20/5/22

Universidad Nacional Agraria La Molina

Departamento Académico de Quìmica

Esta presentación es para uso exclusivo de los

estudiantes matriculados en el Grupo Z del curso de Bioquìmica 2022-I
Bioquímica, semestre 2022-I, de la Universidad
Nacional Agraria La Molina Enzimas
Parte 2

Prof. Ana A. Kitazono Sugahara

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REFERENCIAL
Centro activo de una enzima Incremento en la velocidad de reacción producido
por algunas enzimas

Anhidrasa carbónica 107

Triosa fosfato isomerasa 109
Carboxipeptidasa A 1011
Succinil-CoA transferasa 1013
Ureasa 1014
Orotidina monofosfato decarboxilasa 1017

Bioquímica – Feduchi et al. Biochemistry - Stryer

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Cinética Enzimática Cinética Enzimática

Velocidad de reacción
Factores que afectan la velocidad de reacción
• Cambio de [S] o de [P] en función del tiempo enzimática
• Unidades de velocidad: [ ]/ t • [S]
• M/min, milimoles/L.seg, etc • [E]
• pH
• Temperatura
• Concentración de cofactor (si se requiere)
• Presencia de inhibidores

79 80

Las enzimas tienen un rango de temperaturas en el que Las enzimas tienen un rango de pHs en el que funcionan
funcionan con màxima eficiencia (temperatura óptima) con màxima eficiencia (pH óptimo)

81 82

2
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¿Cómo se puede cuantificar la actividad enzimática? Un compuesto cromogénico puede servir de sustrato “artificial”
REFERENCIAL
para cuantificar la actividad enzimática
1. Por ejemplo: Encontrar un ensayo que permita la
producción de un producto coloreado cuando el sustrato es
modificado.
2. Correr los ensayos con las diferentes muestras de
enzimas utilizando, para cada uno, cantidades idénticas de
sustrato y condiciones idénticas (tiempo, temperatura,
buffer, etc.)
3. Determinar la cantidad de producto mediante un
espectrofotómetro

83 84

Efecto de la concentración de enzima?

Si se mantiene constante la concentración de sustrato, la
velocidad de la reacción es directamente proporcional a la
concentración de la enzima.

aumentando [E] [E]

Figure 3-26a Essential Cell Biology (© Garland Science 2010)

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3
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REFERENCIAL Cinética Michaeliana (1913)

Incremento en la velocidad de reacción producido
por algunas enzimas

Anhidrasa carbónica 107

Triosa fosfato isomerasa 109
Carboxipeptidasa A 1011
Succinil-CoA transferasa 1013
Ureasa 1014
Orotidina monofosfato decarboxilasa 1017

Biochemistry - Stryer

87 88

Ciclo enzimático Teoría de acción y cinética enzimática

de Michaelis y Menten

1. Definición de la trayectoria de reacción

enzimática
2. Identificación del comportamiento
hiperbólico rectangular y definición de la
constante de Michaelis (Km)
3. Definición de la ecuación de Michaelis y
Menten para el cálculo de velocidades de
reacción enzimáticas

89 90

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Definición de la trayectoria de reacción enzimática

Enzima + Sustrato Enzima~Sustrato

(ES)

Enzima + Producto
aumentando
Figure 3-26a Essential Cell Biology (© Garland Science 2010)

91 92

Representación del posible comportamiento de una

enzima frente a diferentes concentraciones de sustrato
Vo (Velocidad inicial)

Baja [S] ± Alta [S] Muy alta [S]

Figure 3-26b Essential Cell Biology (© Garland Science 2010)

93 94

5
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Gráfica de Michaelis-Menten: Variación de la

actividad enzimática con la concentración de sustrato

Vo (Velocidad inicial)
Nivel de saturación de la enzima

Velocidad de
reacción
Concentración de sustrato
Figure 3-26b Essential Cell Biology (© Garland Science 2010)

95 96

Efecto de la Concentración de Sustrato : Gráfica de Michaelis-Menten: Variación de la

Cinética Michaeliana actividad enzimática con la concentración de sustrato
En reacciones enzimáticas donde se aumenta [S] y
se mantienen los otros factores óptimos y

Velocidad de
constantes, incluyendo [E] :

reacción
•Comportamiento hiperbólico rectangular

•Hipérbole que tiene como límites los parámetros

cinéticos de Vmax y Km

Concentración de sustrato

97 98

6
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La constante de Michaelis (Km)

La ecuación de Michaelis Menten
-Concentración de sustrato necesaria para
obtener la mitad de la velocidad máxima:
(µM, mM)

-Relacionado con la afinidad de una enzima

por un sustrato en particular:
“A < Km > Afinidad”

99 100

A altas concentraciones de sustrato: Vo es independiente de [S] A bajas concentraciones de sustrato: Vo es dependiente de [S]

“Reacción de ORDEN CERO” “Reacción de PRIMER ORDEN”

101 102

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A bajas concentraciones de sustrato: Vo es dependiente de [S] A bajas concentraciones de sustrato: [S] ≤ 0.01Km
Vo dependiente de [S] orden cero
“Reacción de PRIMER ORDEN” A altas concentraciones de sustrato: [S] ≥100Km
Vo independiente de [S] primer orden
Vo es directamente
proporcional a la
concentración de
sustrato, ya que Vm y
Km son constantes

103 104

Hexocinasa y glucocinasa, dos enzimas que fosforilan a la Gráfico de Lineweaver y Burk

glucosa están presentes en el hígado

µmol)
Bioquìmica - Harper
Figure 3-26c Essential Cell Biology (© Garland Science 2010)

105 106

8
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X3

x2 : Conc. Inh = 1 mM

x2: conc. Inhb. = 2 mM

I I I I
I I

aumentando aumentando
Figure 3-26a Essential Cell Biology (© Garland Science 2010) Figure 3-26a Essential Cell Biology (© Garland Science 2010)

107 108

Gráfico de Lineweaver y Burk

µmol)
Figure 3-26b Essential Cell Biology (© Garland Science 2010) Figure 3-26c Essential Cell Biology (© Garland Science 2010)

109 110

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REFERENCIAL
Determinación de actividades enzimáticas (velocidad
inicial de reacción) en fracciones de segundo usando la
técnica de “stopped flow” (flujo detenido)
Fuente de luz
Agitador
Enzima

Sustrato

No es costoso

Figure 3-27 Essential Cell Biology (© Garland Science 2010)

111

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