UNIVERSIDAD PEDAGÓGICA Y TECNOLÓGICA DE COLOMBI A

FACULTAD DE CIENCIAS - ESCUELA DE FÍSICA

GUÍA DE LABORATORIO DE FÍSICA MODERNA EXPERIMENTAL 23 may 2023

ESPECTROGRAFO
OBJETIVOS

 Familiarizarse con el uso del espectrógrafo.

 Conocer y usar la ley de Lambert-Beer.
 Medir la concentración de sulfato de cobre en una solución problema.
 Conocer una aplicación de la física en química analítica.

MATERIALES

 Agua destilada
 Sulfato de cobre
 Espectrógrafo
 Pipetas

INTRODUCCION

La espectrofotometría es una técnica que aprovecha la facilidad con la que los materiales absorben
ciertas longitudes de onda, para determinar la concentración de un compuesto en una solución .Para
realizar esta técnico se utilizara un espectroscopio que permite variar la longitudes de onda emitida
hacia una muestra de solución, además ,esta técnico permite la identificación de moléculas en
soluciones .

En esta práctica se explicará los principios básicos que permiten el funcionamiento del
espectrofotómetro, después de lo cual se utilizara para medir la concentraciones de una solución
problema, usando curvas de calibración.

MARCO TEORICO

Espectros de absorción

Cualquier molécula o átomo tiene la capacidad de absorber luz en forma de radiación y convertirla
en energía interna. Sin embargo, esta absorción de energía provoca un salto del estado basal a
estados excitados de la molécula o átomo, que debido a su naturaleza cuántica, solo se permiten
valores específicos, por lo que , la absorción de luz solo ocurre cuando la luz incidente tiene ciertos
valores específicos que dependen de cada molécula, es decir, transporta cantidades específicas de
energía. Dado que los valores permitidos de absorción son específicos para cada molécula y átomo,
la espectrofotometría se convierte en una excelente herramienta para su identificación. Al analizar
el espectro de absorción de una muestra, se pueden detectar las longitudes de onda de luz que son
absorbidas de manera característica por cada sustancia, lo que permite su identificación.[1]
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Figura 1: Espectro de absorción del Hidrogeno

TRANSMIRANCIA Y ABSORBANICA
Cuando un rayo de luz con intensidad Io incide sobre una solución y tiene una longitud de onda
que le permite ser absorbido por la sustancia disuelta , una parte de la radiación(Ia) es absorbida
disminuyendo la intensidad a un valor It.

Figura 2 : Esquema de proceso de absorción

Transmitancia (T): La tramitación de una sustancia en solución es la relación entre la intensidad It que
llega al detector una vez que ha atravesado la solución,, y la cantidad de luz que incidió sobre ella, Io, y se
representa normalmente en tanto por ciento: % T = It/Io x 100 La transmitancia nos da una medida física de
la relación de intensidad incidente y transmitida al pasar por la muestra. La relación entre %T y la
concentración no es lineal, pero asume una relación logarítmica inversa.[2]
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Absorbancia (A): La absorbancia es un concepto relacionado con la muestra puesto que nos indica la
cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el logaritmo de 1/T, en consecuencia: A = log 1/T
= -log T = -log It/ Io. Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales (Io = It), la transmitancia es
del 100% e indica que la muestra no absorbe a una determinada longitud de onda, y entonces A vale log 1 =
0. [2]

LEY DE BEER -LAMBERT

La ley de Beer-Lambert, establece una relación empírica entre la absorción de luz y las propiedades
de la sustancia a través del cual pasa. Esta ley fue descubierta de manera independiente por ,
Johann Heinrich Lambert en 1760 y August Beer en 1852. Tanto Wilhel Beer como Johann
Lambert propusieron de forma independiente que la absorbancia de una muestra a una longitud de
onda determinada depende de la concentración de la sustancia absorbente presente en la muestra y
la longitud que atraviesa la luz.[3] Esta ley establece que
A=𝜉𝐶𝐿

Ecuacion 1 : Ley de Beer – Lambet , donde A es la absorbancia , C la concentración de la luz , L el

grosor de la muestra y 𝜉 corresponde a el coeficiente de absorción propio de cada longitud de
onda y casa sustancian.
Esta ley garantiza que la relación de la absorbancia y concentración, con muestras con la misma
sustancia diluida y testeadas con la misma longitud de onda es lineal .

ESPECTROGRAFO

Un espectrógrafo consiste de :
1. Una fuente de energía radiante: lámpara de deuterio y tungsteno.
2. Un monocromador para la selección de radiaciones de una determinada longitud de onda: filtros, prismas,
redes de difracción.
3. Un compartimento donde se aloja un recipiente transparente (cubetas o tubos) que contenga la muestra
Pueden ser de vidrio, cuarzo o plástico transparente. Para medir en UV se deben usar las de cuarzo o sílice
fundido, porque el vidrio no transmite la radiación UV.
4. Un detector de luz y un amplificador convertidor de las señales luminosas en señales eléctricas.
5. Un registrador o sistema de lectura de datos
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Figura 3 : Esquema de un espectrógrafo .

CURVAS DE CALIBRACION

Una curva de calibración nos muestra el comportamiento en una región (un intervalo de valores de
la magnitud independiente) de una magnitud dependiente en este caso la Absorbancia ,
respecto a cambios en la magnitud independiente en este caso la concentración de sulfato de cobre .

Figura 4:Ejemplo de curva de calibración.

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Para construirla debemos en primer lugar conocer los valores de las dos mantudes en diferentes
puntos del intervalo , esto se logra a través de medidas directas o indirectas , estos datos se grafica
uno vs el otro , y dependiendo de la forma de la curva mostrada se utilizan diferentes métodos para
aproximar una funcion que represente a estos datos en este caso debido a que los datos de
absorbancia y concentración siguen la ley de Beer-Lambert un comportamiento lineal ,para el cual
se utiliza el método de mínimos cuadrados , sin embargo ya existen diferentes softwares que lo
realizan de manera automática como Origin o Excel .

PROCEDIMIENTO
En primer lugar se deben preparar 3 muestras ,con sulfato de plata y agua destilada , cada una con
concentración de 1 ,2 y 3 partes por millón , respectivamente además de esto se le proporcionara la
muestra problema con una concentración desconocida .

Figura 5: Muestras preparadas

Después de esto se debe abrir el espectrógrafo dentro del cual se encontró con 1 cajita rectangular
con dos caras opacas y dos trasparentes , debe limpiarla muy bien con agua destilada para evitar
contaminación en las muestras .Programe el espectrómetro en longitudes de onda de 340 a 360 nm
.Usando la pipeta llene el porta muestras con la solución de menor concentración hasta donde
termina la parte opaca del porta muestras ,ubíquese frente a él espectrógrafo e introduzca el porta
muestras con una de las caras opacas mirando hacia usted en el orificio , realice la medida de
Absorbancia y regístrela en la tabla 1,limpie muy bien el porta muestras con agua destilada, repita
el proceso con la siguiente concentración , repita con la de mayor concentración y por ultimo con
la muestra problema .
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Figura 5: Espectrógrafo usado.

Figura 6 : Pipetas.

Por ultimo con los datos obtenidos de absorbancia y concentración realice una curva de calibración
y un ajuste lineal , con la ecuación encontrada y el dato de absorbancia de la muestra problema
calcule la concentración e esta .Repita para diferentes longitudes de onda en el rango dado

C(pp) A%
1
2
3
4

Tabla 1
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REFERENCIAS

[1] Paul A.Tipler .Ralph LLewellyn

.Modern Physics . 5th ed. 2007

[2] Espectrofometría: Espectros de absorción y cuantificación colorimétrica de biomoléculas Nieves Abril

Díaz1 , J. Antonio Bárcena Ruiz1 , Emilio Fernández Reyes1 , Aurora Galván Cejudo1 , Jesús Jorrín Novo1
, José Peinado Peinado1 , Fermín Toribio Meléndez-Valdés1 , Isaac Túnez Fiñana2 Departamento de
Bioquímica y Biología Molecula

[3] Análisis químico e instrumental moderno , Jorge Reyes, 1ed,1993

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