Regulación de la transcripción y

traducción: Aplicaciones en
Ingeniería Biomédica
Seis pasos en los cuales el control de la expresión,
traducción y Función de las proteínas son
controlados
Secuencias de Regulación en Cis : Promotores y
estimuladores

Secuencias de regulación en Cis : Secuencias que regulan la transcripción

de genes adyacentes.
Sirven de sitios de unión para factores de transcripción especificos

Los reporteros son genes que codifican para proteínas fluorescentes que
nos permiten evaluar las secuencias reguladoras
Análisis de la muestra en Microscopia confocal o
fluorescencia convencional
 Viroterapia basada en promotores virales reconocidos por
eucariotas (e.humanos) como el promotor Timidina Quinasa

Promotores de Timidina Quinasa en Eucariotas

- virus expresa la enzima timidina quinasa (Thymidine

kinase), la cual es inofensiva para el ser humano.
- El virus solo se replica en células tumorales carentes
de P53
- suministra el agente antiviral ganciclovir que
convierte a las Timidina quinasa en usa sustancia
bioactiva que inhibe la incorporación de dGTP por la
polimerasa humana y provoca la activación de la
apoptosis celular

- Se pueden usar adenovirus

 Enhancers – Potencializadores/estimuladores de la
transcripción
Secuencias de regulación transcripcional ubicadas a largas distancias ( 50-70 kb)

Promotor del virus SV40 (papovirus) .

B) Adición de un estimlador
 Enhancers – Potencializadores/estimuladores de la
transcripción
Secuencias de regulación transcripcional ubicadas a largas distancias ( 50-70 kb)

- Actúan ligando o reclutando factores de

transcripción y reclusión de RNA pol
Aisladores de la transcripción

Aisladores : Moléculas que restringen la actividad de los

estimuladores a dominios concretos
¿Como podemos determinar las regiones o
sitios de unión para factores de
transcripción?
Es mi proteína potencialmente reguladora de la
transcripción ?
Test de movilidad o cambio de
velocidad electroforética:

- Evalúa la formación de complejos

DNA- Proteínas
 Inmunoprecipitación

Técnica utilizada para determinar regiones de DNA que se unen a factores de

transcripción
Cromatografía por afinidad a DNA

Técnica que separa una sustancia de una mezcla

utilizando interacciones moleculares altamente
específicas pero reversibles, como son la interacción
entre antígenos y anticuerpos, enzimas y sustratos o
receptores y ligandos, por lo que es utilizada
principalmente para separar macromoléculas
biológicas.
 Activadores de la transcripción

Mecanismos de acción de
dominios de activación :

Se unen a secuencias del DNA y promueven la transcripción

Interacción con co-

activadores para
Interacción con TFIIB O remodelar cromatina
TFIID
Represores de la transcripción

- Son proteínas que se unen a secuencias especificas del

DNA para reprimir la transcripción
- Bloquean la interacción de la RNA Pol con factores de
la transcripción
- Compiten con activadores de la transcripción al unirse
a los mismos sitios de unión al DNA careciendo de
dominio de activación
- Los co-represores son proteínas que modifican las
estructura de la cromatina
Regulación transcripcional a nivel de
Cromatina
Regulación transcripcional a nivel de
Cromatina
Regulación a nivel de la elongación
transcripcional

El factor p-TEFb (factor de elongación de la transcripción

positivo-b) : Promueve una segunda fosforilación del CTD
en la RNA pol para promover la elongación blqoqueada po
NELF
miRNA (microRNA)
 RNA de Interferencia (RNAi) - siRNA

RNA ase III

RISC (RNA-induced silencing complex)

Diferencias entre miRNA y siRNA
 Regulación de la transcripción por siRNA y miRNA

https://www.youtube.com/watch?v=lIGPNBsHLoY&ab_channel
=Random42ScientificCommunication

https://www.youtube.com/watch?v=cK-
OGB1_ELE&ab_channel=naturevideo

https://www.youtube.com/watch?v=5YsTW5i0Xro&ab_channel
=OxfordAcademic%28OxfordUniversityPress%29 OKOK

Diferentes métodos de regulación

https://www.youtube.com/watch?v=U3Z4u0DKbx0&ab_chann
el=AppliedBiologicalMaterials-abm
 Complejo de silenciamiento
transcripcional inducido por RNA
(RITS)

Inducen la condensación de cromatina mediante

activación de metiltransferasas de Histonas
Modificaciones postraduccionales

Sumoilation: modificación postraduccional mediante

la cual algunas de las proteínas celulares son
covalentemente modificadas mediante la adición de
otra pequeña proteína (de masa molecular 11 kDa)
llamada SUMO (small ubiquitin-related modifier).

Glicosilación: proceso de adición de carbohidratos a

una proteína.

Lipidación : adición de moléculas hidrofóbicas a

una proteína
Algunas aplicaciones reportadas para los RNAi
 Avances …de gran Importancia !!

https://www.youtube.com/watch?v=0jf6Tor9WtA&ab_channel https://www.youtube.com/watch?v=nkkBu8GrExk
=FutureofMedicine &ab_channel=TissUse-EmulatingHumanBiology
https://www.youtube.com/watch?v=zjtR79a7KKI&ab_channel=
DemconNymus3D
 Técnicas para el estudio de la expresión génica

RT-PCR: reacción en cadena

de la polimerasa con
transcriptasa inversa (RT-PCR, del
inglés Reverse transcription RT-QPCR: PCR
polymerase chain reaction cuantitativa (Q-PCR). Transcriptomica: estudio del
Técnica que me permite conjunto de ARN (ARNr, ARNt, ARNm,
cuantificar los transcritos de ARNi, miARN) que existe en una
RNAm célula, tejido u órgano

Hibridación In situ :
Técnica que detecta RNAm
temporal y espacialmente en
Microarreglos: Permiten la detección
de moléculas de ADN o ARN por hibridación o
tejidos, sean sanos en desarrollo adherencia de las moléculas en cuestión de ADN
o patológicos o ARN en un portaobjetos de vidrio, y detección
del ADN o ARN adherido mediante diferentes
etiquetas o colores que les permiten ser
detectados al microscopio
 RT-PCR
Reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR, del inglés Reverse transcription polymerase
chain reaction), también llamada reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa reversa
 USOS DE RT-PCR
• Diagnostico molecular
• Investigación
• Estudios de genomas virales de RNA
• Clonación de cDNA libre de intrones para sobreexpresión de genes y
evaluación de función génica
• Clonación de cDNA libre de intrones para producción de proteína
recombinante en Procariotas y Eucariotas
• Confirmación de expresión de genes
Termociclador
Detección SARS-Cov2 (Covid -19)
Real Time –PCR/QPCR

Abrir este link:

https://www.youtube.com/watch?v=wUDysO8bF
bA&ab_channel=BiologywithAnimations

https://www.youtube.com/watch?v=EaGH1eKfv
C0&ab_channel=MrSimpleScience

Link largo 28 min (recomendado

9https://www.youtube.com/watch?v=DH7o9Df5_50
 Detección SARS-Cov2 (Covid -19)

https://www.youtube.com/watch?v=ThG_02miq-4
Hibridación In situ

No fluorescente/
reacción cromógena

Nitro blue tetrazolium-

Bromocloro indol Fluorescente/usa
fosfato fluorocromos
Análisis de proteínas
 Western Blot

-Gel de
poliacrilamida
-

- Biuret (3)
- Bradford (2)
- Lowry (4)
- BCA (Acido
bacinconinico)(1)
Invitrogen iBright Imaging Systems- Bright FL 1000
 Análisis de Western Blot

La peroxidasa de rábano (PHR), también conocida como

HRP por sus siglas en inglés (horseradish peroxidase), es
una enzima que se encuentra en las raíces del rábano
picante. Substrato – Peroxido de hidrogeno
/cromógeno-ortofenilendiamina.
 Inmunofluorescencia

Emisión de señal por

fluoroforo
Doble inmunofluorescencia
Microscopio de Fluorescencia
Test de Elisa
Lector de Elisa