Unidad 2 Consolidado

Unidad 2
Enzimología
Edición: BIOQUÍMICA GENERAL

Tatiana Zuvić M., MSc DBIO1037
Paula Aracena S., PhD
Función catalítica de las proteínas
MOVIMIENTO
Miosina, actina
TRANSPORTE CATÁLISIS REACCIONES A LA
Albúmina, hemoglobina Enzimas
VELOCIDAD COMPATIBLE
CON LA VIDA
ADHESIÓN COMUNICACIÓN
CELULAR Hormonas, proteínas de
Integrinas, caderinas señalización
NECESIDAD DE
PROTEÍNAS DE CATALIZADORES
MEMBRANA INMUNIDAD
Receptores, bombas Anticuerpos, complemento
ASISTENCIA
Histonas, chaperonas
Resultados de aprendizaje
Interpreta los datos cinéticos de una reacción

enzimática y el efecto de la modulación por
inhibidores.
Describe los mecanismos generales de regulación

enzimática y su efecto en los parámetros de cinética
enzimática.
Recursos Conceptuales
PFK-1 ATP sintasa
Succinato
deshidrogenasa
CATÁLISIS CINÉTICA
ENZIMAS ENZIMÁTICA ENZIMÁTICA
¿Qué son? ¿Cómo aumentan la ¿Cómo se mide

¿Para qué sirven? velocidad de las la función de
¿Cómo se clasifican? reacciones? las enzimas?
Recursos Conceptuales
LDH
GGT
GOT
REGULACIÓN ENZIMAS
ENZIMATICA EN CLÍNICA
¿Cómo y por qué ¿Cuál es su utilidad
son reguladas? en clínica?
Enzimas
Son catalizadores biológicos que actúan aumentando la velocidad de las
reacciones metabólicas.
PFK-1 ATP sintasa Ribozimas
Succinato
deshidrogenasa Ribosoma
NATURALEZA QUÍMICA REQUERIMIENTO ESTRUCTURAL
Casi todas las enzimas tienen Para ejercer su acción, la enzima

naturaleza PROTEICA. debe estar en su
La excepción son las ribozimas. CONFORMACIÓN NATIVA.
Enzimas
La acción enzimática se caracteriza por la formación de un Complejo Enzima-
Sustrato, que se designa como [ES].
Unión de
sustrato Complejo
B Enzima-Sustrato
(ES)
A
ENZIMA
A+B C+D Catálisis
CICLO
SUSTRATOS PRODUCTOS CATALÍTICO
Enzima
Moléculas sobre las que Moléculas en las que se libre
actúa la enzima transforman los sustratos
Regeneración Complejo
de la enzima Enzima-Producto
C
(EP)
D
Sitio activo de las enzimas
Es un lugar tridimensional de la proteína enzimática al cual se une el sustrato
y donde se lleva a cabo la reacción (transformación del sustrato en producto).
SITIO ACTIVO
Residuos de
UNIÓN CON EL Residuos
SUSTRATO CATALÍTICOS Microambiente
favorable a la
reacción
Esta formado por residuos lejanos en la secuencia lineal, pero que quedan
cercanos después del plegamiento tridimensional.
RESIDUOS DEL SITIO ACTIVO
Secuencia lineal
Estructura tridimensional
El sitio activo también se asocia con cofactores o coenzimas, si la enzima los
emplea.
COFACTOR
SITIO ACTIVO
COENZIMA
Microambiente
favorable a la
APOENZIMA reacción
HOLOENZIMA
Cofactores y coenzimas
Son moléculas no proteicas, indispensables para la catálisis, que se asocian
reversiblemente a las enzimas, como si fuesen un sustrato más.
COFACTOR INORGÁNICO COENZIMA
Especie inorgánica, Cofactor orgánico o

usualmente un catión. metaloorgánico.
Cofactores inorgánicos y fuentes dietarias
Usualmente son cationes, los cuales pueden ser suministrados a través de la
dieta en diversos alimentos.
Mg2+ Mn2+
Zn2+
Hexoquinasa Arginasa
Piruvato quinasa Fe2+, Fe3+ Superóxido dismutasa
Anhidrasa carbónica
Carboxipeptidasa
ADN polimerasa Cu+, Cu2+
Catalasa
Nitrogenasa
Alcohol deshidrogenasa
Citocromo oxidasa
Coenzimas y fuentes dietarias
Son moléculas orgánicas, la mayoría derivadas de vitaminas, las cuales
pueden ser suministradas a través de la dieta en diversos alimentos.
Ascorbato
Vitamina C
Coenzimo A
Ácido pantoténico
(Vitamina B5)
Coenzima Q10
Tetrahidrofolato
Ácido fólico (Vitamina B9)
NAD+ Niacina
NADP+ (Vitamina B3)
Grupos prostéticos
Son moléculas no proteicas, indispensables para la catálisis, que se
encuentran fuertemente asociados o unidos covalentemente a las enzimas.
Intercambio
de electrones
Grupos Fe-S Interacción con oxígeno
molecular
Grupo hem
SUCCINATO
FAD
DESHIDROGENASA
Intercambio de
(Complejo II mitocondrial)
átomos de hidrógeno
Grupos prostéticos y fuentes dietarias
Son moléculas no proteicas, indispensables para la catálisis, que se
encuentran fuertemente asociados o unidos covalentemente a las enzimas.
Biotina
Hem Vitamina H
FAD
Piridoxal
FMN Riboflavina
(Vitamina B2) fosfato
Piridoxina (Vitamina B6)
Grupos Fe-S
Ácido lipoico
Propiedades de las Son
enzimas catalizadores
No cambian
Pueden ser
la constante
reguladas
de equilibrio
PROPIEDADES
Trabajan en
condiciones de
pH y Son
temperatura específicas
determinadas
No se
consumen
durante la
reacción
Propiedades de las enzimas: Catálisis
Las enzimas aumentan la velocidad de una reacción miles o millones de veces,
sin alterar el equilibrio de la reacción.
Algunos aumentos de la velocidad de

reacción producidos por enzimas
Ciclofilina 105 VELOCIDAD DE LA EQUILIBRIO DE LA

REACCIÓN REACCIÓN
Anhidrasa carbónica 107
Triosa fosfato isomerasa 109
Carboxipeptidasa A 1011 Las enzimas no hacen posibles
Fosfoglucomutasa 1013
reacciones energéticamente imposibles,
sólo las aceleran.
Succinil-CoA transferasa 1014
Adaptado de Lehninger, Nelson & Cox (2009)
Toda reacción química debe superar un umbral energético para proceder. Este
umbral se denomina energía de activación.
La velocidad de una reacción

depende de la energía de activación.
MÁS MÁS
RÁPIDA
Ea LENTA
El único modo de alterar la energía de activación de una reacción consiste en
cambiar el mecanismo a través del cual ésta se produce.
MECANISMO DIFERENTE
DISTINTO ESTADO DE TRANSICIÓN
DIFERENTE ENERGÍA DE ACTIVACIÓN
DIFERENTE VELOCIDAD
Las enzimas participan en la reacción que catalizan, por lo que alteran su
mecanismo de tal forma que disminuyen la energía de activación.
Complejo
Enzima-Sustrato
Reacción no catalizada (ES)
S P
CICLO
CATALÍTICO
Enzima
Reacción catalizada libre
S+E ES EP P+E
Complejo
Enzima-Producto
(EP)
Las enzimas participan en la reacción que catalizan, por lo que alteran su
mecanismo de tal forma que disminuyen la energía de activación.
=1
Reacción no catalizada
=1
S P
Ea
=2
Energía
=1
SUSTRATOS Ea
ES =3
Reacción catalizada
=1 =2 =3 EP
PRODUCTOS
S+E ES EP P+E
Progreso de la reacción
La acción enzimática depende de dos etapas fundamentales: la unión a los
sustratos y la etapa catalítica.
=1
Reacción no catalizada Ea
=1
S P Ea
=2
Energía
=1
SUSTRATOS
ES =3
=1 =2 =3 EP
PRODUCTOS
S+E ES EP P+E Unión a
sustratos
Catálisis
Unión a Catálisis
sustratos
Propiedades de las enzimas: Especificidad
Cada enzima es específica para sustratos y la reacción catalizada, debido a la
forma del sitio activo y a los residuos presentes en éste.
Residuos de
UNIÓN CON EL Residuos
SUSTRATO CATALÍTICOS
Cada enzima es específica para Cada enzima es específica para la
sus sustratos reacción que cataliza
ESTO ES POSIBLE, EN PARTE, DEBIDO A LA

DIFERENCIA EN TAMAÑO ENTRE ENZIMA Y SUSTRATOS
La unión del sustrato a la enzima responde al modelo de “ajuste inducido”: la
enzima es complementaria al segundo estado de transición.
=1 =2 =3 =2
S+E ES EP P+E =1
Energía
SUSTRATOS
ES =3
Si la enzima fuese complementaria al EP

PRODUCTOS
sustrato (modelo “llave-cerradura”), ES
la reacción no seguiría en forma
espontánea.
Propiedades de las enzimas: Mecanismo catalítico
Las enzimas cumplen su función catalítica a través varios mecanismos, que son
posibles debido a los residuos de unión a sustrato y los catalíticos.
Se ganan
interacciones
=1 =2 =3 =2
S+E ES EP P+E =1
Energía
SUSTRATOS
ES =3
Al ser complementaria al segundo EP

PRODUCTOS
estado de transición (modelo de Se crean
interacciones
“ajuste inducido”), la reacción continúa
espontáneamente a productos.
El modelo de “ajuste inducido” supone un cambio conformacional de la
enzima para lograr la complementariedad al estado de transición.
SUSTRATO
Cambio conformacional
COMPLEJO
ENZIMA
ENZIMA SUSTRATO
Propiedades de las Orientan a los
sustratos de
enzimas: manera óptima

para la reacción
Mecanismos de
Reaccionan
catálisis con el sustrato
para generar
Generan un
entorno
estados de favorable para
transición la reacción
nuevos
MECANISMOS
Residuos de
UNIÓN CON Residuos
EL SUSTRATO CATALÍTICOS
Causan Generan un
distorsiones en entorno
el sustrato que desfavorable
son favorables para reacciones
para la reacción secundarias
Propiedades de las enzimas: Tº óptima
Las enzimas presentan una temperatura óptima de catálisis, determinada por
un equilibrio entre su efecto termodinámico y el de desnaturalización.
EFECTO TERMODINÁMICO
La velocidad de las reacciones DESNATURALIZACIÓN

químicas no catalizadas es siempre
proporcional a la temperatura. TEMPERATURA ÓPTIMA
Velocidad de reacción
Las reacciones catalizadas por enzimas
aumentan su velocidad a medida que
aumenta la temperatura, hasta una Tº óptima,
Reacción
específica para cada enzima. catalizada por
enzimas
A mayor temperatura, se produce la Reacción no
catalizada
desnaturalización de la enzima, por
lo que la velocidad disminuye.
Temperatura
Propiedades de las enzimas: pH óptimo
En forma análoga a la temperatura óptima, las enzimas tienen un pH óptimo
para la catálisis.
La velocidad de las reacciones pH ÓPTIMO

químicas no catalizadas pueden
Velocidad de reacción
responder o no al pH del medio.
Reacción
catalizada por
Una reacción catalizada por enzimas enzimas
siempre responderá al pH, ya que la
estructura proteica es alterada por la
acidez del medio. Reacción no
catalizada
El pH óptimo es específico de cada

enzima. pH
Propiedades de las enzimas: pH óptimo
Un cambio en el pH afecta la unión del sustrato y propia catálisis, debido al
cambio en la estructura de la proteína enzimática.
Succinato deshidrogenasa y su sustrato a distintos pH
pH 2 pH 7 pH 13
¿A cuál pH se produce la mejor interacción con el sustrato?

Clasificación de enzimas
Las enzimas se clasifican en seis clases, según la reacción que catalizan.
Clase de enzima Tipo de reacción que catalizan Ejemplos

Succinato deshidrogenasa
Oxidorreductasas Óxido-reducción.
Citocromo oxidasa
Transferencia de un grupo desde una Proteína Quinasa A
Transferasas
molécula a otra. Transaminasa GOT
Ruptura de un enlace por adición de una Tripsina
Hidrolasas
molécula de agua. Aldolasa
Liasas Ruptura de enlaces no hidrolítica (sin agua). Piruvato descarboxilasa
Transferencia de un grupo dentro de la Glucomutasa
Isomerasas
misma molécula. Triosa fosfato isomerasa
Formación de enlaces entre dos moléculas, Acil-CoA sintetasa
Ligasas
dependiente de ATP. HMG-CoA sintetasa
Cinética enzimática
Corresponde al estudio cuantitativo de la función enzimática, a través de las
propiedades cinéticas de las reacciones catalizadas por las enzimas.
AFINIDAD DE LA ENZIMA CANTIDAD DE UNIDADES EFICIENCIA

POR SU SUSTRATO ENZIMÁTICAS ACTIVAS DE LA CATÁLISIS
Evaluación de la avidez de Determinación de la concentración Cuantificación de cuán eficiente es

la enzima por cada sustrato de enzimas activas la catálisis enzimática
Cinética enzimática: Velocidad de reacción
La velocidad de una reacción se puede cuantificar, ya sea midiendo la
desaparición de reactante o la aparición de producto.
[R]
A medida que transcurre el tiempo, la
Concentración
concentración de reactante disminuirá, debido a

[P] que se transforma a producto.
En forma análoga, la concentración de producto

aumentará a medida que transcurre el tiempo.
Tiempo
La velocidad de una reacción se puede cuantificar, ya sea midiendo la
desaparición de reactante o la aparición de producto.
[R]
La velocidad de reacción se cuantifica midiendo
Concentración
Pendiente
negativa la pendiente de la porción lineal de estas curvas
[P]
Δ [R] Δ [P]
Pendiente V=- =
positiva Δt Δt
Tiempo
La velocidad de una reacción catalizada se llama actividad enzimática y es
proporcional a la concentración de complejo ES.
S+E ES EP P+E
EL VERDADERO REACTANTE DE UNA REACCIÓN

CATALIZADA ES EL COMPLEJO ENZIMA-SUSTRATO.
LA VELOCIDAD DE UNA REACCIÓN ENZIMÁTICA SIEMPRE ES PROPORCIONAL

A LA CONCENTRACIÓN DEL COMPLEJO ENZIMA-SUSTRATO.
Cinética enzimática: Curva de saturación
La curva de saturación de sustrato es un gráfico que nos entrega mucha
información acerca de la actividad enzimática.
La curva de saturación de sustrato se obtiene

graficando la velocidad de reacción, medida
a diferentes concentraciones de sustrato.
Velocidad
Velocidad
máxima
(Vmáx) Presenta dos porciones relevantes:
la velocidad inicial y la velocidad máxima.
Velocidad
inicial (V0)
La diferencia entre estas velocidades se explica
por la presencia de enzima libre o
[Sustrato] completamente saturada con sustrato.
Cinética enzimática: Velocidad inicial
Corresponde a la velocidad medida a bajas concentraciones de sustrato, a las
cuales aún existe enzima libre de sustrato (condición no saturante).
Velocidad
Velocidad
inicial (V0)
En condiciones de velocidad inicial, no hay
suficiente sustrato para “ocupar” a toda la
[Sustrato]
enzima presente.
SUSTRATO ENZIMA
Velocidad
[S]total = [ES] [E]total = [E]libre + [ES]

Velocidad
inicial (V0)
Todo el sustrato se La enzima se encuentra
encuentra en la forma de libre o en la forma de
[Sustrato] complejo ES. complejo ES
LA VELOCIDAD DE UNA REACCIÓN ENZIMÁTICA

SIEMPRE ES PROPORCIONAL A LA [ES].
Velocidad
Velocidad COMO [S] = [ES], LA VELOCIDAD MEDIDA ES

inicial (V0) PROPORCIONAL A LA [S].
[Sustrato]
Cinética enzimática: Velocidad máxima
Corresponde a la velocidad medida a altas concentraciones de sustrato, a las
cuales toda la enzima está como complejo ES (condición saturante).
Velocidad
Velocidad
máxima
(Vmáx)
En condiciones de velocidad máxima, toda la

enzima presente está “ocupada” por el sustrato y
[Sustrato]
existe sustrato libre.
SUSTRATO ENZIMA
Velocidad
Velocidad
máxima
(Vmáx)
[S]total = [S]libre + [ES] [E]total = [ES]
El sustrato se encuentra Toda la enzima se

libre o en la forma de encuentra en la forma de
[Sustrato] complejo ES complejo ES
LA VELOCIDAD DE UNA REACCIÓN ENZIMÁTICA

SIEMPRE ES PROPORCIONAL A LA [ES].
Velocidad
Velocidad
máxima COMO LA [ES] SE HACE CONSTANTE E

(Vmáx) INDEPENDIENTE DE LA [S], LA VELOCIDAD SE
HACE CONSTANTE Y NO AUMENTA MÁS A
MEDIDA QUE AUMENTA LA [S].
POR LO TANTO, LA Vmáx PROPORCIONA

UNA IDEA DE LA CANTIDAD
[Sustrato] DE ENZIMA ACTIVA PRESENTE.
MUESTRA A
Velocidad
¿En cuál muestra hay más enzima activa?

MUESTRA B
[Sustrato]
Cinética enzimática: Michaelis-Menten
Leonor Michaelis y Maude Menten definieron matemáticamente la curva de
saturación de sustrato.
Vmáx [S]
V= Michaelis Menten
Velocidad
KM + [S]
Constante de
Michaelis-Menten
[Sustrato]
Cinética enzimática: KM
La constante de Michaelis-Menten (KM) corresponde a la constante de
equilibrio de la disociación del complejo ES.
Equilibrio gobernado por la

constante de afinidad (Kafinidad)
Reacción catalizada ASOCIACIÓN
S+E ES EP P+E
DISOCIACIÓN
Equilibrio gobernado por la

constante de disociación (KM)
Cinética enzimática: KM
La constante de Michaelis-Menten (KM) corresponde a la constante de
equilibrio de la disociación del complejo ES.
[ES]
Kafinidad =
[S] [E]
Reacción catalizada ASOCIACIÓN
S+E ES EP P+E
DISOCIACIÓN
[S] [E] 1
KM = =
[ES] Kafinidad
Cinética enzimática: Relación entre KM y afinidad
Al ser el inverso de la afinidad, la KM nos permite deducir la afinidad de la
enzima por su sustrato.
Velocidad
Kafinidad
MENOR MAYOR
AFINIDAD
AFINIDAD
KM
[Sustrato]
Cinética enzimática: Cálculo de la KM
Matemáticamente, la KM puede calcularse como la concentración de sustrato
que produce la mitad de la Vmáx.
Vmáx
Velocidad
Vmáx /2 LA KM PUEDE SER INTERPOLADA

GRÁFICAMENTE COMO LA [S] QUE
CORRESPONDE A Vmáx/2.
KM [Sustrato]
Cinética enzimática: Cálculo de la KM
Matemáticamente, la KM puede calcularse como la concentración de sustrato
que produce la mitad de la Vmáx.
ENZIMA A
Kafinidad
MENOR MAYOR
AFINIDAD
AFINIDAD
ENZIMA B
Velocidad
KM
¿Cuál de las dos enzimas tiene mayor KM?
¿Cuál de las dos enzimas tiene mayor

afinidad por el sustrato?
[Sustrato]
Cinética enzimática: Recambio y eficiencia
catalítica
Son parámetros cinéticos adicionales a KM y Vmáx.
kcat Vmáx
kcat
S+E ES P+E KM KM
NÚMERO DE RECAMBIO (kcat) EFICIENCIA CATALÍTICA
Máximo número de moléculas de un Medida de la eficiencia de una enzima para

sustrato que una molécula de enzima puede catalizar una reacción
convertir en producto por unidad de tiempo
Cinética enzimática: Lineweaver-Burk
La representación de Lineweaver-Burk es una linearización de la curva de
saturación de sustrato a través del gráfico de dobles recíprocos.
1/Velocidad
Lineweaver Burk
1/Vmáx
KM/Vmáx 1 KM 1 1
= +
V Vmáx [S] Vmáx
1/[Sustrato]
- 1/KM
y = pendiente x + intercepto
Esta representación permite discriminar más fácilmente cambios de KM o
Vmáx de una enzima, o comparar estos parámetros para diferentes enzimas.
Si la afinidad por el sustrato baja
Aumenta la KM
1/Velocidad
Disminuye 1/KM
El intercepto en el eje x se desplaza a la derecha
Una disminución de afinidad por el sustrato se

1/[Sustrato] verá como un movimiento del intercepto en el
eje x hacia la derecha
Si la Vmáx baja
1/Velocidad
Aumenta 1/Vmáx
El intercepto en el eje y se desplaza hacia arriba
Una disminución de la Vmáx se verá como un

1/[Sustrato] movimiento del intercepto en el eje y hacia arriba
Si la eficiencia catalítica baja
Disminuye Vmáx/KM
1/Velocidad
Aumenta KM/Vmáx
La pendiente de la recta aumenta
Una disminución de la eficiencia catalítica se verá

1/[Sustrato] como un aumento de la pendiente
A
¿Tienen la misma afinidad?
B
1/Velocidad
¿Tienen la misma Vmáx?
¿Tienen la misma eficiencia catalítica?
1/[Sustrato]
A
B
1/Velocidad
1/[Sustrato]
A
B
1/Velocidad
1/[Sustrato]
A
B
1/Velocidad
1/[Sustrato]

inhibidores.

enzimática.
Inhibición irreversible de enzimas
Consiste en la inhibición de la función enzimática por unión covalente del
inhibidor a la enzima.
PMSF
(Modifica residuos de serina)
Yodoacetamida DMPA
(Modifica residuos de cisteína) (Modifica FAD)
MODIFICACIÓN COVALENTE MODIFICACIÓN COVALENTE

DE RESIDUOS ESPECÍFICOS DE GRUPOS PROSTÉTICOS
Son muy utilizados para identificar residuos o grupos prostéticos esenciales

para la unión de sustrato o la catálisis
Inhibición reversible de enzimas
Consiste en la inhibición de la función enzimática por unión del inhibidor a la
enzima a través de interacciones no covalentes.
INHIBICIÓN COMPETITIVA
CATÁLISIS El inhibidor interfiere con la etapa de unión al sustrato
INHIBICIÓN NO COMPETITIVA
S+E ES P+E
El inhibidor interfiere con la etapa catálisis
UNIÓN INHIBICIÓN MIXTA

AL SUSTRATO El inhibidor interfiere con ambas etapas
Inhibición competitiva de enzimas
Se produce por una competencia entre el sustrato y el inhibidor (de
estructura similar al sustrato) por unirse al sitio activo.
Sustrato
ENZIMA
ACTIVA
A baja concentración de sustrato, habrá

competencia, lo que se refleja como una
disminución aparente de la afinidad
ENZIMA
INACTIVA
Inhibidor Aumenta la KM aparente
Sustrato
ENZIMA
ACTIVA
A alta concentración de sustrato, éste

desplaza al inhibidor de la enzima
ENZIMA
INACTIVA
La Vmáx se mantiene
Inhibidor
-I +I
Vmáx
-I
1/Velocidad
+I
Velocidad
1
Vmáx
KM KM 1 1
[Sustrato] - - 1/[Sustrato]
KM KM
Inhibición no competitiva de enzimas
Se produce por la unión del inhibidor a un sitio diferente del activo, afectando
sólo la catálisis.
ENZIMA
Sustrato
ACTIVA
Inhibidor
A baja concentración de sustrato, como no

hay competencia, la unión del inhibidor
ENZIMA provocará una disminución de catálisis
INACTIVA
Inhibidor La KM aparente se mantiene
Sustrato
ENZIMA
Sustrato
ACTIVA
Inhibidor
A alta concentración de sustrato, como no

hay competencia, no hay desplazamiento
ENZIMA del inhibidor.
INACTIVA
Inhibidor La Vmáx disminuye
Sustrato
+I
-I Vmáx
-I
1/Velocidad
1
Velocidad
Vmáx
+I
Vmáx 1
Vmáx
KM 1
[Sustrato] - 1/[Sustrato]
KM
Inhibición mixta de enzimas
la afinidad por el sustrato y la catálisis.
ENZIMA
Sustrato
ACTIVA
Inhibidor
A baja concentración de sustrato, no hay

ENZIMA competencia, la unión del inhibidor
INACTIVA provoca una disminución de afinidad
Inhibidor La KM aparente aumenta

Sustrato
ENZIMA
Sustrato
ACTIVA
Inhibidor
A alta concentración de sustrato, el

ENZIMA inhibidor tampoco puede ser desplazado
INACTIVA
Inhibidor La Vmáx aparente disminuye

Sustrato
-I +I
Vmáx
-I
1/Velocidad
1
Velocidad
Vmáx
Vmáx
+I
1
Vmáx
KM KM 1 1
[Sustrato] - - 1/[Sustrato]
KM KM
Inhibición reversible de enzimas: Resumen
Los cambios en KM y Vmáx aparentes permiten discriminar el mecanismo de
inhibición enzimática de un inhibidor
Tipo de inhibición Cambio en KM Cambio en Vmáx Cambio en eficiencia catalítica
Competitiva Aumenta Ninguno Disminuye

No competitiva Ninguno Disminuye Disminuye
Mixta Aumenta Disminuye Disminuye

inhibidores.

enzimática.
Propiedades de las
enzimas: Modulación
alostérica
Regulación
TIPOS DE
REGULACIÓN
Escisión Modificación
proteolítica covalente
Regulación de enzimas: Modulación alostérica
Así como otro tipo de proteínas (por ejemplo, hemoglobina), algunas enzimas
están sujetas a regulación por moduladores alostéricos.
Sustrato
Sustrato
Activador Inhibidor
alostérico
Enzima alostérico Enzima
inactiva Enzima activa Enzima activa inactiva
ACTIVACIÓN ALOSTÉRICA INHIBICIÓN ALOSTÉRICA

La cinética de enzimas alostéricas es diferente a las enzimas Michaelianas
(que siguen cinética de Michaelis-Menten).
Vmáx La curva de saturación de sustrato presenta una

forma sigmoidea característica.
Velocidad
Vmáx /2
La constante de disociación del complejo

enzima-sustrato (K0.5) se calcula del mismo
modo que la KM por interpolación gráfica.
K0.5 [Sustrato]
Vmáx Los moduladores alostéricos modifican la K0.5

de las enzimas por sus sustratos.
Velocidad
Un activador alostérico provocará una disminución

de la K0.5, lo que se observa como un movimiento
de la sigmoidea hacia la izquierda.
K0.5 K0.5 [Sustrato]

Vmáx Los moduladores alostéricos modifican la K0.5

de las enzimas por sus sustratos.
Velocidad
Un inhibidor alostérico provocará un aumento de la

K0.5, lo que se observa como un movimiento de la
sigmoidea hacia la derecha.
K0.5
K0.5 [Sustrato]
Regulación de enzimas: Modificación covalente
Algunas enzimas están sujetas a regulación por modificaciones covalentes
reversibles de residuos específicos.
Grupos
Nombre de la Grupo que
modificables más
modificación modifica
frecuentes
O-fosforilación Ser, Thr, Tyr (-OH) Fosforilo Existen más de 100
N-glicosilación Asn (amida) Glicósido diferentes
modificaciones
O-glicosilación Ser, Thr (-OH) Glicósido
covalentes reversibles.
N-terminal, Lys
N-acetilación Acetilo
(amina)
N-metilación Arg, Lys (amina) Metilo
Regulación de enzimas: Modificación covalente
La reversibilidad de estas modificaciones es posibilitada por enzimas que
catalizan la modificación y otras que catalizan la remoción de la misma.
Enzima que cataliza

la modificación
QUE LA MODIFICACIÓN
Enzima sin Enzima COVALENTE ACTIVE O
modificar modificada INACTIVE A LA ENZIMA ES
ESPECÍFICO DE LA ENZIMA.
Enzima que cataliza la

remoción de la modificación
Regulación de enzimas: Fosforilación reversible
La regulación por O-fosforilación reversible, catalizada por proteína quinasas
o proteína fosfatasas, es de las más relevantes en el metabolismo celular.
Catalizada por
proteína quinasas
FOSFORILACIÓN
DESFOSFORILACIÓN
Catalizada por
proteína fosfatasas
Regulación de enzimas: Escisión proteolítica
Algunas enzimas son sintetizadas como zimógenos inactivos, activables por la
ruptura hidrolítica de una porción específica de su cadena polipeptídica.
Catalizada por Enzima

proteasas activa
Zimógeno
inactivo ESCISIÓN PROTEOLÍTICA
ESTA REGULACIÓN ES CARÁCTERÍSTICA DE ENZIMAS DIGESTIVAS,

DE APOPTOSIS Y FACTORES DEL COMPLEMENTO
Enzimas de utilidad clínica
Existen una serie de actividades enzimáticas que se miden en el suero
(actividad sérica) y que permiten conocer daños tisulares específicos.
Creatina fosfoquinasa
Baja actividad
plasmática
Alta actividad
plasmática
ISOENZIMAS MARCADORES DE DAÑO

Enzimas codificadas por genes La actividad de estas enzimas sólo se
diferentes, pero que catalizan la misma detecta en el suero si han sido liberadas
reacción, y son tejido específicas a la sangre por destrucción de tejidos
Enzimas de utilidad clínica: Transaminasas y
transpeptidasas.
Las más frecuentemente medidas son: GOT, GPT y GGT.
Leucocitos
Eritrocitos
Vesícula biliar
Páncreas
GOT GPT GGT

Transaminasa glutámica Transaminasa aspártica Gamma glutamil
También conocida como AST También conocida como ALT transpeptidasa
Enzimas de utilidad clínica: LDH
La lactato deshidrogenasa (LDH) se presenta como varias isoenzimas que son
tejido específicas.
Páncreas
Sistema
inmune
Placenta
LDH2 LDH4
Eritrocitos
LDH1 LDH3 LDH5

Enzimas de utilidad clínica: CPK
La creatina fosfoquinasa (CPK) también se presenta como varias isoenzimas
que son tejido específicas.
CPK1 CPK2 CPK3


inhibidores.

enzimática.

Unidad 2 Consolidado

Cargado por

Información del documento

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Unidad 2 Consolidado

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Unidad 2

Edición: BIOQUÍMICA GENERAL

Interpreta los datos cinéticos de una reacción

Describe los mecanismos generales de regulación

PFK-1 ATP sintasa

¿Qué son? ¿Cómo aumentan la ¿Cómo se mide

PFK-1 ATP sintasa Ribozimas

NATURALEZA QUÍMICA REQUERIMIENTO ESTRUCTURAL

Casi todas las enzimas tienen Para ejercer su acción, la enzima

RESIDUOS DEL SITIO ACTIVO

COFACTOR INORGÁNICO COENZIMA

Especie inorgánica, Cofactor orgánico o

Algunos aumentos de la velocidad de

Ciclofilina 105 VELOCIDAD DE LA EQUILIBRIO DE LA

La velocidad de una reacción

DISTINTO ESTADO DE TRANSICIÓN

DIFERENTE ENERGÍA DE ACTIVACIÓN

ESTO ES POSIBLE, EN PARTE, DEBIDO A LA

Si la enzima fuese complementaria al EP

Al ser complementaria al segundo EP

enzimas: manera óptima

La velocidad de las reacciones DESNATURALIZACIÓN

La velocidad de las reacciones pH ÓPTIMO

El pH óptimo es específico de cada

Succinato deshidrogenasa y su sustrato a distintos pH

¿A cuál pH se produce la mejor interacción con el sustrato?

Clase de enzima Tipo de reacción que catalizan Ejemplos

AFINIDAD DE LA ENZIMA CANTIDAD DE UNIDADES EFICIENCIA

Evaluación de la avidez de Determinación de la concentración Cuantificación de cuán eficiente es

concentración de reactante disminuirá, debido a

En forma análoga, la concentración de producto

EL VERDADERO REACTANTE DE UNA REACCIÓN

LA VELOCIDAD DE UNA REACCIÓN ENZIMÁTICA SIEMPRE ES PROPORCIONAL

La curva de saturación de sustrato se obtiene

[S]total = [ES] [E]total = [E]libre + [ES]

LA VELOCIDAD DE UNA REACCIÓN ENZIMÁTICA

Velocidad COMO [S] = [ES], LA VELOCIDAD MEDIDA ES

En condiciones de velocidad máxima, toda la

[S]total = [S]libre + [ES] [E]total = [ES]

El sustrato se encuentra Toda la enzima se

LA VELOCIDAD DE UNA REACCIÓN ENZIMÁTICA

máxima COMO LA [ES] SE HACE CONSTANTE E

POR LO TANTO, LA Vmáx PROPORCIONA

¿En cuál muestra hay más enzima activa?

Equilibrio gobernado por la

Reacción catalizada ASOCIACIÓN

Equilibrio gobernado por la

Reacción catalizada ASOCIACIÓN

Vmáx /2 LA KM PUEDE SER INTERPOLADA

¿Cuál de las dos enzimas tiene mayor KM?

¿Cuál de las dos enzimas tiene mayor

Máximo número de moléculas de un Medida de la eficiencia de una enzima para

Si la afinidad por el sustrato baja

El intercepto en el eje x se desplaza a la derecha

Una disminución de afinidad por el sustrato se

El intercepto en el eje y se desplaza hacia arriba

Una disminución de la Vmáx se verá como un

Si la eficiencia catalítica baja

La pendiente de la recta aumenta

Una disminución de la eficiencia catalítica se verá

¿Tienen la misma Vmáx?

¿Tienen la misma eficiencia catalítica?

¿Tienen la misma Vmáx?

¿Tienen la misma eficiencia catalítica?