoesqueleticas
transcripción Traducción
Actúan directamente Mecanismos que Estimulan proliferación Todos los sistemas
con el ADN controlan apoptosis celular de secreción

Aumento del ciclo celular, inhibición de apoptosis, aumento de sobrevida, aumenta de transcripción
celular, aumento del citoesqueleto y transporte vesicular para liberar factores de crecimiento
2. Translocación del complejo L-AhR al núcleo
donde forma un heterodímero con ARNT.
 2. Translocación del complejo L-AhR al núcleo
donde forma un heterodímero con ARNT.
• Esta dimerización es necesaria para su unión, corriente
arriba, a los DREs.
• Este complejo L-AhR-ARNT se une entonces a DREs
(regiones de DNA con una secuencia específica de
reconocimiento GCCTG-3’ en la región lateral 5’ de genes
de respuesta) y media el aumento en la velocidad de
transcripción de genes específicos.
• La activación de la transcripción por este complejo está
mediada por co-activadores (CBP/p300, media la unión
entre el complejo AhR-ARNT y factores asociados a la caja
TATA), que atraen a la RNA polimerasa II.
• Para la asociación del complejo con DREs, parece ser que
se requiere la fosforilación, ya que in vitro, la
desfosforilación de extractos nucleares de células tratadas
con TCDD elimina dicha capacidad de asociación.
 LIGANDO - AhR

Tambien modula la expresión de los genes relacionados con la síntesis

de la quinona oxidorreductasa, de la aldehído deshidrogenasa
citosólica, glucuronos, la transferasa y la glutatión transferasa
http://www.md.tsukuba.ac.jp/MDBiology/official/Project_Introduction/E_AhR_project.html
• Las diferentes respuestas de
especies y tejidos se cree que se
deben a la diferente activación
de la expresión de genes, lo que
lleva a la transcripción de
diferentes mRNAs y subsiguiente
síntesis de proteínas.
• Sin embargo el único camino
realmente establecido es la
característica de inducción de
las isoenzimas del citocromo P-
450 CYP 1A1 y 1A2.
 Investigaciones realizadas

• Indican que las dioxinas afectan también a la

expresión del virus de la inmunodeficiencia
humano (HIV-1), con activación de un factor
de transcripción celular, NF-kappa B.
 OTROS LIGANDOS DEL AhR:
Toxinas naturales
• Que pueden tener los mismos
mecanismos de toxicidad que las
dioxinas.
• Así, sustancias como los PAH (por
ejemplo de un filete cocinado),
tienen una elevada afinidad por el
AhR pero son incapaces de producir
el espectro de efectos tóxicos
observados tras la exposición a
PCDDs debido a que son
metabolizados más rápidamente.
• Los productos de la oxidación del
triptofano, también se unen al AhR
y han demostrado tener
propiedades similares a TCDD.
 Toxinas naturales
• La glucobrassicina (un glucosinolato),
cuyos productos de ruptura (carbinol
indol) se unen al AhR.
• Pueden inducir las enzimas de defensa
bajo control del receptor, causando
posiblemente mutagénesis de la misma
forma que la TCDD, o pueden tener un
efecto protector regulando el metabolismo
de estrógenos, o con actividad
anticancerígena o antioxidante.
• La glucobrasicina está presente en grandes
cantidades en vegetales del género
brassica, incluyendo la col y el brócoli
(cerca de 25 mg por cada 100g) o las coles
de Bruselas (125 mg por 100g).
 El Cloracné
• Es una enfermedad
cutánea de tipo acné en la
que aparecen espinillas,
quistes y pústulas
asociadas con la sobre
exposición a ciertos PAH
tales como dioxinas,
dibenzofuranos, o PCBs.
DIOXINAS y CARCINOGÉNESIS
• Consideraciones
establecidas
• El TCDD es considerado
un carcinógeno.
• La OMS recomendó en
2002 que la ingestión en
adultos humanos debería
estar por debajo de 70
pg/kg peso/mes.
Tóxicos y Cadena Respiratoria
La membrana interior mitocondrial es impermeable al NADH y NAD+

Sistemas de lanzadera entre citosol y mitocondria

Lanzadera de glicerol-fosfato
Resumen: NADHcit → FADH2cit → QH2memb → complejo III
Rendimiento energético posterior: 1,5 mol ATP / mol NADH
Especialmente relevante en cerebro.
 Lanzadera de malato y aspartato
Resumen: NADHcit → NADHmt → complejo I
Rendimiento energético posterior: 2,5 mol ATP / mol NADH
Especialmente relevante en hígado, corazón, riñón.

Reacción:
malato + NAD oxalacetato + NADH

catalizada por la malato deshidrogenasa, en citosol y en la matriz mitocondrial

Cadena Transportadora de
Electrones
 COMPLEJO II

El FADH2 cede sus 2 H+ a la ubiquinona que se reduce a ubiquinol (QH2) y abandona el enzima,
difundiendo en la bicapa lipídica hasta alcanzar en siguiente complejo enzimático de la cadena
respiratoria.
Complejo III
Ubiquinona citocromo c oxidorreductasa (Complejo citocromo bc)
Acopla la transferencia de electrones desde la ubiquinona al citocromo c
Para ello, los electrones pasan por distintas subunidades que contienen grupos prostéticos
del tipo b y c, realizando el ciclo Q
 COMPLEJO IV DE LA CADENA RESPIRATORIA

Esta enzima media la reacción final en la cadena de transporte de e- y los transfiere al O2,
mientras bombea H+ a través de la membrana.
El aceptor de e- final es el O2, llamado también aceptor terminal de e-, el cual es reducido
a agua en este paso.
La reacción catalizada es la oxidación de citocromo c y la reducción de oxígeno:
FOSFORILACIÓN
OXIDATIVA
 Las sustancias que interfieren con la Cadena
Respiratoria pueden clasificarse como:

Inhibidores de la Desacopladores : Disipan

Cadena de Transporte el gradiente
Electronico (CTE): Inhibidores de la electroquímico al facilitar
Se unen a alguno de los Fosforilacion Oxidativa: la entrada de H+ a la
Estos compuestos se matriz a través de
componentes de la CTE
bloqueando su enlazan impidiendo la “atajos” proporcionados
por esas substancias y
habilidad de cambiar síntesis de ATP
por esa razón ocurre el
de forma reversible mediante la inhibición transporte de electrones
entre la forma oxidada del retorno de los H+ a pero no la fosforilacion
y la forma la matriz. EJ. oxidativa. Ej. 2,4
reducida. Ej. Amital, La Oligomicina dinitrofenol,
Rotenona, Antimicin A, Termogenina – UCP-1,
CO, y CN DNP
 Inhibidores
(bloqueantes) de la
cadena respiratoria

Rotenona Actimicina A Cianuro

Estos inhibidores detienen el paso de e- de modo

que no hay bombeo de protones. Sin gradiente de
protones, no hay síntesis de ATP.
 Acción tóxica de la rotenona
Rotenona
• DL 50 oral para ratas es de 153 (Inhibe)
mg/kg
• Tiene la capacidad de inhibir al
complejo I (el complejo NADH-
ubiquinona reductasa),
bloquea la respiración celular,
efecto que se manifiesta con
parálisis y posterior muerte del
individuo afectado.
 Antimycin A
• Es un antibiótico
(Streptomyces griseous), usado
como veneno para controlar
alguna espécies de peces.
• Antymicin A interfiere con el
flujo de e- desde el cit. bH en el
complex III.
• En presencia de esta
substancia, el cit. bH puede
ser reducido pero no oxidado,
y consecuentemente, el cit. c
permanece oxidado, al igual
que los cit. a y a3 del complejo
IV.
Inhibidores de la fosforilación oxidativa,
venenos que inhiben la ATP-sintasa

La oligomicina, un antibiótico
producido por Streptomyces, inhibe
a la ATPasa al unirse a la subunidad
Fo e interferir en el transporte de
H+ a través de Fo, inhibe por lo tanto
la síntesis de ATP.
Inhibidores de la Fosforilación
Oxidativa:
 Desacopladores

La síntesis de ATP se ve inhibida con la presencia de agentes desacoplantes. Estos agentes son
ácidos débiles de naturaleza lipofílica que hacen que la membrana sea más permeable. Al ser
mucho más permeabe, el gradiente de H+ se disipa y no pasa por la ATP-asa.
Por lo tanto existe un transporte de e- pero no hay síntesis de ATP.
 proteína desacoplante o termogenina (UCP-1)
En animales, la grasa parda, que es un tejido especializado que posee gran numero de
mitocondrias en cuyas membranas contiene una cantidad grande de termogenina (UCP-1).

La UCP-1 establece una vía para el flujo de H+ desde el citoplasma hacia la matriz, la energía
del gradiente de H+, que normalmente se utiliza para la síntesis de ATP, se libera como calor
cuando los H+ fluyen a través de la UCP-1 hacia la matriz mitocondrial. Esta vía disipadora de
protones se activa cuando la temperatura corporal empieza a descender.