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HEMOCLOT™ Proteína S Ventas y soporte:

REF CK041K R1 R2 3 x 1 mL CoaChrom Diagnostica GmbH
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REF CK042K R1 R2 3 x 2 mL Teléfono: +43-1-236 222 1 | Fax: +43-1-236 222 111
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Método de coagulación para la medición de la actividad de la Proteína S

Inglés, última revisión: 01-2021

USO PREVISTO: • Utilice únicamente los reactivos del mismo lote de kits. • Los
El kit HEMOCLOT™ Protein S es un método de coagulación para la determinación cuantitativa in vitro estudios de envejecimiento muestran que los reactivos se pueden enviar a temperatura ambiente
de la actividad de la proteína S (PS) en plasma humano citrado, mediante un método manual o sin degradación.
automatizado. • Este dispositivo de uso diagnóstico in vitro está destinado a uso profesional en el
laboratorio.
RESUMEN Y EXPLICACIÓN:
Técnico: PREPARACIÓN DEL REACTIVO:
La proteína S (PS) es una proteína dependiente de la vitamina K, sintetizada principalmente en el hígado. Retirar con cuidado el tapón de liofilización, para evitar cualquier pérdida de producto al abrir el vial.
El PS plasmático existe en dos formas: complejado con C4b-BP, o como forma libre que presenta
actividad anticoagulante al actuar como cofactor de la Proteína C Activada
(APC). En presencia de calcio y fosfolípidos, el complejo APC-PS inhibe los Factores Va y VIIIa.1 R1 R2 Reconstituir el contenido de cada vial con exactamente:
REF CK041K ÿ 1 mL de agua destilada
REF CK042K ÿ 2 mL de agua destilada
Contexto clínico de la prueba:
Agite vigorosamente hasta la disolución completa evitando la formación de espuma y cárguelo en el
La vía de inhibición de PC/PS tiene actividad reducida si la forma libre de PS es deficiente o anormal. analizador siguiendo las instrucciones de la guía de aplicación.
Las deficiencias de PS congénitas o adquiridas se asocian con un mayor riesgo de trombosis venosa. Para el método manual, permita que se estabilice durante 15 minutos a temperatura ambiente (18-
1,2
25°C), homogeneizar antes de usar.
La actividad de PS depende de la edad y el sexo 3,4, y puede disminuir en varios contextos, como:
deficiencia de vitamina K o tratamiento con AVK (que predisponen más a hemorragias que a problemas ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD:
trombóticos), terapia con L-asparaginasa, trastornos hepáticos, síndrome nefrótico, durante el
Los reactivos sin abrir deben almacenarse a 2-8 °C en su embalaje original. En estas condiciones,
embarazo , relacionado con la ingesta de anticonceptivos orales o la terapia con estrógenos, etapas
pueden utilizarse hasta la fecha de caducidad impresa en el kit.
tempranas de enfermedades inflamatorias, infecciones virales, coagulación intravascular diseminada
(CID), trombosis venosa profunda (TVP), embolia pulmonar (EP), rara vez debido a autoanticuerpos
R1 R2 La estabilidad del reactivo después de la reconstitución, libre de contaminación o evaporación, y
anti-PS adquiridos o transitorios ( ej., en niños con varicela).1,2
almacenado cerrado, es de:
• 24 horas a 2-8°C.
Las deficiencias hereditarias de proteína S se clasifican en tres tipos: tipo I y tipo III 1,5
• 8 horas a temperatura ambiente (18-25°C).
las deficiencias representan el 95% de los casos de deficiencia de PS.
• No congelar.
El factor V mutado (por ejemplo, la mutación R506Q de FV Leiden) es resistente a la inactivación de
1
• Estabilidad a bordo del analizador: ver la aplicación específica.
su función coagulante por el complejo APC-PS.

PRINCIPIO: REACTIVOS Y MATERIALES REQUERIDOS PERO NO SUMINISTRADOS:

El kit HEMOCLOT™ Protein S es un método de coagulación que utiliza el tiempo de tromboplastina Reactivos:
• Agua destilada
parcial activado (APTT), desencadenado por el Factor IXa en presencia de fosfolípidos, calcio y una
• Tampón de imidazol (AR021B/AR021K/AR021L/AR021M/AR021N)
cantidad constante y en exceso de APC.
El plasma de prueba diluido se mezcla con plasma deficiente en PS (R1). el activador • CaCl2 a 0,025 M (AR001B/AR001K/AR001L)
• Calibradores y controles específicos:
Se añade el reactivo (R2), a concentración constante y optimizada. La coagulación se desencadena al
agregar calcio (Ca2+) . Dado que PS es el factor limitante, esto da como resultado una relación directa Nombre del Referencia
entre la concentración de PS y el tiempo de coagulación medido correspondiente. producto Calibrador de plasma 222101
BIOPHEN™ Plasma de control normal 223201
BIOPHEN™ Plasma de control anormal BIOPHEN™ 223301
Utilice el mismo búfer para todas las pruebas realizadas.
Consulte también la guía de aplicación específica del analizador utilizado.
IX APC/PS
Materiales:
CÿCa2 + EN
si + y • Analizador de baño María, semiautomático o automático para ensayos de coagulación.
X
• Cronógrafo; pipetas calibradas; tubos de ensayo de vidrio o plástico de silicona.
Vinh
RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS:
La sangre (9 volúmenes) debe recogerse con cuidado en el anticoagulante de citrato trisódico (1
CÿCa2 +
volumen) (0,109 M, 3,2 %) mediante venopunción limpia. Deseche el primer tubo.
II IIa
Las muestras deben prepararse y almacenarse de acuerdo con las pautas locales aplicables (para los
fbg Fibrina Estados Unidos, consulte la directriz CLSI H21-A56 para obtener más información sobre la recolección,
manipulación y almacenamiento de muestras).
REACTIVOS:
Para el almacenamiento de plasma, consulte las referencias 6,7.

R1 Plasma deficiente en Proteína S, inmunodeprimido , liofilizado en presencia de un agente

PROCEDIMIENTO:
neutralizante de heparina.
El kit se puede utilizar en método manual o automatizado. El ensayo se realiza a 37°C y se mide el
Reactivo activador R2, liofilizado. Contiene Factor IXa humano, APC humano y fosfolípidos, en una
tiempo de coagulación, desencadenado por la adición de calcio.
concentración optimizada. Contiene BSA.

Para un método automatizado, las guías de aplicación están disponibles a pedido. Ver guía de
REF CK041K ÿ R1 R2 3 viales de 1 mL
aplicación específica y precauciones específicas para cada analizador.
REF CK042K ÿ R1 R2 3 viales de 2 mL

ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES:
• Algunos reactivos proporcionados en estos kits contienen materiales de uso humano y animal.
origen. Siempre que se requiera plasma humano para la preparación de estos
reactivos, se utilizan métodos aprobados para analizar el plasma en busca de anticuerpos contra el
VIH 1, el VIH 2 y el VHC, y para el antígeno de superficie de la hepatitis B, y los resultados son
resultó ser negativo. Sin embargo, ningún método de prueba puede ofrecer una garantía completa
que los agentes infecciosos están ausentes. Por lo tanto, los usuarios de reactivos de este tipo
deben ejercer un cuidado extremo en pleno cumplimiento de las precauciones de seguridad en el
manipulación de estos materiales biológicos como si fueran infecciosos.
• Los residuos deben eliminarse de acuerdo con las normas locales aplicables.
Método de ensayo:
1. Reconstituir el calibrador y los controles como se indica en las instrucciones específicas.
instrucciones. El calibrador debe diluirse en tampón de imidazol como se describe a continuación para
realizar el rango de calibración ("C" define la concentración de PS o, por definición, 100 % para una
combinación de plasma normal):
Cuando la calibración se realiza con un calibrador de plasma disponible comercialmente (p. ej.,
calibrador de plasma BIOPHEN™), la dilución 1:10 corresponde a la concentración de actividad de PS
“C” indicada.
Para un calibrador que titula C, el nivel del 100 % (en las condiciones del ensayo) se obtiene diluyendo
este estándar por el siguiente factor: 10x(C)/100.

GUIÓN BioMed
155 rue d'Eragny, 95000 Neuville-sur-Oise, Francia D750-02/CK/041K-042K/v2
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El rango de calibración también se puede realizar utilizando una mezcla de plasma normal con citrato (al LIMITACIONES:
menos 30 individuos normales, hombres y mujeres, de 18 a 55 años, sin tratamiento o patología conocida),
• Para garantizar un rendimiento óptimo de la prueba y cumplir con las especificaciones, se deben seguir
que por definición es al 100% de PS. El ensayo incorpora una dilución 1:10 del plasma, que corresponde
cuidadosamente las instrucciones técnicas validadas por HYPHEN BioMed.
por definición a
100% de PS. El rango de calibración es de 0 a 100% PS.
• Cualquier reactivo que presente una apariencia inusual o muestre signos de
la contaminación debe ser rechazada.
Prepare 3 mL de la dilución 1:10 del pool normal de plasmas, o una dilución (10xC/100) del plasma
• Las muestras sospechosas o que muestren signos de activación deben ser rechazadas.
calibrador titulado en PS (es decir, C1). Esta solución corresponde al 100% de PS. Prepare el siguiente
• La prueba se puede realizar en pacientes tratados con heparina (hasta 1 UI/mL) o con AVK (la actividad
rango de calibración mediante diluciones sucesivas en el tampón de imidazol como se describe en la tabla
a continuación para realizar el rango de calibración: de PS está reducida). Se debe prestar especial atención a los pacientes conocidos con niveles altos y
anormales de FVIII:C, anticoagulante lúpico (LA) o FV mutado (R506Q, FV Leiden). La aprotinina tiende
a inhibir la Proteína C activada, la actividad PS "aparente" puede verse disminuida en pacientes tratados
Calibrador C5 C4 C3 C2 C1 8
0% 25% 50% 75% 100%
con aprotinina Si los tiempos de coagulación se acortan o prolongan anormalmente, el resultado debe .
Proteína S (%)
Volumen de calibrador 0 mL 1ml confirmarse mediante otro método (p. ej., inmunológico) y/u otra muestra,
0,250 ml 0,500 ml 0,750mL
Volumen de imidazol
1ml 0,750 ml 0,500 ml 0,250mL 0 ml
buffer y considerado según el contexto clínico.
• Para un mismo lote de reactivos y un mismo plasma, el tiempo de coagulación (CT) puede variar según el
2. Diluir las muestras en tampón de imidazol como se describe en la siguiente tabla: instrumento utilizado (particularmente según la detección del coágulo en modo mecánico u óptico) y el
Muestras Referencia Dilución ajuste de la sensibilidad de detección del coágulo.
Control 223201/223301 1/10
Muestras NA 1/10

VALORES ESPERADOS:
Para obtener los mejores resultados, para concentraciones esperadas >100 %, los valores se pueden
El nivel normal de Proteína S plasmática en población adulta suele estar en el rango de 60 a 140% (variable
obtener analizando el plasma a una dilución de 1:20 y luego multiplicando los resultados por 2; para muestra 3,4
según edad y sexo) . Sin embargo, cada laboratorio tiene que
ÿ10%, use una dilución 1:5 y divida el resultado por 2.
determinar su propio rango normal.

Realice el rango de calibración y pruébelo rápidamente con los controles de calidad. Las muestras diluidas
ACTUACIONES:
deben analizarse rápidamente, si se almacenan a temperatura ambiente (18-25°C).
Siempre que sea posible, para un rendimiento óptimo, todas las pruebas (calibración, muestras y controles) • El límite inferior de detección del analizador depende del sistema analítico utilizado (ÿ
10% es STA-R ®
deben realizarse de forma extemporánea y simultánea. Las concentraciones exactas de los calibradores y -serie).
controles se indican para cada lote en el folleto que se suministra con el kit. • La zona de medición depende del sistema analítico utilizado (aproximadamente
10 a 100% PS en la serie STA- R®, sin redilución).
• Especificidad: plasma deficiente en PS medido <5%.
3. En un tubo de plástico incubado a 37°C, introducir: • Los estudios de rendimiento se realizaron internamente en STA-R ®. Los rendimientos se evaluaron con
Volumen los controles de laboratorio durante 5 días, 2 series por día y 2 repeticiones en cada serie para un nivel
Calibrador, control o plasma (diluido) 50 l de control. Los siguientes resultados fueron obtenidos:
R1 Plasma deficiente en proteína S, preincubado a 37°C 50 l
Mezclar e incubar durante 1 minuto a 37°C, luego agregar: Intraensayos Interensayos
Control
N Moy. CV% SD Moy. CV% DE norte

Reactivo activador R2, preincubado a 37°C 50 l 20

Nivel normal 20 95,5 3,0 98,5 5,1 3,2 5,2
Mezclar e incubar durante 3 minutos a 37°C, luego agregar (poniendo en marcha el cronómetro):
Nivel patológico 20 7,1
33,2 2,4 33,2 2,7 20 8,1
CaCl2 0,025 M (preincubado a 37 °C y agitado) 100 l
• Interferencias: No se ha observado interferencia en el instrumento STA-R ® con las moléculas y hasta las
Tenga en cuenta el tiempo de coagulación, en segundos Connecticut

siguientes concentraciones:
Intralípidos Hemoglobina Bilirrubina Heparinas (UFH/HBPM) (mg/dL)
Si se requiere un volumen de reacción diferente al indicado anteriormente para el método utilizado, la
(mg/dL) (mg/dL) (UI/mL)
relación de volumen debe observarse estrictamente para garantizar el rendimiento del ensayo. El usuario 1000 100 1 60
es responsable de validar los cambios y su impacto en todos los resultados.
Consulte también la guía de aplicación específica del analizador utilizado.

REFERENCIAS:
CALIBRACIÓN:
1. Meireles Rezende S. et al. Coagulación, inflamación y apoptosis: diferentes roles para la proteína S y el
El ensayo HEMOCLOT™ Protein S se puede calibrar para el ensayo funcional de la proteína S plasmática. complejo proteína de unión proteína S - C4b. Sangre. 2004.
El calibrador que cubre el rango de calibración está disponible en HYPHEN BioMed (consulte el párrafo 2. Wypasek E. y Undas Anetta. Deficiencia de Proteína C y Proteína S – Práctica
REACTIVOS Y MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS) y se puede utilizar para Problemas de diagnóstico. Avanzado Clin Exp Med. 2013.
establecer la curva de calibración . 3. Appel IM et al, Dependencia de la edad de los parámetros de coagulación durante la infancia y la pubertad,
El rango de calibración es de aproximadamente 0 a 100 % (en la serie STA-R). J Thromb Haemost. 2012.
4. Lowe GDO et al, Epidemiología de los factores de coagulación, inhibidores y marcadores de activación: la
La curva de calibración que se muestra a continuación se proporciona únicamente a modo de
tercera encuesta MONICA de Glasgow I. Rangos de referencia ilustrativos por edad, sexo y uso de
ejemplo. Debe utilizarse la curva de calibración establecida para la serie de ensayos. hormonas. Br J Haematol. 1997.
5. Castoldi E. et al. Estado de hipercoagulabilidad similar y riesgo de trombosis en individuos con deficiencia
de proteína S tipo I y tipo III de familias con deficiencia mixta de proteína S tipo I/III.
hematológico. 2010.
6. CLSI Documento H21-A5: “Recolección, transporte y procesamiento de muestras de sangre para pruebas
de coagulación basadas en plasma y ensayos de hemostasia molecular; directriz aprobada”. 2008.

7. Mauge L. y Alhenc-Gelas M. Estabilidad preanalítica de los parámetros de coagulación: revisión de los datos
disponibles. Ann Biol Clin. 2014.
8. Tanaka KA et al, El efecto de la aprotinina en la regulación negativa mediada por la proteína C activada
de la generación de trombina endógena. Br J Haematol. 2006.

SÍMBOLOS:
Símbolos utilizados y signos enumerados en la norma ISO 15223-1, consulte el documento de definiciones
de símbolos.

Cambios respecto a la versión anterior.

CONTROL DE CALIDAD:
El uso de controles de calidad sirve para validar el cumplimiento del método, junto con la homogeneidad
del ensayo entre pruebas para un lote determinado de reactivos.
Incluya los controles de calidad con cada serie, según las buenas prácticas de laboratorio, para validar la
prueba. Se debe establecer una nueva curva de calibración, preferiblemente para cada serie de pruebas y
al menos para cada nuevo lote de reactivos, o después del mantenimiento del analizador, o cuando los
valores de control de calidad medidos estén fuera del rango de aceptación del método.

Cada laboratorio debe definir sus rangos de aceptación y verificar el desempeño esperado en su sistema
analítico.

RESULTADOS:

• Para el método de punto final manual, trace la curva de calibración lin-lin, con el tiempo de coagulación
(seg) a lo largo del eje Y y la concentración de PS, expresada como %, a lo largo del eje X.

• La concentración de PS (%) en la muestra de prueba se deduce directamente de la curva de calibración,

cuando se usa la dilución estándar.
• Si se utilizan otras diluciones, el nivel obtenido debe multiplicarse por el
factor de dilución adicional utilizado.
• Los resultados deben interpretarse de acuerdo con las características clínicas y
condición biológica.

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155 rue d'Eragny, 95000 Neuville-sur-Oise, Francia D750-02/CK/041K-042K/v2