"Año del Florecimiento de la Soberanía Nacional"

UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA

LA MOLINA

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA

CURSO: QUÍMICA ANALÍTICA - LABORATORIO
INFORME DE PRÁCTICA N°9
TÍTULO:ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN MOLECULAR UV-VIS
DETERMINACIÓN DE ABSORTIVIDAD MOLAR Y LONGITUD DE ONDA
DE MÁXIMA ABSORBANCIA
N° DE MESA: 4B

Apellidos y nombres Código

Erazo Coaguila, Carlos Luis Enrique 20161393

Ventura Cueva, Jose 20212008

Facultad y especialidad: Pesquería e Industrias alimentarias

Horario de práctica (día y hora): Miércoles 10:00am - 12:00am
Apellidos y nombres del profesor de laboratorio: Juan Carlos Palma
Fecha de la práctica: 13/07/2022
Fecha de entrega del informe: 20/07/2022
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LA MOLINA - LIMA - PERÚ

1. Introducción
La absorción de radiación ultravioleta, visible o infrarroja es utilizada en gran medida
para identificar y determinar muchas especies químicas inorgánicas, orgánicas y
bioquímicas. La espectroscopia de absorción molecular en las regiones ultravioleta y
visible del espectro se utiliza en su mayor parte para el análisis cuantitativo y
posiblemente es aplicada de manera más extensa en los laboratorios químicos y
clínicos que cualquier otra técnica.
Varios tipos de especies químicas moleculares absorben radiación ultravioleta y
visible. La absorción molecular por parte de estas especies químicas puede
utilizarse para los análisis cuantitativos y cualitativos. (A. Skoog, M. West, James
Holler, & R. Crouch, 2014)

1.1. Justificación
Las técnicas espectroscópicas se basan en los fenómenos de absorción y emisión
de energía que tienen lugar en la interacción entre la radiación electromagnética y la
materia. Se trata de un conjunto de técnicas que abarcan conjuntamente un amplio
campo de aplicación, son fácilmente automatizables y ofrecen una relativamente alta
rapidez de operación.

1.2. Objetivos
● Calcular la absortividad molar y longitud de máxima absorbancia de las
sustancias utilizadas.
● Construir una gráfica de curva de calibración.

1.3. Hipótesis
● La absortividad molar y la longitud de onda de máxima absorbancia depende
de cada sustancia y varía con la longitud de onda.
● La absorbancia varía en forma directamente proporcional con la
concentración de la sustancia absorbente a una determinada longitud de
onda.

2. Revisión de literatura
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2.1 Espectro electromagnético

El espectro electromagnético es la distribución de energías de las radiaciones
electromagnéticas. Se puede expresar en términos de energía aunque más
comúnmente se hace en términos de la longitud de onda y frecuencias de las
radiaciones. Se extiende desde las radiaciones con menor longitud de onda (los
rayos gamma) hasta las de mayor longitud de onda (las ondas de radio).(Coluccio
Leskow, 2021)

Figura: Espectro electromagnético

Fuente:https://ele.chaco.gob.ar/mod/resource/view.php?id=210441&forceview=1

2.2 Ley de Lambert y Beer

La radiación incidente, con potencia radiante P0, atraviesa una solución de una
sustancia absorbente con concentración c recorriendo una trayectoria b (la
longitud de la celda donde se encuentra la muestra); de aquí sale como radiación
emergente (o transmitida), la cual posee una potencia radiante P. Esta potencia
radiante es la cantidad que miden los detectores espectrométricos.(D. Christian,
2009)
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Figura:Absorción de la radiación. P0=potencia de la radiación incidente, P=potencia de la

radiación transmitida,c=concentración, b=distancia recorrida por la radiación.
Fuente:https://ufsj.edu.br/portal-repositorio/File/frankimica/Quimica%20Analitica%20Aplic
ada%20II/Aula%204%20-%20Introdu%E7%E3o%20%E0%20Espectrometria.pdf
La transmitancia, T, de la disolución es la fracción incidente de la radiación
transmitida por la disolución. A menudo la transmitancia es expresada como un
porcentaje, el cual es llamado porcentaje de transmitancia.(A. Skoog, M. West,
James Holler, & R. Crouch, 2014)
𝑃0 𝑃0
𝑇= 𝑃
%𝑇 = 100 𝑃

La absorbancia, A, de una disolución está relacionada con la transmitancia de

una forma logarítmica
𝑃0
𝐴 =− 𝑙𝑜𝑔10𝑇 = 𝑙𝑜𝑔 𝑃

Ecuación de Lambert y Beer

𝐴 = ε. 𝑏. 𝑐
2.3 Curva de Calibración
Una curva de calibración o curva estándar, se determina,
experimentalmente,preparando una serie de soluciones de concentración
conocida y midiendo la absorbancia de cada una de ellas a la longitud de onda
de máxima absorbancia. Con los datos obtenidos se construyen curvas de
absorción – concentración como el ejemplo de la figura. La relación
Absorbancia vs distancia de recorrido de la radiación o concentración es lineal
mientras que con la transmitancia no lo es.(PALMA,2020)

Figura:Curva de valoración
Fuente:QUÍMICA ANALÍTICA GUÍA DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO. Palma, 2020
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3. Materiales y metodología
3.1. Materiales/equipos/reactivos
3.1.1. Materiales y equipos

Matraz volumétrico o
Pipetas volumétricas Pipetas graduadas de vaso de precipitados
fiolas de 25, 50, 10
de 1,2,5 y 10 mL 10 mL de 50 y 100 mL
mL(06 de cada uno)

Pizeta con agua Cubetas de plástico o Espectrofotómetro

balanza análitica
destilada vidrio y cuarzo UV-VIS

3.1.2. Reactivos

Disolución Disolución
estandarizada de estandarizada de
KMnO4 0.002M K2Cr2O7 0.003M
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3.2. Metodología

Actividad 1. Elaborar del Actividad 2. Actividad 3. Balance de masa de

de absorción Construcción de una entradas y salida de materiales.
curva de calibración Cualitativo

● Preparar una ● Construir la curva ● Identificar y clasificar los residuos

solución de de calibración generados y disponerlos en los
concentración que ● Completar la tabla 3 recipientes que corresponden.
cumpla con la ley de Elaborar un esquema de elementos
Lambert y Beer de entrada y salida para cada
● Completar la tabla 2 experimento o ensayo realizado
usando como modelo el esquema 2

4. Resultados y discusión
4.1. Resultados
Tabla 1. Espectros de absorción: absorbancia vs longitud de onda

Fuente:Elaboración propia

● Gráfica n° 1: Longitud de onda vs Absorbancia

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Fuente: elaboración propia

● Gráfica n° 2: Longitud de onda vs Absortividad molar

Fuente: elaboración propia

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Fuente: Elaboración propia

● Gráfica n° 3: Longitud de onda vs Absorbancia

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● Gráfica n° 4: Longitud de onda vs Absortividad molar

Fuente: Elaboración propia

Tabla n° 2: Curva de calibración

Fuente: Elaboración propia

● Gráfica n° 5: Concentración estándar vs Absorbancia

Fuente: Elaboración propia

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Fuente: Elaboración propia

● Gráfica n° 6: Concentración estándar vs Absorbancia

4.2. Discusiones
● La absorbancia es una magnitud aditiva, de forma que su valor será el
resultado de la contribución de cada uno de los componentes de la muestra
que absorba a una determinada longitud de onda. (Bermejo,R. 2014). Por tal
motivo en la tabla 1 fue necesario realizar mediciones con varias longitudes
de onda para ambas sustancias, de esa manera se obtuvo la absorbancia de
cada longitud de onda, y en base a la absorbancia, la longitud del lado de la
cubeta y la concentración molar de cada sustancia determinamos la
absortividad molar(ϵ).
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● En la sustancia 1(K2Cr2O7), se obtuvo una absortividad molar máxima de

800 L/cm*mol a una longitud de onda máxima de 400 nanómetros, y gracias
a estes dato se demuestra el porque esta sustancia se aprecia un color
anaranjado y no un color violeta, los rayos que son absorbidos en el espectro
electromagnético son los colores violeta y los que no son absorbidos son los
colores anaranjados. De igual forma sucede con la otra sustancia trabajada
en el laboratorio, que es el KMnO4, se obtuvo una absortividad molar
máxima de 2225 L/cm*mol a una longitud de onda máxima de 525 nm.
● En la tabla 2, se determinó la curva de calibración de las dos sustancias
trabajadas en el laboratorio, previo a ello, se hizo los cálculos y se halló la
transmitancia a base las absorbancias. Al graficar se observa que la curva es
de forma lineal con un margen de error mínimo en la sustancia 1 y con un
margen de error nulo en la segunda sustancia, esta curva lineal corresponde
a la relación directa que posee la concentración molar con la absorbancia.

5. Conclusiones
● Se llegó a calcular la absortividad molar y longitud de máxima absorbancia
de las sustancias utilizadas y con los datos obtenidos del experimento.
● Se construyeron las curva de calibración con los datos obtenidos de longitud
de onda y absortividad molar
6. Recomendaciones
● Al momento de sostener la cubeta hacerlo por los lados no transparente para evitar
que los lados transparentes, por donde pasará la luz, no se ensucie.
● Colocar de manera correcta las cubetas cuando se vayan a utilizar en el
espectrofotómetro para obtener una correcta lectura.
● Utilizar los implementos de protección personal al trabajar en el laboratorio para
evitar accidentes.

7. Referencias bibliográficas
● A. Skoog, D., M. West, D., James Holler, F., & R. Crouch, S. (2014). Fundamentos
De Química Analítica. México: Cengage Learning.
● Palma, J. C. (2020). QUÍMICA ANALÍTICA GUÍA DE PRÁCTICAS DE
LABORATORIO. Lima: UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA.
● D. Christian, G. (2009). QUÍMICA ANALÍTICA. MÉXICO: Mc Graw Hill.
● Coluccio Leskow, E. (14 de Julio de 2021). Espectro electromagnético. Obtenido de
Concepto: https://concepto.de/espectro-electromagnetico/
● Bermejo Moreno, R., & Moreno Ramírez, A. (2014). Análisis instrumental. España:
EDITORIAL SÍNTESIS, S. A.
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8. Cuestionario
1. ¿Cuál es el propósito e hipótesis de la práctica 9?
Propósito:
● Calcular la absortividad molar y longitud de máxima absorbancia de un cromófono a
partir de un espectro de de un espectro de absorción.
● Construir la curva de calibración.
Hipótesis:
● La absortividad molar y la longitud de onda de máxima absorbancia depende de
cada sustancia y varía con la longitud de onda.
● La absorbancia varía en forma directamente proporcional con la
concentración de la sustancia absorbente a una determinada longitud de
onda.

2. ¿Cree usted que ha logrado esa competencia?

Si, porque se cumplieron con los propósitos de esta práctica
3. Explique la espectroscopia de absorción molecular UV-VIS. Aplicaciones.
La espectroscopia ultravioleta-visible (UV-VIS) es una potente técnica para diversas
aplicaciones de distintas industrias y segmentos de mercado.
Cuando una sustancia absorbe el máximo de luz a una determinada longitud de onda, se
da una relación única entre la sustancia y su espectro UV-VIS. Esta relación puede servir
para:
● Análisis cualitativos, es decir, determinar la presencia de ciertas sustancias. Por
ejemplo, la determinación del contenido de DOBI y caroteno en aceites y grasas
comestibles, la identificación de contaminación, como el cromo y el hierro en el
agua,la identificación de la cianocobalamina y la comprobación de la pureza del
ADN/ARN.
● Análisis cuantitativos, es decir, determinar las cantidades de ciertas sustancias. Por
ejemplo, la determinación de la concentración de sustancias en el agua, como la
DQO o el amoníaco, la determinación de la unidad de amargor de las bebidas
alcohólicas, la medición del contenido de azúcar en las bebidas y la cuantificación de
las proteínas.
4. ¿Qué son los colores complementarios? Explique.
Los colores complementarios son colores que se sitúan enfrente de otro en lo que se
conoce como la rueda de color. Los colores primarios, rojo, amarillo y azul, tienen cada
uno su color secundario complementario, naranja, verde y violeta.
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5. Explique la Ley de Lambert y Beer. Defina Transmitancia y absorbancia y

¿cuál es la relación entre ellos?
Ley de Lambert-Beer: Establece que la absorbancia está directamente relacionada con
las propiedades intrínsecas del analito, con su concentración y con la longitud de la
trayectoria del haz de radiación al atravesar la muestra.
Absorbancia (A): La absorbancia es la capacidad de la sustancia para absorber una luz
que incide sobre su superficie.
Transmitancia (T): La transmitancia es la proporción de luz que atraviesa la superficie del
objeto.
𝑃0
𝑇= 𝑃
𝐴 =− 𝑙𝑜𝑔10𝑇

6. A qué se refiere la naturaleza dual de la radiación electromagnética.

¿Cuáles son las regiones del espectro electromagnético?. ¿Cuál es la
ecuación que relaciona la velocidad de la luz con frecuencia de radiación?
¿Cuál es la ecuación de Planck?
-Las radiaciones electromagnéticas son formas energéticas puras, con una doble
naturaleza muestra características duales, de onda, y de partícula, en dependencia de
cómo es observada y/o medida.
-En orden creciente de frecuencias (decreciente en longitudes de onda) el espectro
electromagnético abarca las siguientes regiones: ondas de baja y radiofrecuencia,
microondas, infrarrojo, visible, ultravioleta, rayos X y rayos Gamma.
-La ecuación que relaciona la velocidad de la luz con frecuencia de radiación:

-
-La ecuación de Planck:

h= constante de Planck
f= frecuencia
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7. Dibuje los componentes generales de un espectrofotómetro de absorción

molecular.Indique cual es la función de cada uno

Fuente: https://espectrofotometros-de-laboratorio.com/

8. ¿Qué es un espectro de absorción; cómo se construye y qué información

permite obtener?Dibuje y explique.
Un espectro de absorción es un registro de la intensidad de la absorción de luz por una
muestra en función de la longitud de onda (o frecuencia) de la luz incidente. Un espectro
de absorción muestra que longitudes de onda son absorbidas por la molécula en estudio
al pasar de niveles de menor a mayor energía. Las bandas observadas en el espectro
dan información sobre las diferencias energéticas entre los estados energéticos de una
molécula. Un espectro de absorción UV-visible no proporciona una clara identificación de
un compuesto. Sin embargo, es muy útil para observar cambios en los grupos
funcionales de una molécula, debido a que es muy sensible a ellos. Por ejemplo, formas
ácido-base diferentes de una misma sustancia pueden claramente ser identificadas por
las diferencias en sus espectros de absorción.
Para obtener un espectro de absorción se requiere de un equipo que posea una fuente
de luz estable, con capacidad de variar la longitud de onda en forma 50 continúa en la
región UV-visible del espectro electromagnético. Debe poseer también un detector capaz
de responder linealmente con la intensidad de la radiación transmitida a través de la
muestra. La muestra puede encontrarse en fase gaseosa, líquida o sólida, pero
usualmente se encuentra en soluciones diluidas, contenidas en celdas de vidrio o cuarzo.
La celda debe ser transparente a la radiación, por ello el uso de celdas de cuarzo es
esencial para longitudes de onda menores que 300 nm. Si la muestra se encuentra en
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solución, debe realizarse una corrección por el solvente, debido a que el mismo puede
presentar absorción UV-visible.

Fuente:http://www.100ciaquimica.net/temas/tema3/punto5.htm

9¿Qué es una curva de calibración y cómo se construye?. ¿Cómo

demuestra si la relación es lineal o cumple con la ley de Lambert y Beer.
La curva de calibración es un método muy utilizado en química analítica para determinar
la concentración de una sustancia (analito) en una muestra desconocida, sobre todo en
disoluciones. El método se basa en la relación proporcional entre la concentración y una
determinada señal analítica (propiedad). Conociendo esta relación, será posible conocer
la concentración en una muestra dada mediante la medida de esa señal. La relación
concentración – señal se suele representar en una gráfica a la que se le conoce como
curva de calibración o curva de calibrado.
La ley de Lambert-Beer permite la determinación de concentraciones de disoluciones
problema, a partir de una recta de calibrado obtenida midiendo las absorbancias de
disoluciones patrón de concentraciones conocidas. Para hacer las determinaciones
cuantitativas se elige, en general, la longitud de onda correspondiente a un máximo, pues
el error de medición es mínimo y la sensibilidad máxima. Si es válida la ley de Beer para
esa sustancia a esas concentraciones, la relación debe ser una recta que pase por el
origen de los ejes cartesianos. A menudo se observan desviaciones debidas a diversos
factores.

Fuente: https://www.upct.es/~minaeees/espectro_electromagnetico.pdf
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