UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

FACULTAD DE INGENIERIAS Y TECNOLOGICAS

DEPARTAMENTO INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

PROFESOR: EINER GUTIERREZ

EXPERIENCIA No. 6. ESPECTROFOTOMETRIA VISIBLE (ESPECTROS DE ABSORCIÓN)

1. OBJETIVOS
Examinar las curvas espectrales de absorción de algunas especies cromóforas.
Obtener la longitud de onda de máxima absorción de cada especie.
Comprobar la propiedad de la sumatoria de las absorbancias individuales de los componentes de
una solución.

2. FUNDAMENTOS DE LA TECNICA

Cuando las moléculas interactúan con la energía radiante en la región visible y ultravioleta,
algunos fotones con ciertas frecuencias de radiación peden eliminarse por la transferencia de
energía electromagnética a las mismas, ocurriendo una excitación de los electrones enlazantes.
Para que se produzca la absorción, la energía de los fotones excitadores debe coincidir
exactamente con la diferencia de energía entre el estado fundamental y uno de los estados
excitados de las especies absorbentes. Al representar gráficamente la absorbancia de una
especie en función de la longitud de onda o de la frecuencia de la radiación, se puede visualizar su
espectro de absorción, el cual se puede correlacionar con los tipos de enlace que existen en la
especie de estudio. Por este motivo el espectro de absorción es una propiedad altamente
específica de la estructura molecular del material absorbente. Desafortunadamente, ciertos
factores influyen en los espectros obtenidos: Solvente, pH, etc.

Cuando hay más de una especie absorbente en la solución, cada especie absorbe en forma
independiente y, la absorbancia total es la suma de las absorbancias individuales:

Atotal = A1 + A2 = 1bC1 + 2bC2

Donde: A= Absorbancia
 = Absortividad Molar
b = Trayectoria de la radiación
C = molaridad de las especies.

3. MATERIALES Y REACTIVOS
Colorímetro o espectrofotómetro de absorción molecular

Celdas porta muestras

Balones aforados 100 o 250 ml

Pipeta 10ml

KMnO4

K2Cr2O7

CuSO4

4. PROCEDIMIENTO

1. Ajuste de las condiciones de trabajo: Conecte el instrumento a 115 voltios y enciéndalo.

Deje calentar el instrumento durante 10 minutos aproximadamente. Con el portacelda vacío,
gire el botón de ajuste al 0 % T hasta que la escala señale ese valor. Coloque en el
portacelda una celda con el solvente utilizado como blanco de reactivos y gire el botón
hasta que la escala marque 100% T.
2. Preparación de soluciones: preparar dos soluciones al 0.1M de KMnO4 , K2Cr2O7 o

CuSO4 realizar diluciones sucesivas en balones aforados hasta llevarlas a 0.005M.

3. Curva espectral: transferir a sendas celdas volúmenes de las dos soluciones preparadas y
en una tercera celda añadir 2.5 ml de cada solución y agitar. Posteriormente, leer el % T o
A de cada muestra, seleccionando desde la mínima longitud de onda del espectrofotómetro
hasta la máxima, incrementándola a intervalos de 10nm.
Se debe realizar el ajuste del 0% y 100% de transmitancia del blanco de reactivos cada vez
que se cambie la longitud de onda.
4. Ancho de la celda: proponer una manera de medir el ancho de las celdas utilizadas.
(diámetro interno del tubo de ensayo)

5. CALCULOS Y RESULTADOS

1. Sumar las absorbancias individuales de las dos especies en todas las longitudes de onda
 leídas.
2. En un gráfico trazar las tres curvas espectrales leídas y la obtenida por la suma en a) (se
grafican los valores de absorbancia con respecto a la longitud de onda). Corregir el efecto
de la dilución en las lecturas de la tercera celda antes de graficar. Describir el
comportamiento de las curvas espectrales y observar si el comportamiento es acorde con
elfundamento teórico.
3. ¿Cuál es el valor de la longitud de onda más apropiada para el análisis cuantitativo en cada
una de las soluciones leídas? ¿por qué?
4. Con el ancho de la celda obtenido en el procedimiento d), calcular el valor de la absortividad
molar de las especies a la longitud de onda de máxima absorción.

6. BIBLIOGRAFÍA

Ayres, Gilbert H. Análisis Químico Cuantitativo

Skoog, Douglas. Análisis Instrumental

Olsen. Métodos Öpticos.