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FACULTAD DE MEDICINA

Prof. María Cruz Briceño


DEPARTAMENTO DE MORFOLOGÍA HUMANA
BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR
REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA
REGULACION DE LA
EXPRESION GENICA
EXPRESION GENICA
Proceso completo por el cual se
Regulación de la síntesis de
decodifica la información
macromoléculas, es decir proteína
codificada en un gen para
que informa un gen, de acuerdo a
formar una proteína
las necesidades de la célula.

¿Por qué no son iguales ? ¿Que hace que se diferencien ?

Tipos de genes: Control génico:


• Constitutivos: expresan constantemente • Que genes se expresan
• Inducibles: cc • En que momento
• Represibles: cc • Con que pauta temporal

Regulación de expresión génica es característica esencial en


mantenimiento de función y integridad de una célula.
EXPRESIÓN GENICA EN RESPUESTA A SEÑALES
PDGF
EGF
TGF-β

FACTORES DE CRECIMIENTO

SEÑALES NUTRICIONALES
Hepatocitos
regula
cc metabolitos
responde
cambios x cc
activa o reprime
genes

CONTACTOS INTRACELULARES
Desarrollo
Embrionario
Esteroideas
Tiroideas
Insulina SEÑALES HORMONALES
Glucagón
A) SISTEMA INDUCIBLE: OPERON LAC

B)SISTEMA REPRESOR: OPERON TRITOFANO


NIVELES DE CONTROL DE EXPRESIÓN GÉNICA

Control pre- Control Control post- Control Control post-


transcripcional transcripcional transcripciona traduccional traduccional
 Remodelado de la  Hormonas l Splicing alternativo
cromatina  Segundos  Estabilidad del
mensajeros ARNm  Ubiquitinación
 Acetilación y
 Secuencias  Reagrupamiento y  Proteosoma
desacetilacion
 metilaciones silenciadoras amplificacion de
 Secuencias genes
potenciadoras  Edicion del ARNm
 Accesibilidaddel DNA a la transcripción
 Condensación de la cromatina
 Señales epigenéticas
 La transcripción no tiene lugar en estados de
condensación > a 10nm
 El acceso del ADN necesita una combinación
de mecanismos:
◦ Posición precisa de los nucleosomas
◦ Remodelación de los nucleosomas
◦ Avance compatible con la presencia de nucleosomas

Un factor importante ( b y c) es: modificación


covalente de las histonas ( mecanismos epigenéticos)
NIVELES DEL CONTROL

Estudio del conjunto de cambios


REGULACIÓN REGULACIÓN en el patrón de expresión génica
GENÉTICA EPIGENNÉTICA que no imlplica alteración en el
ADN y son heredables

MODIFICACIOPNES EN :
SECUENCIA DE
 ADN: metilación de C
BASES
 HISTONAS : H3 y H4 en NH2 ter

Conjunto de marcas moleculares y mecanismos


que señalan y perpetúan la actividad de
diferentes regiones de la cromatina, a través de su
grado de condensación.
a1. Metilación de ADN
Islas CpG asociadas (promotor) genes específicos de tejido y mantenimiento = desmetiladas
Metilación ADN = supresión o sileciamiento por metil-transferasa
Metilación de ADN asociada a interferencia en la unión de F.T: RB y E2F

Mecanismo de metilación del ADN

ADN metil-transferasa
S-adenosil-metionina

Ejemplo: genes globina están más metilados en células no


productoras de Hb.
Efectos de las modificaciones

HAT: histona acetiltransferasa


HDAC: histona desacetilasa
Aspectos importantes de la remodelación de la
b1. Remodelación de cromatina cromatina incluyen:
1. FT–ADN  reclutan a coactivadores = histonas
acetilasas
2. Histonas acetilasas acetilan a lisina de H3 y H4
disminuyen carga positiva y debilitan interacción ADN y
exponen región promotora.
3. Residuos en colas H4 altera compactación y crea sitios
unión a proteínas con dominios de reconocimiento =
bromodominios, mayor afinidad maquinaria de
trascripción. 1
4. Complejos remodeladores cromatina SW1/SNF
actividad ATPasa , provocan cambios de posición o
estructura de nucleosoma. SW= mutantes de levadura swi

donde estaba alterado el cambio (switch) de tipo de apareamiento, y

SNF= mutantes snf incapaces de utilizar la sacarosa.


Otras proteínas: avance en presencia de nucleosomas
2
La capacidad de ARN pol II de trascribir moldes de
cromatina esta facilitada por asociación de acetl-transfersas,
proteínas HMG que desplazan a H1 y apertura cromatina,
factores de elongación que están unidos a dominio C-
terminal de ARNpol
3
C1. Acetilación de las histonas:
- Cambio de carga en aa -Señal de reconocimiento: Bromodominio
 TAF (TF II D)
 HAT

Ejm
Cromosoma X inactivo-Hipometilación
Cromosoma X activo- Acetilado
c.2) Metilación de las histonas

Lysina S- adenosilmetionina (donadora) Lysina 3 metil


Arginina Histona metiltransferasa (HMT) Arginina 2 metil

Histona desmetilasas
Señal reconocida
por proteínas con
Señal de reconocimiento cromodominio

Metilación de H3 en: Metilación de H3 en:


Lys 4 Lys 9
Arg 17 Arg 27
Lys 36
ACTIVA REPRIMEN
TRANSCRIPCION TRANSCRIPCION

Cromodominio= chromatin organization modifier


modificador de la organización de la cromatina
d. Otras modificaciones de las histonas

Fosforilaciones Ubiquitinaciones Sumoilación


Small ubiquitin
serina H2A H2B related modifier

Señales

Activa / inactiva Descondensan No marcan la


transcripción el nucleosoma degradación
Acción sinérgica de  Provocan modificaciones en el segundo componente
señales epigenéticas  Reclutan enzimas modificadora

Definen dominios o
compartimentos en el
genoma

Activos Potencialmente activos silenciados


EUCROMATINA HETEROCROMATINA HETEROCROMATINA
FACULTATIVA CONSTITUTIVA

Hipometilación de ADN Islotes CpG metilados Metilación de ADN


Fosforilación de H3 Hipoacetilación de H3 y H4 Hipoacetilación de H3
Metilación H3 y H4 H3 : Trimetilación de Lys 27 y H4
Dimetilación Lys 9 Trimetilación de
Metilación de Lys 36 Lys 9 de H3
H4 mono o dimetilación de Lys Lys 20 de H4
20
Proteínas activadoras- modificación local de cromatina-
inicio de transcripción Mecanismo o formas
Nucleosomas remodelado
permite el acceso a maquinaria
de transcripción del ADN

Ensamblaje de la maquinaria
de transcripción en el ADN

Variantes de histonas dan gran


acceso al ADN nucleosomal

Patrones específicos de las


histonas modificada
desestabilizan la forma
compacta de la cromatina y
atraen componentes de la
maquinaria de transcripción
 Frecuencia / velocidad de inicio de la
transcripción
 Velocidad de elongación del RNA (poca
regulación)
 Eficacia de terminación de la transcripción
CIS - TRANS
Promotor ( I, II, II)  Factores de transcripción basales y específicos:
Reguladores Activadores
- Enhancer  Represores,
- Silenciadores  Coactivadores o correpresores, Hormonas

Factores TRANS presentan


dominios unión al DNA :
•Motivo dedo de zinc
•Motivo hélice-giro-hélice
•Motivo cremallera de leucina
•Motivo hélice bucle hélice
Motivos estructurales de las proteínas reguladoras

Hélice – giro - hélice Homedominio proteico

Proteínas dedos de Zinc

Cremallera de leucina
Hélice bucle hélice
Proteina p53
PROTEINAS REGULADORAS Y SECUENCIAS DE ADN QUE RECONOCEN
Proteínas con motivos : hélice  lámina , se unen DNA por: contacto: H, iónico, hidrofóbico.

Proteínas Tipo de dominio Secuencia ADN


SP1( specificity protein 1) FT asociados a Dedo de zinc GGGCGGG
ARN pol II. Une a caja GC presente en CCCGCCC
promotores mamiferos carentes de caja TATA.
TFII-A, receptor hormonas
esteroideas y tiroideas
Oct-1 Hélice vuelta hélice ATGCAAT
TACGTTA

Oct-2, myo D ATTTGCAT

Gata TGATAG

AP-1 (heterodímero jun y fos), c-myc Cremallera TGA(C/G)TCA

CREB de leucina TGACGTCA

R.Glucocorticoide GGTACANNNTG
Dedos de zinc TTCT
A. ELEMENTOS CIS
a.1 PROMOTOR BASAL
Secuencias o elementos basales
a2. PROMOTOR PROXIMAL:
Secuencias o elementos proximales

Características:
 Posición: -30 -120
 No especifican la posición de inicio
 Determinan la frecuencia con que se produce el inicio de la transcripción
 Une factores que favorecen la interacción de la Pol II -l ADN
 CCAAT- es el mas común
 CG Orientado a ambos lados de CAT, múltiples copias
a.3. SECUENCIAS O ELEMENTOS DISTALES

Potenciadores: enhancer Silenciadores o inhibidores Aisladores insulators)


 Aumentan la velocidad de inicio Fija FT que compiten con la Impiden que la acción de
de la transcripción acción de FT de los potenciadores y silenciadores se
 Localizados a 10000 pb del gen promotores, potenciadores y extienda mas allá de ellas.
 Situados a 5´, 3´o en el intron proximales Forman lazos quedan aislados
 Acción tejido específca
B. REGULACIÓN ELEMENTOS TRANS:
b1. FACTORES GENERALES
RNA polimerasas (I, II, III), TF,
FT al menos 2 dominios reconocible que son:
1. Dominio de unión ADN: motivos
• dedos de zinc: receptores de hormonas esteroides
•Cremalleras de leucina: FT dependiente de cAMP)
• Helix-tum-hélice: proteínas homeodominio
(genes homeobox)
• Hélice-loop-hélice
2. El dominio de activación, permite FT:
• Enlazarse con otros FT
• Interactuar con la RNA polimerasa II  estabilizar la
formación de la iniciación del complejo
• Reclutar proteínas modificadoras de cromatina como
histonas acetilasas o deacetylases
b2.1. Activadores

Coactivadores: proteínas que


actúan como adaptadores “moleculares”
que integran señales de activadores y
quizás de represores
b2.1. ACTIVADORES Etapas de acción de los aacti

UNIR AL PROMOTOR ADICIONAL REGULADORES

RELUTAR ARN POLIMERASA AL PROMOTOR

LIBERAR EL ARN POLIMERASA AL INICIO DE LA TRANSCRIPCION

LIBERAR EL ARN POLIMERASA A PARTIR DE PAUSA


b.2.2 REPRESORES
No compiten con la ARN polimerasa con en procariotas
Mecanismo de acción son diferentes:

Reclutamiento
Unión de complejos de
competitiva al remodelación de
ADN la cromatina

Estado nucelosómico
pretranscripcional
Ocultación de
la superficies
de activación

Reclutamiento
de histonas
desacetilada

Interacción directa
con los factores
generales de Reclutamiento
transcripción de histonas
Bloquea el ensamblaje de FT metiltransferasa
SINERGIA DE PROTEINAS REGULADORAS
6
Escritura y lectura de La fosforilación
indica Acetilación
del código de histonas k14 de H3
en el inicio de la
transcripción
1
2
INTERFERON GAMA
7
3 8
8 bromodominio

Lectura del
código de
histonas
4
5
 Unión cooperativa
 Una proteína puede ser parte: complejo de
activación o complejo represor función depende
del ensamblaje de todos los componentes
Las concentraciones de las
proteínas reguladoras
cambian durante el desarrollo

Una combinación particular Proteína reguladora se une mediante un bucle


de las proteínas inducen la Forma asa e interactúa a p. reguladoras del gen
Atrae:
transcripción del gen complejos remodeladores
específico Enzimas modificadoras
Maquinaria de transcripción

Cada uno de los genes de la


globina tiene su propio grupo
de proteínas reguladoras
necesaria para activar el gen
en el momento y en el tejido
apropiado
• Falta de alimento
• Intensa actividad
física

Célula hepática
expresión de
genes

Enzimas

Aa glucosa

El Receptor es capaz de unirse a muchos proteínas reguladoras especificas


de tipo celular  su activación con hormona produce en cada tipo celular un
espectro de efectos diferentes
LAS PROTEINAS REGULADORAS EJERCEN CONTROL COMBINATORIO

La regulación de la expresión de genes


es importante para :
Actividad celular
Diferenciación celular

La memoria celular constituye


paso a paso una especificación
combinatoria final
REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA EN EUCARIOTAS

HRE= 12-14 pb
Hormonas esteroideas
GF= Factores de crecimiento

AD: Dominios de activación


LBD: Dominio de union al ligando
DBD: Dominio de union al DNA
A. Control de procesamiento del RNA
◦ Velocidad de procesamiento
◦ Maduración alternativa
B. Control de transporte del RNA
◦ Selección de que RNA son transportados
◦ Transporte activo a través de los poros
C. Control de degradación del ARN
◦ Estabilidad de ARNm
◦ Ribointerferencia
A. PROCESAMIENTO DEL TRANSCRITO PRIMARIO
a.1. PROCESAMIENTO ALTERNATIVO DEL ARNm CONSTITUTIVO
El 75% de genes humanos producen varias proteinas
35-56 % de genes humanos sufren proceso alternativo
Genes proteínas trasductoras de señales mayor frecuencia de este proceso

D. Melanogaster
(14000 genes )

Variantes proteicas

El procesamiento alternativo  ARN maduros, con una diferente combinación de exones.

Ventaja: gen puede dar a múltiples proteínas


a.2. PROCESAMIENTO ALTERNATIVO DEL ARNm regulado
Genera distintas versiones de una proteina en líneas celulares
distintas de acuerdo a la necesidad de la célula
ARN cadena pesada de IG
ARN troponina

ARN tropomiosina

Gen: secuencia de ADN que es transcrito como una sola unidad y que
codifica un conjunto de polipeptidos relacionados = isoformas
La molécula reguladora
evita que la maquinaria
de maduración acceda a
la maduración de l ARNm

La proteina
reguladora dirige a
la maquinaria de
maduración
haciamla secuencia
de procesamiento
a.3. CONTROL EN LA FORMACIÓN DEL EXTREMO 3’ :

El cambio de la concentración de factores generales del


procesamiento de ARN  tiene efecto en la expresión de un gen

Ejemplo: Síntesis de Inmunoglobulina

Presenta cadena de
aminoácidos hidrofobicos
(Sec. TM)

Depende del estadío de desarrollo


Mitocondria de tripanosoma: Inserción de 1 o mas Uracilos
Mamiferos:
Desminaciones : A  Inosina
C Uracilo
Enzima ADAR: adenosinedesaminasee acting on RNA
Localización: a) región codificantes
b)Región no codificante
Higado : ADAR 1
Cerbro : ADAR 2
F. Incierto : ADAR 3

Generan
a) proteínas truncadas
b) Altera maduración
Altera transporte
Altera la eficiencia de
traducción
B. CONTROL EN EL TRANSPORTE DEL ARNm
• El transporte de ARN se realiza de forma activa y muy controlada a través de los poros nucleares.
• Evita que intrones y otros ARN inapropiados viajen al citoplasma.

Síntesis de ARN víricos pequeños Rev reconoce el ARN procesado y se une a la


Síntesis de Rev a partir del ARN procesado proteína del poro nuclear para exportarlo
ARN no procesados son retenidos
ARN no procesados son traducidos y se
empaquetan formando el virus
C. CONTROL DE LA ESTABILIDAD DEL ARNm
La degradación citoplasmática de ARNm  se inicia por acortamiento de colas de poli-A y eliminación
de caperuzas en 5´.
También esta regulada por señales extracelulares
Ejm. ARNm DEL RECEPTOR DE LA TRANSFERRINA

A  CC citosólicas Fe, mensajero liga en


O IRE
extremo 3’ a enzima aconitasa= IRE
(elemento de respuesta al Hierro).
Proteger al ARNm de la acción de
nucleasas.

a  CC citosólica Fe, este compite con


mensajero por IRE se une Fe y libera el
extremo 3’ del receptor de transferrina.
Este extremo 3’ posee 5 bucles
secuencias desestabilizadoras que son
rápidamente reconocidas por
ribozimas. se reduce la traducción de
proteína y con ello ingreso de más Fe –
innecesario- a la célula
 Frecuencia/ velocidad de inicio de la
traducción
 Velocidad de elongación del polipeptido
 Represión de la traducción- ribo-
inetrferencia
 Eficacia de terminación de traducción
RNA termosensor
Bloqueo de Shine Dalgarno x represor
Listeria traduce genes de virulencia
a 37° T° del huesped

Bloqueo de Shine Dalgarno por interruptor Bloqueo de ARN antisentido


b. SECUENCIAS UTR 5’
La secuencia Kozak se encuentra en la mayoría de los ARNm eucariotas:
5’ gccRccAUGG3’, donde R puede ser purina (A o G) tres bases antes del
AUG.
Secuencias reconocidas por el ribosoma como sitio de inicio de traducción.

En bacterias :
Shine Dalgarno

Fue descripta por Marilyn Kozak como «(5')ACCAUGG(3')». La A que precede a la


secuencia AUG y la G ubicada en la última posición determinan la eficiencia de la
iniciación de la traducción.
C. CONTROL DE INICIO DE LA TRADUCCIÓN
c.1. REGULACION POR FOSFORILACION DE eIF2
El factor eIF-2
Subunidades: , β y t

Su actividad está definida por la


formación de complejos ternarios
eIF-2~GTP-Met-tRNA1 y su
posterior unión a la subunidad
ribosomal 40S.
En el caso particular del IFe2B es la
subunidad  la susceptible de ser
fosforilada por una proteinquinasa Se cree que el GTP interacciona
independiente de AMPc que responde a con las subunidades β y t , de este
señales de estrés y se inactiva evitando la modo el eIF-2 es capaz de
formación del complejo 40S. asociarse con el Met-tRNA1

Figura 7-107 Biología molecular de la célula, quinta edición (© Garland Science 2008 y Ediciones Omega 2010)
c.2. CODONES DE INICIO CORRIENTE ARRIBA Y
REGULAN EL INICIO DE LA TRADUCCIÓN
Zonas aledañas al AUG determinan su elección son detectadas
Ejm.
El factor eIF4G↑ favorece la utilización del codon mas cercano al 5’

Proteína 1
AUG AUG
AUG AUG Proteina 2
Lugar de reconocimiento Escoge es Estrategia para
débil e ignorado segundo AUG producir proteínas
con diferentes en
el extremo NH2 ter
ESCANEADO IMPRECISO
Permite que la célula regule Se dirigen a compartimentos
la isoformas proteicas diferentes con o sin peptido
señal
C. CONTROL DE INICIO DE LA TRADUCCIÓN
c.3. REGULACION POR SITIOS INTERNOS DE ENTRADA
Mecanismo dependiente Mecanismo dependiente
de CAP y cola poli A de IRES
 Pta Cientos de nucleótidos
 Requiere factores de inicio
diferentes
 Pero si necesita Cap y eIF4G

Ejm. Infección Viral


ADN viral

proteasa

Corta al eIF4G
eIF4G
truncado Bloqueo de la
Inicia la traducción traducción de la
a partir de IRES célula huésped
D. REGULACION DE LA ESTABILIDAD DEL ARNm
d.1. REGULACION POR DEGRADACION DEL ARNm

Longitud critica
25 nt

Degradación
rápida
d.2. REGULACION POR COMPETENCIA ENTRE LA
TRADUCCION Y DEGRADACIÓN DEL ARNm
UTR 3’ :
 Controlan la vida media del ARNm
 Contiene sitios de unión a proteínas específicas que aumentan o
disminuyen la velocidad de :
- Acortamiento de la cola poli A
- Eliminación de la caperuza
d.2. REGULACION POR COMPETENCIA ENTRE LA TRADUCCION Y
DEGRADACIÓN DEL ARNm

Ejm.

Incrementa la producción al impedir que se


degrade
D. CONTROL DE LA TRADUCCION POR mi ARN

- Sintetizados por Pol II


- No codificante
- Humanos : >1000
- Regulan 1/3 genes humanos
- Regulan ARNm
estabilidad Complejo silenciaidor
mediado por ARN
Traducción RNA induced silencer
- Regulan ARNm si tiene UTR complex
comun
- Regulación puede ser
combinatoria
E. MODIFICACIÓN DE PROTEÍNAS
Mecanismos de control después de la traducción
• Tutores moleculares (chaperonas)
• Modificación: fosforilación, metilación
•Metales pesados: dedos Zn
•Preproteínas. Ej: insulina
Referencias
Alberts . 2008. Biología Molecular de la célula
Gerald Karp. 2008. Biología Celular y Molecular