UNIVERSIDAD NACIONAL INTERCULTURAL

“FABIOLA SALAZAR LEGUIA” DE BAGUA

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y

APLICADAS
CARRERA PROFESIONAL DE
BIOTECNOLOGIA

TRANSCRIPCIÓN DE
ADN
DE: DARWIN E. VALVERDE CALVO
Fundamentos:

Jacob Monod F. Crick

Jacob y Monod en 1961
propusieron la Hipótesis del
mensajero: "debe existir una
molécula que transporte la
información fielmente desde el
ADN hasta las proteínas“.

En ese mismo año Brenner y

colaboradores (1961)
demostraron la existencia del Temin (1975)
este intermediario que resultó
ser una molécula de ácido
ribonucleico que se denominó
ARN mensajero (ARN-m).
Posteriormente, el ARN-m tenía
que ser traducido a proteína.
Brenner
¿QUÉ ES LA TRANSCRIPCIÓN?
 Dirigido por una ARN polimerasa
 Una hebra de ADN sirve de molde
 La enzima no requiere de cebador
 La enzima elonga una cadena en dirección 5´ 3´
 Forma enlaces fosfodiéster
 Síntesis se inicia en secuencia específica llamadas
promotores
 Ocurre desenrrollamiento parcial del DNA
 Mediante experimentos de pulso y caza

Experimento de pulso y caza con precursores Eucariontes: transcripción en el núcleo y

radiáctivos (uridina tritiada) traducción en el citoplasma
 LAS ARN POLIMERASAS Y LOS DISTINTOS TIPOS DE
ARN

ARN funcionales
ARN ribosómico (ARN-r)
ARN transferentes (ARN-t)
ARN nucleares pequeños (ARN-np) En bacterias, existe solamente una:

ARN citoplásmicos pequeños (ARNcp) ARN polimerasa

ARN mensajeros (ARN-m).

ARN heterogéneo nuclear (ARN-hn)

 DIFERENCIAS ENTRE PROCARIOTAS Y
EUCARIOTAS

• ARNm es funcional
• No experimenta tranformaciones • ARNhn,
• Transcripción y traducción • Procesa en núcleo
mismo
en compartimento subcelular • ARNm trasportados a citoplasma
• Mayoría de ARNt y ARNr • Enzima ARNpol II no se une por si
de forma análoga a ARN eucariotas
madurar misma a promotor en ADN signo de
• ARNpol une a ADN complejidad respecto a procariotas
 ESTRUCTURA DEL GEN

GEN: región del genoma que contiene la información necesaria para la síntesis de una molécula funcional

Características de gen:
Dos tipos secuencias:
• Estructural o codificadora:
Regiones codificantes ( exones) y no codificantes( intrones)
• Reguladora de expresión: promotores basales, proximales y distales
 Gen a expresarse

Continua Continua

Exon Intron

Area del Gen

Transcription
Intrones
RNA inmaduro. Necesita ser procesado y transportado removidos

RNA maduro (mRNA). Listo para el siguiente paso, translation.

No existe gen para determinada proteína

Ejemplo HEMOGLOBINA cada polipéptido que lo conforma proviene de genes diferentes

GENES DE GLOBINA
 SECUENCIAS O ELEMENTOS BASALES DEL PROMOTOR SECUENCIAS O ELEMENTOS PROXIMALES

Inr= elemento iniciador  Mas grande que promotores basales

BRE= elemento de reconocimiento TFIIB  Determina frecuencia con se produce inicio de transcripción
MTE elemento de motivo 10  Favorecen interacción de ARNpol II con ADN en inicio y actividad
DPE= elemento promotor de cadena enzimática
abajo

SECUENCIAS O ELEMENTOS DISTALES

En genes inducibles cuya expresión se da en respuesta a señales
Ejem. Hormonas esteroideas
1. FACTORES DE TRANSCRIPCIÓN GENERALES
• Capaces de reconocer elementos basales de un promotor
• Muy conservados evolutivamente
• Promueven formación de complejo plurimolecular en punto de inicio=promotor basal, ARNpol y FT generales
 ARN POLIMERASAS EUCARIOTAS
TIPO DE POLIMERASAS GENES TRANSCRITOS

ARN polimerasa I Genes de los ARNr 5,8S,18S y 28S

ARN polimerasa II Todos los genes codificadores de proteínas mas los
genes de snoARN, miARN, siARN y algunos snARN

ARN polimerasa III Genes de ARNt, ARNr 5S, algunos genes de snARN y
genes de otros ARN pequeños
La enzima protagonista en este proceso es la ARN pol, que sintetiza una cadena de ARN en dirección 5’ → 3’ al igual que la ADN pol.
 CARACTERÍSTICAS DE POLIMERASAS

• Sintetizan en sentido 5’ 3’
• Usan el molde de ADN para sintetizar hebra de ARN
• Tienen capacidad de iniciar síntesis de ARN sin necesidad de
contar con un grupo 3’-OH libre para construir nueva hebra
• Presentan alto grado de selectividad y especificidad
• Son proteínas multiméricas necesario para realizar transcripción precisa
INTERACCIÓN DE LOS FACTORES
DE TRANSCRIPCIÓN CON LA
POLIMERASA II
INTERACCIÓN DE LOS FACTORES
DE TRANSCRIPCIÓN CON LA
POLIMERASA I
INTERACCIÓN DE LOS FACTORES
DE TRANSCRIPCIÓN CON LA
POLIMERASA III
 MECANISMOS MOLECULARES DE LA TRANSCRIPCIÓN

1. ESTRUCTURA DEL GEN

2. ENZIMAS: ARN polimerasa
3. FACTORES PROTEICOS
•INICIO: factores de transcripción
•ELONGACIÓN: factores de elongación
Factor P-TEFb
TFIIS o SII
Complejo de elonginas (SIII)

elongina A,B,C ELL Y TFIIF

• PROTEINAS DE MADURACIÓN.
CAPERUZA
ESPLICING
•TERMINO: FACTORES
DE TERMINO
 ETAPA DE INICIO b

A, en la etapa de pre-inicio la proteína de unión a la caja TATA,

TBP, activando el complejo de pre-inicio y TBP forma parte del
TFIID.

B, TFIIA controla la capacidad de unión de TBP al ADN y permite a

TFIID reconocer la región que se extiende hacia el extremo 5’.
TFIIB proporciona una mayor de reconocimiento para la ARN pol
II.

C, Formación del complejo entre TFIIF y la ARN pol II. Se une TFIIE
que recluta a TFIIH, el tiene actividad de helicasa.

D, EL inicio, se refiere a la síntesis de los primeros 10 enlaces

nucleotídicos del ARN. El extremo CTD de la ARN pol II es
fosforilado en varias posiciones. La ARN pol II se suelta de todos
los factores de transcripción, y sólo TBP queda unido a la caja
TATA.
3. Formación de los primeros enlaces fosfodiester

pppA + ppN pppApN + PPi

1er nt (ATP) Ribonucleosidos ARN de dos nt con
Actúa como cebador. trifosfatodos (NTP tri-P en extremo 5’.
Empareja con T en +1 complementario Unido a hebra
de ADN molde a nt de posición molde
+2 de ADN 2Pi
Reacción se repite sobre extremo 3’ hasta formar oligonucleótidos de 10pb esta unido temporalmente como hibrido
ARN-ADN

4. Liberación del promotor transición de inicio a elongación

• Fosforilación de CTD de la subunidad mayor de RNA pol II x TFIIH

CTD=Dominio carboxilo terminal con 52 repeticiones ricas de aa Ser y Thr.
• Fosforilación de ARNpol por P-TEFB

Consecuencia ARNpol se desprende de FT y desplaza a lo largo de ADN.

ETAPA DE ELONGACION ARNpol:
• Posee alta procesividad capacidad de sintetizar ARN completa
• Errores 1x c/10,000 es mil veces + que replicación
• Capacidad de corrección por:
Reversión de Rx de polimerización ( actividadpirofosforilasa)
Centro activo separado (actividad hidrolitca) estimulada por FE TFII S
Eficiencia requiere de factores de elongación
 Factores de elongación para la ARN polimerasa II
FACTOR DE ELONGACION FUNCION
ELL
Estimulan la actividad enzimática de la polimerasa.
CSB
SIII
P-TEFb Fosforila a la cola CTD de polimerasa y DSIF en hSPT5
TFIIS o SII Reduce pausas transitorias de ARNpol causada por terminación prematura
DSIF Regula la procesividad de ARNpol

Esquema de regulación
de procesividad por
DSIF

DSIF= heterodímero formado por

hSPT4 y hSTP5

Activa elongación Frena elongación

 PROCESAMIENTO DEL ARN
El tránscrito primario, o ARNhn, tiene que procesarse de diversas formas para su maduración antes de exportarse del
núcleo y participar en el proceso de traducción.

El proceso de maduración incluye:

A) la adición de un capuchón de guanina modificada

en el extremo 5’,
B) la poliadenilación del extremo 3’,
C) el corte y empalme.
1. Modificación del extremo 5’
A. FORMACIÓN DE CAPERUZA 5’

Ejerce efecto protector frente a

exonucleasas
B. METILACIONES DE LA CAPERUZA 5’ Los nt son modificados por metiltransferasas que usan S-adenosilmetionina
para dar su grupo metilo
2. Ayuste: eliminación de intrones y empalme de exones

Etapa esencial de maduración

Conocido como corte y empalme, o ayuste o del inglés
splicing

A) Secuencias que delimitan el intrón

Centro de
Centro de ayuste 5’ Centro de ayuste 3’
ramificación
 B) Formación del ayustosoma
- Ensamblado secuencial de partículas
riboproteícas SnRNP
- Apareamiento de base con ARNm

C) Mecanismo de splicing Ruptura

de dos enlaces fosfodiester 2
reacciones de transesterificación
1° 1°. Escisión de extremo 5’ del intrón por ataque
nucleofilico del 2’ OH adenina de centro de
ramificación forma enlace 5’-2’ libera exón 1 con
extremo libre 3’-OH
2°Escisión del centro 3’ por ataque nucleofilico de
extremo 3’-OH libre del exón 1, unión exón 1 y 2
3° Intrón se libera con extremo 3’ –OH libre y
2° extremo 5’ como lazo

3°
 ETAPA DE TERMINO
Secuencias consenso del corte y polideanilacion

CPSF= factor de especificidad de escisión y poliadenilación

CstF= factor estimulador de clivaje o escisión.
 IMPORTANCI
A
Replicación del ADN
Reparación del ADN
Recombinación genética

Paso esencial en el uso de la

Síntesis de ARN información desde los genes en el
(transcripción) ADN hasta las proteínas

Proteínas son moléculas clave en

estructura y función de la célula
Bloqueo de transcripción:
Síntesis de proteínas Inicio: Rinfamicina
(traducción) Elongación:

• Streptolidigina
• Toxina de hongo amanitina en eucariotas
conduce a insuficiencia hepática por falta de
ARN y proteínas
• Actinomicina D
MUCHAS GRACIAS