PT (Tiempo de Protrombina) Liquido

DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE PROTROMBINA (PT) EN PLASMA CITRATADO

DESTINO DE USO

El tiempo de protrombina (PT) es una prueba fundamental para investigar el funcionamiento de los
factores de coagulación pertenecientes a la vía extrínseca ( Factores II, V, VII, X).

Un PT extendido generalmente indica un nivel reducido de uno o más factores de la vía

extrínseca, debido a coagulopatía adquirida o hereditaria, deficiencia de vitamina K, enfermedades
hepáticas, fibrinólisis, coagulación intravascular diseminada (DIC), terapia anticoagulante oral
(TAO/OAT), reducción de la actividad de los factores de coagulación dependientes de la vitamina
K (factor I, VII, IX, X. proteína C, La proteína S) aumentando el tiempo de protrombina.

La capacidad de la sangre para formar un coágulo de fibrina mediante la vía extrínseca necesita de
Tromboplastina, calcio, Factores I, II, V, VII, X

PRINCIPIO

El Reactivo de PT consiste en una tromboplastina extraída del cerebro de conejo, que contiene una
cantidad optimizada de iones de calcio que son altamente sensibles a la deficiencia de los factores
de la vía "extrínseca". II, V, VII, X

Esto lo hace particularmente eficaz en el monitoreo de la terapia anticoagulante oral (TAOIOAT).

PRECAUCIONES DE USO

1-.Este producto ha sido formulado para uso diagnóstico in vitro

2-.Una variación proporcional de los volúmenes de reacción no modifica el resultado.

3-.NO mezcle reactivos de diferentes lotes de producción.

4-.El reactivo contiene como conservantes (azida sódica u otros), cuya concentración total es
inferior a los límites indicados en Dir, 671548 / CEE y 88 / 379/CEE y modificaciones relativas para
clasificación, etiquetado y envasado de preparaciones peligrosas. Sin embargo, se recomienda
manipular los reactivos con precaución, evitando la ingestión y el contacto con los ojos, la piel y las
membranas mucosas; de las normas de buenas prácticas de laboratorio en el uso de estos
materiales. Los procedimientos de seguridad describen los procedimientos operativos para el
manejo de este producto.

ATENCIÓN

A) El reactivo se puede utilizar con sistemas de detección manual, mecánico, fotométrico y

nefelométrico. Las determinaciones automáticas se deben llevar a cabo de acuerdo con las
instrucciones específicas adjuntas al instrumento utilizado.

B) Se debe prestar mucha atención a las sustancias interferentes: algunas drogas y otras
sustancias podrían influir en los niveles o la dosis de PT (consulte la Bibliografía 2).
C) El reactivo debe ser utilizado ÚNICAMENTE para lo indicado, por personal experto y
capacitado, siguiendo las reglas de buenas prácticas del laboratorio.

D) El diagnóstico clínico no se puede hacer correctamente utilizando el resultado obtenido en una

sola prueba, se debe hacer integrando resultados de diferentes pruebas de laboratorio con
diferentes datos clínicos.

E) Una serie de factores, tales como la temperatura ambiente, la temperatura del reactivo, la
precisión de los lavados, tipo de coagulómetro, material utilizado, pueden influir en el resultado de
la prueba.

F) El valor del lSI debe insertarse en el instrumento para cada cambio de lote del reactivo.

G) la curva de calibración debe repetirse cada vez que se cambie el reactivo y / o el calibrador.

H) Para las precauciones que normalmente se adoptan en el laboratorio Todos los calibradores y
controles son muestras humanas, por lo tanto, potencialmente infecciosas, se deben tomar todas
las medidas de protección adecuadas para evitar cualquier tipo de riesgo biológico potencial.

REACTIVOS

Composición del kit:

R1- THROMBOPLASTIN L

Tromboplastina de cerebro de conejo.

Excipientes y estabilizadores.

CaC12 ˃0.1 g/L

NaN3 <0.1%

ESTABILIDAD: los reactivos cerrados son estables hasta la fecha de caducidad indicada en las
etiquetas y a una temperatura de 2-8°C si no está expuesto a cambios de temperatura o de
presión.

REACTIVOS AUXILIARES PARA EL CONTROL DE CALIDAD.

Para garantizar un rendimiento adecuado de la prueba, utilice los siguientes kits CONTROL
NORMAL DE COAGULACIÓN.
CONTROL ANORMAL LEV1
CONTROL ANORMAL LEV2
Cada laboratorio debe establecer su propio rango de control que determine la variación aceptable
del rendimiento diario de cada plasma de control. La curva de calibración siempre debe ser
repetida en cada cambio del reactivo y / o lote de calibrador

PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO

R1-THROMBOPLASTIN Reactivo listo para usar. Antes de usar, los contenedores deben
mezclarse varias veces para asegurar la homogeneidad del contenido. Si los recipientes se dejan
reposar por largos períodos de tiempo, se puede formar un sedimento de tromboplastina.
Deje el reactivo de 15-25°C durante 30 minutos. Mezclar suavemente antes de usar, NO agitar.
NUNCA CONGELE el reactivo.

Cierre inmediatamente después de usarlo. Los productos deben manipularse de manera adecuada
para evitar cualquier contaminación. El uso no competente nos eximirá de toda responsabilidad.

ESTABILIDAD DEL REACTIVO DE TRABAJO

Después de abrir el reactivo R1-THROMBOPLASTIN L es estable 30 días de 2-8°C en la botella

original.

Se sugiere agitación continua durante la prueba.

Al final de los ciclos de trabajo, se sugiere mantener el Reactivo de 2-8°C en la botella original,
para una mejor estabilidad.

MATERIALES REQUERIDOS PERO NO PROPORCIONADOS.

Equipo de laboratorio normal.

Micropipetas de 3 a 1000 uL.
Puntas desechables para micropipetas.
Tubos de ensayo de plástico para dilución de muestras.
Tubos de ensayo de coagulación.
Cronómetro o temporizador.
Baño termostático 37°C
Calibrador, Controles, Diluyente.

MUESTRA.
Recolección de muestras de acuerdo a las especificaciones de la prueba, tomando la muestra en
tubos de ensayo citratados.

ELIMINACIÓN DE MATERIALES
Para eliminar los desechos siga las regulaciones locales vigentes.

PROCEDIMIENTO ANALÍTICO CON METODO MANUAL

-Precaliente el reactivo R1-THROMBOPLASTIN a 37° C
-Pipetear en un tubo de coagulación como sigue.
-Plasma 0.1 ml
Incubar el plasma durante 1-2 minutos a 37 ° C
-R1-THROMBOPLASTIN 0.2 mL
Activar el cronómetro simultáneamente al agregar el reactivo, detener el cronómetro a la
formación del coágulo.

CURVA DE CALIBRACIÓN
Preparar plasma calibrador según especificaciones.
100% 50% 25%
Calibrador 0.5 ml 0.5ml 0.5ml
Diluyente - 0,5ml 1,5ml
Grafique los datos experimentales en un gráfico. Colocando las diluciones en el eje Y, en el eje X
para los tiempos de coagulación obtenidos (segundos). Encuentre la mejor línea recta entre estos 3
puntos, aplique los tiempos de los pacientes individuales en esta curva, obteniendo para cada uno
la expresión del resultado en% de actividad de Protrombina (%PT) en comparación con el valor
normal.

ADVERTENCIA
El kit se prueba en un coagulómetro automático de la familia ACL (I.L). Las
aplicaciones en coagulómetros automáticos / semiautomáticos o manuales de
otros fabricantes pueden ser totalmente diferentes de lo que hemos
experimentado.

CÁLCULO Y EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS

Calcule el promedio de los tiempos de coagulación de las muestras duplicadas y la
precisión de los controles, si la diferencias de los duplicados es ˃ 10% repita la
prueba si es necesario, los resultados de los pacientes se puede expresar
utilizando la medición en segundos en la formación del coágulo, la relación del
tiempo de coagulación del paciente frente al promedio de los tiempos de
coagulación de la normalidad, el % de actividad (esta expresión necesita la curva
de calibración) y la relación internacional normalizada (INR) se recomienda para
pacientes que se someten a terapia con Anticoagulante.
INR (International Normalized Ratio) ISI (Procedimiento Internacional e Índice de
Sensibilidad).
Se han lanzado los Comités Internacionales de ICSH / ICTH Las recomendaciones
de Regresión para tomar los resultados de la prueba PT ya que INR se basa en el
ISI Reactivo PT.
Para cada lote de Reactivo PT, se asigna un valor ISI por calibración contra un
Material de Referencia Internacional WHO (World Health Organization) (NIBSC
RBTOS-2012) VALOR DE PT por ISI LINR se calculará con la siguiente fórmula:
INR= (Paciente PT / PT normal)
ISI=Indice de lote específico para cada sistema de medición: reactivo /
instrumento.
Media PT normal (MNPT) = Promedio del rango normal lote específico.
Cada laboratorio debe determinar para el sistema Reactivo / Instrumento mediante
pruebas de al menos 20 muestras normales.

VALORES DE REFERENCIA
Los resultados de PT están influenciados por el método de determinación de coagulación, el
reactivo y el instrumento incluidos, que pueden variar de un laboratorio a otro.
En general, la prueba PT con plasma normal origina tiempos de coagulación entre 10 y 16
segundos. Sin embargo, cada laboratorio deberá establecer su propio rango de valores normales
mediante pruebas a individuos representativos de su población.
Los rangos terapéuticos para el monitoreo de TAO / OAT también variarán de un laboratorio a otro:
Valor anormal obtenido en un plasma de paciente,indica la carencia de un factor o la presencia de
un inhibidor, en estos casos, una prueba de APTT es útil y un estudio con plasmas con factores de
carencia.
RENDIMIENTO ANALÍTICO
(validado en ACL -7000 (IL)) El rendimiento del reactivo líquido PT (Tiempo de protrombina) se ha
probado con un coagulómetro ACL-7000 (IL). Los datos, aunque representan las características del
producto, pueden variar para cada laboratorio individual y para los diferentes coagulómetros.
Limitaciones del método:
Interferencias: Criterio de interferencia pruebas de recuperación del 10% del valor inicial. No se
observó interferencia con:
-heparina hasta 0,5 U / mL
-bilirrubina total hasta 40 mg / dl
-hemoglobina hasta 600 mg / dL
-lipemia [Intralipid ®] hasta 1000 mg / dl
-ácido ascórbico hasta 50 mg

Precisión de la serie: determinada en 20 repeticiones de 3 muestras. Los resultados obtenidos

son los siguientes.
MUESTRA MEDIA(segundos)±2s CV%
Plasma Humano 1 12.75 ± 0.16 0.60
Plasma Humano 2 25.79 ± 0.46 0.88
Plasma Humano 3 51.28 ±1.02 1.00

Precisión entre series: determinada por 5 días de 20 replicados por día 3 muestras. Los resultados
obtenidos son los siguientes:
MUESTRA MEDIA(segundos)±2s CV%
Plasma Humano 1 12.68 ± 0.26 1.05
Plasma Humano 2 25.21 ± 0.53 1.04
Plasma Humano 3 51.01 ±1.81 1.78
PRECISIÓN: se probó un grupo de 33 plasmas con este procedimiento y utilizando un reactivo
similar disponible en el mercado. La comparación dio los siguientes resultados:
Regresión lineal y= 0.9441x +1.553
Coeficiente de correlación r= 09985 n= 33

PRESENTACION DE LOS REACTIVOS

R1 PT (Prothrombin Time) Liquid

10x2 ml (100 Test)(cod. )
10x4.0 ml (200 Test)(cod. )
5x2.0 ml ( 50 Test)(cod )
BIBLIOGRAFÍA
1-.TietzTextbook of Clinical Chemistry, Ed por CA. Burtis, Elsevier Saunders Co, St. Louis-MO
(2012).
2-.Young D. S., Efecto de los medicamentos en el ensayo de laboratorio clínico, 5ta. Edición AACC
Press (2000)
3-. CLSI (NCCLS) H21-A5: Recolección, manejo. Transporte y almacenamiento para hemostasia.
Guía rápida
4-. CLSI (NCCLS) H47-A2: Prueba PT de una etapa y prueba aPTT
5-. van Rijn, JL.M.L et al, Clin Chem. 35, 840 (1989)
6-.WHO Tech. Rep. Serie N'889, 64 (1999)
7-. Hirsh, J et al, Chest, 102, 312S (1992)
8-. ICSH / ICTH Recommend. Para reportar PT en OAT, Acta Haemat. 72 405 (1984).