LABORATORIO

ANÁLISIS
INSTRUMENTAL

LABORATORIO N° 2

ESPECTROFOTOMETRÍA

“DETERMINACIÓN ESPECTOFOTOMÉTRICA DE
HIERRO EN UN MEDICAMENTO”

REALIZADO POR:

LLUMIGUANO DIANA 983654

CONLAGO KARLA 983632
CURAY ALICIA 983654
LANDY JEYSON 983735

NIVEL: SEXTO SEMESTRE “1”

FECHA DE REALIZACION: 22/10/2019

FECHA DE ENTREGA: 29/11/2019

RIOBAMBA-ECUADOR
1. OBJETIVOS

1.1. GENERAL
 Determinación por espectrofotométrica de la concentración del hierro en un
medicamento y verificar mediante la curva de calibración.

1.2. ESPECÍFÍCOS

 Establecer las variables inmersas en la curva de calibración para la determinación

espectrofotométrica de Fe2+
 Determinar el contenido de Fe2+ presente en el contenido de vitamina de hierro
contenido en las cuatro muestras.
 Obtener los valores de longitud de onda mediante un espectrofotómetro.

2. MARCO TEORICO-REFERENCIAL

2.1. MARCO TEORICO

2.1.1. Espectrofotometría

La espectrofotometría es donde utiliza el espectrofotómetro, que es un instrumento

que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que
contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad
conocida de la misma sustancia y también es una técnica analítica que permite
determinar la concentración de un compuesto en solución (Gonzales, 2015).
Es uno de los métodos de análisis más usados, y se basa en la relación que existe
entre la absorción de luz por parte de un compuesto y su concentración. Cuando se
hace incidir luz monocromática (de una sola longitud de onda) sobre un medio
homogéneo, una parte de la luz incidente es absorbida por el medio y otra
transmitida, como consecuencia de la intensidad del rayo de luz sea atenuada desde
Po a P, siendo Po la intensidad de la luz incidente y P la intensidad del rayo de luz
transmitido. Dependiendo del compuesto y el tipo de absorción a medir, la muestra
puede estar en fase líquida, sólida o gaseosa. En las regiones visibles y ultravioleta
del espectro electromagnético, la muestra es generalmente disuelta para formar una
 solución. Cada sustancia tiene su propio espectro de absorción, el cual es una curva
que muestra la cantidad de energía radiante absorbida, Absorbancia, por la sustancia
en cada longitud de onda del espectro electromagnético, es decir, a una determinada
longitud de onda de la energía radiante, cada sustancia absorbe una cantidad de
radiación que es distinta a la que absorbe otro compuesto. (Fundamentos de
espectrofotometría, 2015).

ILUSTRACIÓN 1. Curva de absorbancia vs Longitud de Onda.

2.1.2. Ley de Lambert

Esta ley establece que cuando pasa luz monocromática por un medio homogéneo, la
disminución de la intensidad del haz de luz incidente es proporcional al espesor del
medio, lo que equivale a decir que la intensidad de la luz transmitida disminuye
exponencialmente al aumentar aritméticamente el espesor del medio absorbente.
(Emilio Fernández Reyes, 2015).

ILUSTRACIÓN 2. Grafica descriptiva de la ley de Lambert

 Ley de Lambert:

Ecuación 2.1.2.-1.
  Po: Intensidad de la luz incidente
 P: Intensidad de la luz transmitida
 b: Espesor del medio absorbente
 k: Constante, cuyo valor depende de la naturaleza del soluto, de la longitud de
onda de la luz incidente, del espesor del medio absorbente y de la naturaleza del
medio.

2.1.3. Ley de Beer

La intensidad de un haz de luz monocromática disminuye exponencialmente al

aumentar aritméticamente la concentración de la sustancia absorbente, cuando este
haz pasa a través de un medio homogéneo. (Emilio Fernández Reyes, 2015).

ILUSTRACIÓN 3. Grafica descriptiva de la ley de Beer.

 Ley de Beer

Ecuación 2.1.3.-1.

 Po: Intensidad de la luz incidente

 P: Intensidad de la luz transmitida
 c: Concentración de la solución
 k: Constante, cuyo valor depende de la naturaleza del soluto, de la longitud de
onda de la luz incidente, de la concentración de la solución, y frecuentemente,
de la naturaleza del medio.
 Ambas leyes se combinan en una sola, generando la Ley de Lambert-Beer
 ó A = abc

Dónde:

 a: Absortividad
 b: Longitud o espesor del medio (longitud de la cubeta)
 c: Concentración de la solución P/Po= T : Transmitancia (Ruiz, 2009)

2.1.4. TRANSMITANCIA (T)

Es la razón entre la luz monocromática transmitida (P) por una muestra y la energía o
luz incidente (Po) sobre ella. Tanto la energía radiante incidente como la transmitida
deben ser medidas a la misma longitud de onda. T = P / P0 = 10-abc ó %T = 100 P /
P0 Se acostumbra a considerar la transmitida como la razón de la luz transmitida por
la muestra y la luz transmitida por un estándar arbitrario. Este estándar puede ser el
líquido (solvente) en que esta disuelta la muestra, aire, blanco analítico (solución que
contiene todos los componentes de la solución problema menos la sustancia
problema) u otra sustancia elegida arbitrariamente. Debido a que la transmitancia de
este estándar no es necesariamente 100%, es necesario especificar el estándar con el
cual la muestra es comparada. (Emilio Fernández Reyes, 2015).

2.1.5. ABSORBANCIA(A)

Se define como la cantidad de energía radiante absorbida por una sustancia pura o en
solución. Matemáticamente, corresponde al logaritmo negativo de la transmitancia. T,
transmitancia expresada como fracción decimal %T, transmitancia expresada como
porcentaje.

Ecuación 2.1.5.-1.
A = - log T = 2 – log %T
  Pero. T = P / P0 = 10-abc
 Luego A = - log (P / P0) = - log 10-abc A = a b c

Esta ecuación indica que la absorbancia es una función lineal de la concentración,

donde a es una constante de proporcionalidad llamada absortividad. La magnitud
depende de las unidades de b y c. Si la concentración c está expresada en moles por
litro y la longitud de la cubeta b en centímetros, la constante a recibe el nombre de
absortividad molar (ξ). Luego A = ξ b c (Ruiz, 2009).

2.1.6. MEDICIONES DE TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA

Las mediciones de absorbancia o transmitancia se hacen por comparación entre la

muestra problema y un estándar arbitrario o referencia. Como la referencia debe
poseer un porcentaje de transmitancia de 100%, esta es llamada referencia de 100%.,
o una absorbancia de cero. 8 C Selección de longitud de onda de trabajo. La longitud
de onda de trabajo corresponde, generalmente, a la longitud de onda en la cual la
absorbancia del analito (sustancia a analizar) es máxima, y recibe la denominación de
Lambda máximo (λmax). Para seleccionar el λmax., se hace un espectro de absorción
o curva espectral, y que consiste en una gráfica de la absorbancia de una solución de
la sustancia absorbente de concentración adecuada, medida a distintas longitudes de
onda y en ella se determina el λmax. (Emilio Fernández Reyes, 2015).

ILUSTRACIÓN 4. Curva de transmitancia vs Longitud de Onda.

Las mediciones de absorbancia se hacen en la zona de longitudes de onda donde se

espera que absorba la sustancia problema. Si se trata de sustancias coloreadas, las
mediciones se realizan en la zona visible del espectro electromagnético (380 a 800nm).
 En el caso de sustancias no coloreadas, las mediciones se realizan en la región
ultravioleta del espectro electromagnético (200 a 380nm).

2.1.7. CURVA DE CALIBRACIÓN

Uno de los métodos más utilizados para determinar la concentración de una muestra
problema, es el método de la curva de calibración. Esta curva de calibración es una
gráfica que relaciona la concentración de al menos cinco soluciones de estándar de
concentraciones conocidas, con la absorbancia de cada uno de ellos a la longitud de
onda máxima (λ max).

ILUSTRACIÓN 5. Curva de absorbancia vs Longitud de Onda.

Una vez obtenida la gráfica se determina la función matemática que presenta dicha recta
a través del tratamiento estadístico de regresión de los mínimos cuadrados, la cual
relaciona la absorbancia y la concentración de un analito.

Ecuación 2.1.7.-1.
A=mc+n

 A: Absorbancia
 n:Intercepto de la recta
 m: Pendiente de la recta y que corresponde al producto entre absortividad a de la
muestra y el espesor b de la cubeta. (Emilio Fernández Reyes, 2015).
 2.2. MARCO REFERENCIAL

La práctica “DETERMINACIÓN ESPECTOFOTOMÉTRICA DE HIERRO EN UN

MEDICAMENTO”, se llevó acabo el día 22 de Noviembre del 2019, en el
laboratorio de Análisis Instrumental de la Facultad de Ciencias de la Escuela de
Ingeniería Química, localizado en la ESPOCH, en la ciudad de Riobamba, ubicada en
la Panamericana Sur km 1 ½, cuyas coordenadas son 78°40’20’’ y una altura de 2815
msnm.

3. PARTE EXPERIMENTAL

3.1. Sustancias y Reactivos

 Agua destilada
 Hidroquinona
 Citrato sódico
 O-fenantrolina
 Patrón de hierro

3.2. Materiales y Equipos

 matraces volumétricos 50 o 100 ml
 1 gotero
 1 pizeta
 1 pera succión
 1 pipeta 10 ml
 Vasos de precipitación de 25ml o 50ml
 Toallas absorbentes
 1 franela
 1 cepillo

3.3.Métodos y Técnicas

Muestra: Comprimido vitamínico con hierro, o hierro en solución (gotas).

Fundamento: El Fe3+ se reduce a Fe2+ con hidroquinona y luego con o-fenantrolina
forma un complejo coloreado que absorbe a 508nm.

Reactivos:

Hidroquinona: Disolución recién preparada de 10gr/litro. Guardar en frasco ámbar.

Citrato sódico: Disolver 25 gramos en un litro.
O-fenantrolina: Disolver 2,5gramos en 100ml en etanol y añadir 900ml de agua. Guardar
en frasco ámbar.
Patrón de hierro: Corresponde a una concentración 0,04g. Disolver 0,02718g de sulfato
ferroso FeSO4 en 10ml de agua destilada que contenga 0,1ml de ácido sulfúrico 98% y
aforar a 250ml.

Preparación de la muestra:

Si es un comprimido de vitamina con hierro, disolver el mismo en 25ml de HCl 6M en

vaso de 100ml, hervir durante 15 minutos. Filtrar directamente en matraz de 100ml, lavar
el vaso y el filtro varias veces con pequeñas porciones de agua. Llevar a 100ml y
homogeneizar. Diluir 5ml de esta disolución a 100ml. Si la etiqueta del producto indica
que la pastilla contiene menos de 15mg de hierro, usar 10ml en lugar de 5ml.
Si el medicamento es en solución, tomar una alícuota que contenga 25mg y 15mg de
hierro (fijarse en la etiqueta) y llevar a 100ml en matraz, tomar 5ml de disolución y llevar
a 100ml nuevamente.
 Preparación de los testigos:
Tomar 10ml del patrón de Fe2+ y medir el pH. Añadir solución de citrato, gota a gota
hasta que el pH sea aproximadamente 4,5 (contar las gotas). Para cada testigo se coloca
una cantidad proporcional de citrato según esta prueba.
Blanco A B C D Muestra
Sol patrón - 0,5ml 1ml 2,5ml 5ml 5ml
Citrato sódico 0.5 ml cantidad en gotas p llevar Ph a 3,5 según prueba
Hidroquinona 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml
O-fenantrolina 1,5ml 1,5ml 1,5ml 1,5ml 1,5ml 1,5ml
Agua dest. Llevar a 50ml en matraz aforado
Cc final de Fe - 0,04 0,08 0,2 0,4 ?

Dejar en reposo 10 minutos. Leer la absorbancia a 508nm frente al blanco.

Graficar Abs= f (cc) con los testigos. Usando la curva calcular los mg de hierro en el
medicamento.

4. RESULTADOS

Tabla 4.1-1
Concentraciones y toma de datos
CONCENTRACION
MUESTRAS FINAL ABSORBANCIA (Xi-χˉ) (Xi-χˉ)^2 xmed ymed
A 0,04 0,098 0.14 0.0196 0,18 0,3655
B 0,08 0,165 0.1 0,01
C 0,20 0,431 0.02 0.0004
D 0,40 0,768 -0.22 -0,0484
Muestra
Yo(A-D) 0.254 0,516 Problema
Promedio 0,18 0,3655 SUMA -0,0184
FUENTE: Grupo de Trabajo, Análisis Instrumental, ESPOCH 2019
 Tabla 4.1-2
Resultados obtenidos de la muestra problema

FUENTE: Grupo de Trabajo, Análisis Instrumental, ESPOCH 2019

 Gráfico 4.1-1

Curva de Calibración dé concentraciones vs absorbancia

CONCENTRACION FINAL-CURVA DE REGRESION AJUSTADA

0,9
y = 1,8796x + 0,0272
0,8 R² = 0,9961 0,768
0,7
0,6
ABSORBANCIA

0,5
0,431
0,4
0,3
0,2
0,165
0,1 0,098
0
0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45
CONCENTRACION

FUENTE: Grupo de Trabajo, Análisis Instrumental, ESPOCH 2019

Gráfico 4.1-2

Curva de Calibración dé Concentraciones vs Absorbancia (considerando la muestra problema)

CONCENTRACION FINAL-CURVA DE REGRESION AJUSTADA

0,9
y = 1,8878x + 0,0279
0,8
R² = 0,996 0,768
0,7
ABSORBANCIA

0,6
0,5 0,516
0,4 0,431
0,3
0,2
0,165
0,1 0,098
0
0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45
CONCENTRACION FINAL

FUENTE: Grupo de Trabajo, Análisis Instrumental, ESPOCH 2019

5. DISCUSIÓN

Se midieron en el espectrofotómetro la absorbancia después de la preparación de soluciones de

distintas concentraciones obteniendo:
Muestra A (0.04 g/ml) y una absorbancia de 0.098, muestra B (0.08 g/ml) y una absorbancia de
0.165, muestra C (0.2 g/ml) y una absorbancia de 0.431, muestra D (0.4 g/ml) y una absorbancia
de 0.768 y por ultima la muestra problema la cual mediante correlación lineal se determinó su
concentración de 0.254, pero se obtuvo el valor de absorbancia igual a 0.516.
En la curva de calibración de concentraciones vs absorbancia, se tiene una ecuación de la recta
igual a: y = 1,8796 x + 0,0272, con un coeficiente de determinación igual a 0,9961, además se
determinó que existe una correlación lineal debido a que el tcal > tcrit, (22.686 > 4.30), la
concentración de hierro en la muestra con un valor de Yo de 0.516 que fue determinado en el
espectrofotómetro siendo un valor de absorbancia y de Xo que se refiere a la concentración
encontrada igual al valor de 0.26007058 (g/ml) con un error de ±0.0111, el valor del intercepto
es igual a (a= 0.0271735 ± 0.08129 ), y (b= 11.8795918 ± 0.35648), que se encuentran
denotados en la ecuación de la recta.

Tabla 5.1
Resumen de datos obtenidos
Variable Concentración Error
Muestra Problema (Xo) 0.26007058 ±0.01115
A 0,0271735 ±0.08129
B 1,8795918 ±0.35648
FUENTE: Grupo de Trabajo, Análisis Instrumental, ESPOCH 2019

6. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

6.1. CONCLUSIONES

 Finalmente se pudo determinar la concentración de hierro en un medicamento gracias a

la ecuación obtenida igual a: y= 1,8796 x + 0,0272, con un coeficiente de determinación
igual a 0,9961 obteniendo un valor de Yo de 0.516 que fue determinado en el
espectrofotómetro.
  Se estableció las variables inmersas en la curva de calibración las cuales son esenciales
para su creación y se adjuntan a continuación:

MUESTRAS CONCENTRACION FINAL ABSORBANCIA

A 0,04 0,098
B 0,08 0,165
C 0,2 0,431
D 0,4 0,768

 Se determinó el contenido de Fe2+ en la vitamina de hierro contenido en las cuatro

muestras como se muestra a continuación:

Blanco A B C D Muestra
Cc final de Fe - 0,04 0,08 0,2 0,4

 Se obtuvieron los valores de longitud de onda mediante un espectrofotómetro un valor

de absorbancia de la muestra problema después de mezclar 5ml de solución patrón, 0.5
citrato sódico, Hidroquinona 1ml y O-fenantrolina 1.5 ml, en el cual el valor de Xo que
se refiere a la concentración encontrada es igual a 0. 0.26007058 (g/ml) con un error
de ±0.0111, el valor del intercepto es igual a (a= 0.0271735 ± 0.08129), y (b=
11.8795918 ± 0.35648), que se encuentran denotados en la ecuación de la recta.

6.2. RECOMENDACIONES

 Se debe realizar el mismo análisis por triplicado para así poder contrastar resultados.
 Las soluciones deben estar debidamente etiquetadas para así evitar errores
 Se recomienda usar agua destilada para evitar encontrarse con interferencias dentro de
la práctica.
 No utilizar los reactivos más allá de las cantidades recomendadas, dado que,
resultaremos dañando los materiales, además que, no se obtendrá los resultados
esperados; obteniendo así una práctica fallida.
 Ajustar el espectrofotómetro a cero con agua destilada. Si el aparato que se va a utilizar
tiene las dos escalas (absorbancia y transmitancia) se ajustan las lecturas a cero de
absorbancia y 100% de transmitancia.
7. BIBLIOGRAFÍA

 Antonio Bárcena Ruiz, 2009. Espectros de absorción y cuantificación colorimétrica de

biomoléculas.
 Emilio Fernández Reyes, 2015. Fundamentos de espectrofotometría.
 QuimiNet. (21 de mayo de 2018). Obtenido de:
http://www.quiminet.com/articulos/espectrofotometro-instrumento-basico-en-los-
laboratorios-58663.htm
 Gonzales. (2015). Recuperado el 25 de 11 de 2019, de
https://www.ecured.cu/Espectrofotometr%C3%ADa.

8. ANEXOS
 ANEXO I

a) b) c) d)

Notas CATEGORÍA DEL DIAGRAMA ESPOCH ESPECTROFOTOMETRÍA HIERRO II

a) Preparación de soluciones □ APROBADO FACULTAD DE CIENCIAS

□ CERTIFICADO
Lámina Escala Fecha
b) Muestras con distintas cantidades de ESCUELA DE INGENIERIA QUÍMICA
solución patrón.
□ INFORMACIÓN
□ POR CALIFICAR
LABORATORIO DE ANÁLISIS
INSTRUMENTAL
c) Muestras y solución problema. 1 de 1 1:1 29/11/19
□ POR APROBAR
REALIZADO POR:
d) Espectrofotómetro UV - visible
GRUPO DE TRABAJO