CPI MEDICINA – 2017 DR.

CHRISTIAN AGUILAR
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 2
 SEÑALIZACIÓN
DEPENDIENTE DE
PROTEÍNAS G
TRIMÉRICAS
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 3
Esquema Ligando – receptor
general
Proteína G trimérica

ADENILIL CICLASA FOSFOLIPASA C – β

ATP PIP2

DAG IP3
AMPc

PKC Ca++
PKA

RESPUESTA CELULAR
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 4
RECEPTOR ACOPLADO A PROTEÍNA G (GPCR)
E
S  Proteína integral de la MP
T
R
 Proteína monomérica y politópica (de múltiple paso) Los GPCR representan la familia más
grande de proteínas codificadas por
U  7 hélices α atraviesan la MP (7TM) el genoma humano.
C
T  3 asas extracelulares (se unen al ligando) El genoma humano puede codificar
hasta 2.000 GPCR distintos.
U
R
 3 asas intracelulares (la 3ª se une a la proteína G)
A  Extremo N extracelular, extremo C intracelular

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 5

ACTIVACIÓN DEL RECEPTOR:
La unión con un ligando específico activa al receptor, que cambia de
conformación y aumenta su afinidad por la proteína G trimérica.
Un receptor
activo
puede
activar a
varias
proteínas G
G G
P P
C C
R R

RECEPTOR ACTIVADO:
se une a la proteína G
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 6
 Evita la activación
INACTIVACIÓN DEL RECEPTOR: excesiva de proteínas G
DESENSIBILIZACIÓN DEL RECEPTOR

G
Ocurre en 2 pasos: P
C
R
1er paso: El dominio citoplásmico del GPCR
se fosforila por una cinasa específica: cinasa
del receptor unido a proteína G (GRK).
GRK es una cinasa de serina/treonina

G
P
2º paso: El receptor fosforilado se une a la
C
proteína arrestina. La unión con arrestina R
impide que el receptor se una a otra proteína G.

Es probable que el receptor unido con la

arrestina se capte por endocitosis.
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 7
 E
S  Proteína anclada a lípidos de la superficie
T
R interna de la MP
PROTEÍNA G TRIMÉRICA U
C
T
U


3 subunidades (alfa, beta y gamma)
Alfa se une a ácidos grasos de la MP
R
A  Gamma se une a grupos prenilo de la MP

GPCR

OBS: existen proteínas G monoméricas (ej: Ras)

CITOSOL
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 8
 La subunidad alfa se une La subunidad gamma se une
por su extremo N a ácidos por su extremo C a grupos
grasos de la membrana. prenilo de la membrana.
Grupos prenilo: derivados del isopreno
Subunidad alfa
 Geranilgeranilo (15 C)
 Farnesilo (20 C)

GLY Ácido
mirístico Subunidad gamma

Enlace amida

CYS
Enlace tioéster Grupo
prenilo
Subunidad alfa

Ácido
CYS palmítico
Enlace tioéster La prenilación es seguida de la eliminación de los 3
AA del extremo C – terminal y la carboximetilación
de la nueva región C – terminal.
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 9
PROTEÍNA G INACTIVA PROTEÍNA G ACTIVA

γ γ
GDP α GTP α
β β

Subunidad α + GDP Subunidad α + GTP

Al activarse, se disocia la
subunidad α unida con GTP
del complejo β/γ.

ACTIVACIÓN: intercambio de nucleótidos (GDP por GTP)

INACTIVACIÓN: hidrólisis de nucleótidos (GPT → GDP)
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 10
EFECTORES DE LA PROTEÍNA G:
SUBUNIDAD α: COMPLEJO β/γ
 Adenilil ciclasa  Adenilil ciclasa
 Fosfolipasa C beta  Fosfolipasa C beta
 Fosfodiesterasa de GMPc  Canal de K+
 Cinasa PI – 3 (PI3K)

TIPOS DE PROTEÍNA G:
 Gs: activa a la adenilil ciclasa
 Gi: inhibe a la adenilil ciclasa
 Gq: activa a la fosfolipasa C – β
 G12/13  Los miembros de G no están tan bien caracterizados.
12/13
Su activación inapropiada se ha vinculado con proliferación celular excesiva y transformación maligna.

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 11

ACTIVACIÓN DE LA PROTEÍNA G:
La proteína G se une con G
un receptor activado P
C
R

La subunidad α
intercambia GDP por GTP
“PROTEÍNA G ACTIVA” ACTIVACIÓN

Se disocia la subunidad α unida G

con GTP del complejo β/γ P DISOCIACIÓN
C
R

Unido a GTP, la subunidad α

La subunidad α y el complejo β/γ disminuye su afinidad por el
complejo β/γ
activan a efectores específicos

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 12

INACTIVACIÓN DE LA PROTEÍNA G:
E
G F
E
La subunidad α tiene una débil P
C
actividad GTP – asa, lo que le permite C T
R O
desactivarse lentamente a sí mismas. R

La terminación de la reacción se acelera por los

reguladores de la señalización de proteína G (RGS)

E
G F
La unión a GDP produce un cambio P E
conformacional que disminuye su C
C
T
afinidad por el efector y aumenta su R O
R
afinidad por el complejo β/γ, lo que
reintegra la proteína G trimérica.

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 13

SEÑALIZACIÓN DEPENDIENTE DE PROTEÍNAS G
Ligando + Activa Activa Activa
PROTEÍNA G Efector 2º mensajero
receptor

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 14

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 15
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 16
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 17
 MUTACIONES EN EL RECEPTOR ASOCIADO A PROTEÍNA G

Las mutaciones en los

números 1, 2, 5, 6, 7 y 8
producen estimulación
constitutiva del efector
(ganancia de función).
Estimulación constitutiva: no
necesitan estímulo hormonal

Las mutaciones en los

números 3 y 4
 1 y 2: en el receptor para la MSH
bloquean la capacidad  3: en el receptor para ACTH
del receptor para  4: en el receptor para vasopresina
 5 y 6: en el receptor para TSH
estimular al efector  7: en el receptor para LH
(pérdida de función).  8: en la rodopsina

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 18

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 19
Esquema Ligando – receptor
general
Proteína G trimérica

ADENILIL CICLASA FOSFOLIPASA C – β

ATP PIP2

DAG IP3
AMPc

PKC Ca++
PKA

RESPUESTA CELULAR
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 20
 Ligando – receptor
VÍA DE LA
Proteína Gs
ADENILIL CICLASA
ADENILIL CICLASA

AMPc

PKA

Sustratos de PKA

RESPUESTA CELULAR
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 21
 E
S  Proteína integral de la membrana plasmática

ADENILIL CICLASA
T
R Monomérica y politópica (de múltiple paso)
U
C  N y C intracelulares
T
U  2 dominios con 6 segmentos transmembrana
(ADENILATO CICLASA) R
A  Sitio activo hacia el citosol

LA ADENILIL CICLASA ES UN EFECTOR

DE LA PROTEÍNA G TRIMÉRICA

La adenilil ciclasa activada

cataliza la formación de
AMPc a partir de ATP,
iniciando el sistema de
segundos mensajeros.

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 22

ADENOSINA MONOFOSFATO CÍCLICO (AMPc)

Es un 2º mensajero que
difunde al citoplasma.
Síntesis
ADENILIL
CICLASA

Cada molécula de AMPc puede

enlazarse a un sitio alostérico
sobre la subunidad reguladora
de la PROTEINCINASA A (PKA).
Degradación
FOSFODIESTERASA
DE AMPc

La degradación del AMPc se realiza mediante

una FOSFODIESTERASA, la cual convierte al
nucleótido cíclico en un 5' monofosfato.

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 23

AMPc regula una gran variedad de procesos
mediante la activación de PKA.

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 24

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 25
 Es una cinasa de
PROTEINCINASA A (PKA) serina y treonina
PKA es una proteína tetramérica:
 2 subunidades reguladoras: activadas por AMPc que se unen en sus sitios alostéricos
 2 subunidades catalíticas: actúan como cinasas que fosforilan a sustratos específicos

R C R C

R C R
C

Subunidades catalíticas El enlace de AMPc a las subunidades

inactivadas por las reguladoras provoca la liberación de
subunidades reguladoras las subunidades catalíticas activas

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 26

PROTEÍNAS FIJADORAS DE PKA (AKAP)
 Unen a la PKA con sus sustratos específicos.
 Dirigen la PKA a varios compartimientos distintos dentro de la célula
(membrana plasmática, mitocondria, citoesqueleto, centrosoma y núcleo).

La acción de PKA es contrarrestada por enzimas FOSFATASAS,

que eliminan los fosfatos adicionados por PKA.
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 27
 AMPLIFICACIÓN DE LA SEÑAL

Un solo ligando activa

a varias proteínas G

Cada proteína G activa

a varios efectores En el paso de
(adenilato ciclasa) AMPc a PKA no se
amplifica la señal
Cada efector activa a
varios 2dos mensajeros
(AMPc)

Cada PKA fosforila a

varios sustratos

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 28

 MOVILIZACIÓN DE LA GLUCOSA
 Fuente de energía para la célula
GLUCOSA:  Se almacena en forma de glucógeno (polímero de glucosa)

En el hepatocito, la liberación de la glucosa a partir del glucógeno

es regulada por 2 hormonas:
 Glucagón: es una proteína de 29 AA producida en el páncreas.
 Adrenalina (epinefrina): es una amina sintetizada a partir de la tirosina
en la médula suprarrenal.

El efecto final de ambas es la

liberación de glucosa a la sangre.
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 29
 Glucagón/adrenalina + GPCR
MOVILIZACIÓN
DE LA GLUCOSA Proteína Gs

Liberación de glucosa a la sangre

ADENILIL CICLASA

AMPc

VÍA DE LA PKA
ADENILIL CICLASA
Sustratos de PKA

LIBERACIÓN DE GLUCOSA
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 30
SUSTRATOS DE PKA:
Fosforilasa cinasa FUNCIÓN: estimular la liberación de glucosa

Glucógeno sintasa FUNCIÓN: sintetiza glucógeno a partir de glucosa

FUNCIÓN: estimula la síntesis de

Factor de transcripción CREB enzimas de la gluconeogénesis

FUNCIÓN: inhibe a la fosfatasa que elimina los fosfatos

Inhibidor 1 adicionados por PKA

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 31

 Fosforila a
PKA Fosforila a

P P

Fosforilasa cinasa Glucógeno sintasa

Fosforila a

P
Glucógeno fosforilasa GLUCOSA →→→ Glucógeno
Fosforila a

P El efecto del glucagón y la

adrenalina es estimular a la
Glucógeno →→→ GLUCOSA enzima fosforilasa cinasa e inhibir
a la enzima glucógeno sintasa.

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 32

 La actividad de las enzimas GLUCÓGENO FOSFORILASA
y la GLUCÓGENO SINTASA está bajo control hormonal.

La glucógeno sintasa se activa

como reacción a la insulina.

La glucógeno fosforilasa se
activa como respuesta al
glucagón y la adrenalina.

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 33

 PKA Glucagón/Epinefrina

Fosforila a
P
Factor de transcripción CREB
CREB es una proteína del núcleo

CREB fosforilado se une como

un dímero a una región del
ADN conocida como elemento
de respuesta a AMPc (CRE) que
contiene una secuencia PKA
particular de nucleótidos
(TGACGTCA).

Estimula la transcripción de genes que

codifican enzimas de la gluconeogénesis
Gluconeogénesis: formación de glucosa a partir
de intermediarios de la glucólisis

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 34

 PKA
Fosforila a

P
Inhibidor 1
Inactiva a

Fosfatasa 1

La enzima fosfatasa 1 tiene como función desfosforilar a las

enzimas que fueron fosforiladas en la vía de PKA
(glucógeno sintasa, fosforilasa cinasa y glucógeno fosforilasa).

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 35

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 36
Glucagón/adrenalina + GPCR P P
Fosforilasa Fosforila a Glucógeno
cinasa fosforilasa
Proteína Gs
Liberación de
P
Glucógeno
ADENILIL CICLASA sintasa
GLUCOSA

Síntesis de
AMPc
P
Enzimas de
FT CREB
gluconeogénesis
Fosforila a
PKA P
Inactiva a
Inhibidor 1 Fosfatasa 1

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 37

 Ligando – receptor
VÍA DE LA
Proteína Gq
FOSFOLIPASA C – β
FOSFOLIPASA C – β
PIP2
DAG IP3

PKC Ca++

Sustratos específicos

RESPUESTA CELULAR
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 38
SEGUNDOS MENSAJEROS DERIVADOS DE FOSFOLÍPIDOS
Existen enzimas que generan 2os mensajeros a partir de fosfolípidos de la MP:
 Fosfolipasas: rompen enlaces ésteres de los fosfoslípidos
 Fosfolipidocinasas: fosforilan lípidos
 Fosfatasas de fosfolípidos: desfosforilan lípidos

4 tipos de FOSFOLIPASAS:
PLA1, PLA2, PLC, PLD.

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 39

Generación de 2º M a partir de fosfoinositidos (PI):
El anillo inositol del fosfatidil inosiltol (PI) tiene 6 C:
 El C1 sirve para unirse a DAG de la monocapa citosólica de la MP
 Los carbonos 4, 5 y 3 pueden ser fosforilados por cinasas: PI4K, PIP5K y PI3K

DAG DAG DAG

4 – cinasa de PI 5 – cinasa de PIP

(PI4K) (PIP5K)

Fosfatidil inositol (PI) PI – 4 – fosfato (PIP) PI – 4,5 – bifosfato (PIP2)

La fosfolipasa C (PLC) desdobla a PIP2 en IP3 y DAG.

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 40
 FOSFOLIPASA C – BETA (PLC – β)
 Proteína de la superficie interna de la MP ES UN EFECTOR DE LA PROTEÍNA G TRIMÉRICA
 Se une mediante su dominio PH con un PI de la membrana
 Una vez activada por la proteína G, cataliza la reacción que desdobla al PIP2 en DAG e IP3

DAG e IP3 son

segundos mensajeros

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 41

 Es un 2º mensajero que
DIACILGLICEROL (DAG) permanece en la MP.
 Molécula lipídica que permanece en la MP después de ser sintetizada por la PLC – β
 Recluta y activa a proteínas efectoras que tienen un dominio C1 de unión con DAG
 Una de estas proteínas es la proteincinasa C (PKC), una cinasa de serina y treonina

La proteína cinasa C tiene varias funciones importantes en el crecimiento y

diferenciación celulares, metabolismo celular y la activación de la transcripción.

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 42

1,4,5 – TRIFOSFATO DE INOSITOL (IP3)
 Es un azúcar fosfato hidrosoluble que difunde al citoplasma una vez sintetizado por PLC – beta
 Se enlaza a un receptor específico localizado en la membrana del REL
 El receptor de IP3 es un canal tetramérico de Ca++
 La unión de IP3 abre el conducto y permite que los iones Ca++ difundan al citoplasma

IP3 es un 2º mensajero

Los iones Ca++

pueden activar
a PKC

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 43

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 44
 IONES CALCIO Los iones Ca++ son 2dos mensajeros

Para ejercer su acción, los iones Ca++ se unen a proteínas de unión con calcio (ej: calmodulina)
La calmodulina tiene 4 sitios de unión a Ca++

El complejo calcio – calmodulina

(Ca++ – CaM) puede unirse con:
Complejo  Proteína cinasa
Ca++ – CaM  Fosfodiesterasa de nucleótido
cíclico
 Conductos iónicos

También puede estimular la

transcripción génica mediante la
activación de varias proteínas cinasas
(CaMK) que fosforilan factores de
transcripción. Una de estas proteínas
cinasas fosforila a CREB en el mismo
residuo de serina que PKA.

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 45

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 46
Canales de calcio:
Receptor de IP3:
Canal iónico tetramérico operado
por ligandos (el ligando es el IP3)

Receptor de rianodina (RyR):

Canal iónico operado por ligandos (varios
ligandos pueden abrirlo, como ADP ribosa
cíclica e incluso el propio calcio)

BOMBA DE CALCIO: bombea calcio fuera

del citosol (al REL o al exterior celular)
Liberación de calcio inducida por calcio
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 47
 Ligando – receptor
VÍA DE LA
Proteína Gq
FOSFOLIPASA C – β
FOSFOLIPASA C – β
PIP2
DAG IP3

PKC Ca++

Sustratos específicos

RESPUESTA CELULAR
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 48
CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 49
C.F.C.

CENTRO DE FORMACIÓN CHRISTIAN 50