Descomposición del peróxido de hidrógeno con catalasa

13/10/2016
Luis Felipe Amézquita Vega - Angela Patricia Palacino Cavides
25191286-25191239

Abstract
Nota 4,3
The Michaelis-Menten model allows the description of the dependence of the
reaction rate with the substrate concentration in the decomposition process of
hydrogen peroxide using catalase extract from different varieties of potatoes;
“Criolla” and “Pastusa”. through Lineweaver-Burk linearization it has been found that
the maximum velocity for this process is 2,38x10​-5 ​(mol/s) and 3,18x10​-6 ​(mol/s) for
criolla and pastusa variety respectively.
1. Introducción
El peróxido de hidrógeno es una molécula inestable que se descompone
lentamente de manera espontánea en agua y en oxígeno según la ecuación 1. Para
acelerar este proceso los organismos se valen de la enzima catalasa, que a través
de procesos de oxidorreducción permite que la reacción ocurra mediante barreras
de potencial menores a comparación del proceso sin esta enzima (sin catalizador).
El papel de la catalasa es fundamental; debido a que la disponibilidad de peróxido
de hidrógeno conlleva a la producción de especies radicalarias de oxígeno, que son
altamente tóxicas para el organismo.

1) 2H 2O 2 → O 2 + 2H 2O

El mecanismo de acción de la catalasa puede ser descrito a grandes rasgos

mediante el modelo de Michaelis-Menten:
K1
2) [E] + [S]⇋K−1[ES]→K2[E] + [P]

Donde E: enzima, S: sustrato, ES: complejo enzima-sustrato, P: producto, K1:

constante de formación del complejo ES, K-1: constante de disociación del complejo
ES, K2: constante de liberación del producto. Definiendo la velocidad de reacción
como la variación en la cantidad de producto respecto al tiempo para un momento
dado (d[P]/dt) y suponiendo que la cantidad de complejo enzima-sustrato es
constante se llega a:

v max [S]
3) V o = d[P]
dt = K M +[S]
Encontrándose que la velocidad de reacción solamente depende de la
concentración de sustrato. K​M representa la concentración de sustrato necesaria
para obtener la mitad de la velocidad máxima, y a su vez K​M​ =(K-1 + K2)/K1.
 Figura 1. Representación del desarrollo Michaelis-Menten;
velocidad de reacción en función de la concentración de sustrato.

De manera lineal se puede expresar la ecuación 3 como,

1 Km
4)​ V0 = V max[S] + V 1max
Esta linealización se conoce como diagrama Lineweaver-Burk y es una manera
gráfica de obtener la velocidad máxima y la constante de Michaelis-Menten.

Figura 2. Diagrama Lineweaver-Burk.

2. Materiales y métodos.

Figura 2. Montaje experimental

● Papas criollas
● Papas pastusas
 ● Agua
● Homogenizador
● Peróxido de hidrógeno 50%
● Sensor de presión

Partiendo de un peso igual de papa pastusa y papa criolla, se realizan dos extractos
acuosos de la siguiente forma: se homogeniza la papa en 40mL de agua y se filtra
esta mezcla, obteniendo el extracto de catalasa.

A partir de la solución de peróxido de hidrógeno 50% se realizaron soluciones de 10,

7,3, 5, 4 y 1%. Se tomaron alícuotas de 20 mL de cada disolución, a esta bajo
agitación vigorosa se le agregó 1 mL del extracto de catalasa y se registró el
aumento de la presión, por lo menos hasta que esté fuera de 2 kPa, Para todas las
disoluciones se realizó el experimento con la catalasa extraída de la papa criolla y
de la papa pastusa.

3. Toxicidad de reactivos
Peróxido de hidrógeno: DL50(ratas, oral) 376 mg/kg. Efectos: peritonitis, cambio en
la cuenta de leucocitos.

4. Resultados y análisis
Las gráficas 1 y 2 muestran el comportamiento de la presión con respecto al tiempo,
se observa un aumento significativo de la presión por la producción de oxígeno
causada por la acción catalizadora de la catalasa. Adicionalmente se puede
observar como la papa criolla muestra un aumento más rápido y estable según la
concentración del peróxido
Gráfica 1. Presión en función del tiempo para las distintas soluciones de peróxido de hidrógeno para la
catalasa de la papa criolla.

Gráfica 2. Presión en función del tiempo para las distintas disoluciones de peróxido con la catalasa de la
papa pastusa.
La gráficas 3 permite observar como para las concentraciones menores 5% para la
catalasa de la papa pastusa existe la tendencia esperada con respecto al aumento
de la velocidad inicial por el incremento de la concentración siguiendo la cinética de
Michaelis-Menten, sin embargo a concentraciones mayores al ser el peroxido un
oxidante fuerte puede degradar la enzima disminuyendo entonces su actividad.
La gráfica 4 muestra un comportamiento aún más similar al de la cinética de
Michaelis-Menten y esto se puede deber a que así como las velocidades son más
altas, puede existir mayor cantidad de catalasa en esta variedad de papa.

Grafica 3. Velocidad inicial de producción de oxígeno (mol/s) en función de la concentración de peróxido

de hidrógeno, usando extracto de catalasa de papa pastusa.
Grafica 4. Velocidad inicial de producción de oxígeno (mol/s) en función de la concentración de peróxido
de hidrógeno, usando extracto de catalasa de papa criolla.

A través de la ecuación 4 se obtienen las gráficas 5 y 6, donde la linealización

permite conocer la velocidad máxima y Km; que son 2,38x10​-5 (mol/s), 5,27
respectivamente para la catalasa de papa criolla. Para la catalasa de papa pastusa
se encuentra una velocidad máxima de 3,18x10​-6 (mol/s) y Km de 1,58. Con estos
datos se corrobora que la actividad de la catalasa de la papa criolla es mayor
respecto a la papa pastusa.

Grafica 5. inverso de la velocidad de reacción en función del inverso de la concentración, usando

extracto de catalasa de papa criolla. Linea de tendencia: Y=221891x + 42144.
 Grafica 6. Inverso de la velocidad inicial en función del inverso de la concentración de peróxido de
hidrógeno, usando extracto de catalasa de papa pastusa. Linea de tendencia: Y=497148x + 315286.
5. Conclusiones
● La velocidad de descomposición de peróxido de hidrógeno por medio de la
catalasa es proporcional a la concentración del sustrato y se puede describir
este comportamiento usando modelo de Michaelis-Menten.
● La integridad de la catalasa es susceptible a agentes oxidantes fuertes; como
lo es el peróxido de hidrógeno, por lo tanto para conservar la actividad óptima
de la enzima las concentraciones de peróxido de hidrógeno deben ser
inferiores a 5%.
● La catalasa de la papa criolla presenta una velocidad máxima en el proceso
de descomposición de peróxido de hidrógeno de 2,38x10​-5 ​(mol/s), mientras
​
la catalasa de papa pastusa 3,18x10​-6 (mol/s).
6. Bibliografía
● Descomposición catalizada del peróxido de hidrógeno. guia de laboratorio de
fisicoquímica II. Universidad Nacional de Colombia.

¿Por qué la catalasa de

la papá criolla es mas
activa?