UNIVERSIDAD

TECNOLOGÍCA DE
JALISCO
DAYANA GUADALUPE MEDINA MENDOZA

GRADO Y GRUPO
CARRERA NOMBRE DE LA ASIGNATURA

TSU QUÍMICA ÁREA 3A TM BIOQUIMICA

TECNOLOGÍA FARMACÉUTICA

PRÁCTICA No. NOMBRE DE LA PRÁCTICA FECHA

Práctica de laboratorio sobre la
10 Electroforesis de biomoléculas 04 Diciembre 2021

INTRODUCCIÓN

En biología molecular, una gran cantidad de técnicas que se realizan comúnmente requieren el uso de
la electroforesis, por lo que supone una parte importante del procedimiento sistemático del análisis
(separación, purificación, preparación) de los ácidos nucleicos y las proteínas. La mayoría de las
biomoléculas poseen una carga eléctrica cuya magnitud depende del pH del medio en el que se
encuentran; como consecuencia, pueden desplazarse cuando se ven sometidas a un campo eléctrico
hacia el polo de carga opuesta al de la molécula. A diferencia de las proteínas, que pueden tener una
carga positiva o negativa, los ácidos nucleicos sólo poseen carga negativa, debido a su esqueleto de
fosfatos. Por lo tanto, en una electroforesis, los ácidos nucleicos migrarán hacia el polo positivo; es
decir, el ánodo. En el caso de las proteínas se realiza pretratamiento con detergentes, como el
dodecilsulfato de sodio (SDS), que les confiere carga negativa; con ello se homogenizan las proteínas
de la muestra y todas migrarán hacia el polo positivo, y sólo se separarán por tamaño.

El principio de la electroforesis consiste en la migración proporcional de las moléculas a través de un

gel u otro tipo de matriz porosa, según su peso molecular o tamaño; movimiento generado por el campo
eléctrico.

OBJETIVOS

 Llevar a cabo la técnica de la electroforesis.

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FUNDAMENTO (MARCO TEORICO)

La electroforesis es una técnica que emplean los científicos en el laboratorio utilizada para separar el
ADN, el ARN, o moléculas o proteínas en base a su tamaño y carga eléctrica. Se utiliza una corriente
eléctrica para mover las moléculas y que se separen a través de un gel. Los poros del gel actúan como
un colador, permitiendo que las moléculas más pequeñas se muevan más rápido que las grandes. Las
condiciones utilizadas durante la electroforesis se pueden ajustar para separar moléculas en el rango
de tamaño que se desee.
La electroforesis es una técnica que se utiliza de forma generalizada en la que, fundamentalmente, se
aplica corriente eléctrica a moléculas biológicas, ya sean ADN, proteínas o ARN..., y se separan en
función de si son más grandes o más pequeñas. Se utiliza en una gran variedad de aplicaciones...
como en medicina forense para determinar la identidad de las personas que puedan haber participado
en un delito, mediante la vinculación de su patrón de ADN -su patrón de electroforesis- a uno que esté
en una base de datos.
La electroforesis es un método analítico en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada con la
finalidad de separar biomoléculas según su relación tamaño a carga eléctrica, usándose como base
una matriz gelatinosa.

Cuando una mezcla de moléculas ionizadas y con carga neta son posicionadas en un campo eléctrico,
estas experimentan una fuerza de atracción hacia el polo que posee carga opuesta, dejando transcurrir
cierto tiempo las moléculas cargadas positivamente se desplazaran hacia el cátodo (polo negativo) y
aquellas cargadas positivamente se desplazarán hacia el ánodo (polo positivo).

En medicina, la electroforesis es una técnica habitual en el laboratorio clínico. Permite separar especies
químicas (ácidos nucleicos o proteínas) a lo largo de un campo eléctrico en función de su tamaño y de
su carga eléctrica. Los ácidos nucleicos, ADN y ARN, tienen por naturaleza carga negativa. Si ponemos
fragmentos del ADN extraído de una muestra biológica sobre un soporte poroso (gel) y aplicamos un
campo eléctrico, se producirá la migración diferencial de los fragmentos a través de los poros de la
matriz. La tinción del gel con bromuro de etidio, que es una sustancia fluorescente que se intercala en
la molécula de ADN, y la exposición con luz ultravioleta, permite observar el resultado de ésta
migración. El tamaño de los fragmentos de ADN se puede estimar comparándolos con el patrón de
bandas que se obtiene de marcadores comerciales de peso molecular conocido. La electroforesis de
ADN es útil para comparar patrones de bandas de diferentes muestras biológicas. Así por ejemplo se
puede usar para comparar muestras de individuo sano frente a individuo enfermo, para la identificación
de ácidos nucleicos de agentes infecciosos o para la obtención de un fragmento determinado de ADN
que, una vez localizado en el gel, puede ser extraído para análisis posteriores.

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 Preparar un gel de agarosa al 1% pesando 1g de agarosa y disolver en 100 mL de buffer

correspondiente.
 Calentar la mezcla hasta lograr una mezcla homogénea evitando la ebullición violenta.

PROCEDIMIENTOS (DESCRIPCION)
 Colocar la bandeja en el caster gel y girar la palanca de levas cerciorándose de que cierre
herméticamente.
 Vaciar con mucho cuidado la mezcla evitando hacer burbujas y colocar un peine en un
extremo. Dejar enfriar hasta que se polimerize el gel.
 Se colocan de 2-20 µg/µL de muestras de ADN en cada pozo con buffer de carga y dejar
correr el gel a 70 volts por una hora o una hora y media.
 Se retira el gel y se deja tiñendo 30 min en la disolución del buffer que anteriormente se
ha seleccionado y se agrega bromuro de etidio (EtBr) a una concentración entre 200-500
ng/mL en el gel de agarosa.

MATERIAL Y EQUIPO

 Matraz de 250 mL.
 Probeta 100 mL.
 Micropipetas.
 Microondas.
 Camara de electroforesis horizontal.
 Guantes de nitrilo.
 Balanza analíticá

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CONCLUSIONES

La electroforesis en

gel es una DIAGNÓSTICO: Electroforesis. (2018). ELECTROFORESIS.

técnica utilizada

para separar

fragmentos de
REFERENCIAS
ADN (u otras

macromoléculas,

como ARN y

proteínas) por su

tamaño y

carga. ... Debido

a esto,

la electroforesis

en gel separa los

fragmentos de

ADN únicamente

por su tamaño
https://www.iztacala.unam.mx/rrivas/NOTAS/Notas5Diagnostico/metelectro.html
Electroforesis | BiologÃa molecular. Fundamentos y aplicaciones en las ciencias de la salud | AccessMedicina |
McGraw Hill Medical. (2019). ELECTROFORESIS. https://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx?
bookid=1473§ionid=102743771
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Electroforesis | NHGRI. (2019). Genome.gov. https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Electroforesis
Quintero, N. (2019). Electroforesis. ELECTROFORESIS. https://es.slideshare.net/nikho9030/electroforesis-
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