Licenciatura Médico Cirujano

Materia:Genética y genómica

Reporte de la Práctica N° 2
“Electroforesis”

Equipo 2

Nombre completo de Integrantes:

Manuel de la Fuente Vega
Gloria Crystal Fernández Hernández
Isaac García Segovia
Alfonso Guzmán Lagunes
Erendy Naheli Hernández Sánchez

Fecha en la que se entrega: 23 de marzo de 2023.

INTRODUCCIÓN Y FUNDAMENTO

Introducción:
La electroforesis en gel de agarosa es una técnica ampliamente utilizada en biología
molecular y genética para la separación y análisis de moléculas, como son el ADN,
el ARN y las proteínas, todo esto, en función de su tamaño y carga eléctrica. Esta
técnica se basa en el descenso de las moléculas a través de un gel de agarosa, que
es la herramienta con la que las moléculas se separan por tamaño y forma. La
electroforesis en gel de agarosa es una técnica clave en la investigación en biología
molecular, ya que permite el análisis y la separación de moléculas en función de su
tamaño y estructura, esto permite la identificación de diversas alteraciones como lo
pueden ser las mutaciones genéticas, la determinación de patrones de expresión
génica y la identificación de proteínas específicas.

Fundamento teórico:
La electroforesis en gel de agarosa se basa en la migración de las moléculas
cargadas eléctricamente a través de un gel de agarosa, que funciona como
“organizador” del ADN según su longitud. El gel de agarosa se prepara disolviendo
agarosa en un tampón (buffer) de electroforesis, calentando la mezcla hasta que se
disuelva completamente y luego vertiendo la solución en una cámara de
electroforesis. Una vez que el gel de agarosa se ha enfriado y solidificado, se
forman pequeños canales en el gel, llamados pozos, en los que se cargan las
muestras.

Las muestras se cargan en los pozos del gel de agarosa, y luego se aplica un
campo eléctrico a través del gel, que hace que las moléculas cargadas se muevan a
través del gel en función de su tamaño y de su carga. Las moléculas más grandes
se mueven más lentamente a través del gel, mientras que las moléculas más
pequeñas se mueven más rápidamente. Como resultado, las moléculas se separan
según el tamaño de los fragmentos de ADN y se determina comparando su posición
en el gel con los estándares de tamaño que se cargan junto con las muestras.
La electroforesis es una técnica de suma importancia en la investigación científica y
médica. Permite la separación y la identificación de moléculas biológicas, lo que es
esencial para comprender la estructura y función de las proteínas, los ácidos
nucleicos y otros componentes celulares. La electroforesis también es una
herramienta importante en el diagnóstico y el tratamiento de enfermedades
genéticas y en la identificación de patógenos. Además, la electroforesis es una
técnica relativamente sencilla y económica, lo que la hace accesible a una amplia
gama de investigadores y profesionales médicos.

MARCO TEÓRICO

La biología molecular ha revelado en el último siglo varios de los mecanismos

fundamentales que sustentan el funcionamiento de la célula. Hoy en día, el papel de
las biomoléculas poliméricas -el ácido desoxirribonucleico ADN), el ácido
ribonucléico (ARN) y las proteínas- en la salud y en las aplicaciones biotecnológicas
se estudia en todos los niveles educativos.

El evento fundacional de la biología molecular fue el reporte del “principio

transformante”, un agente químico que contiene la propiedad patogénica de las
bacterias de la neumonía, siendo capaz de “transformar” bacterias no patógenas en
patógenas.

“Principio Transformante”

En 1928, el bacteriólogo inglés Frederick Griffith, realizó experimentos de laboratorio

con dos cepas de Streptococcus pneumoniae, agente ya conocido por causar
neumonías, bacteriemia grave y meningitis.

Decidió separar las cepas en R y L, dejándolas suspendidas dentro de tubos con

medio líquido, que luego se utilizó para ser inoculado por vía subcutánea, en
ratoncitos de laboratorio. La cepa L, virulenta, produjo bacteriemia, neumonía y
muerte, es decir, la cápsula le confería protección contra la fagocitosis y la bacteria
se multiplicaba en la sangre y los pulmones del ratón. Por lo contrario, la cepa R, sin
cápsula, era fagocitada rápidamente impidiendo su multiplicación; en consecuencia,
evitaba la enfermedad y el ratón sobrevivía.

Los descubrimientos de la biología molecular y sus ramificaciones hacia la medicina,

la biología celular y la biotecnología no se pueden entender sin el avance de las
herramientas de análisis, síntesis y modificación de las moléculas de la vida. Entre
los múltiples métodos de los que se vale el biólogo molecular, cinco han sido pilares
en el desarrollo de la biología molecular y son parte esencial de la investigación
moderna. Estos métodos son: electroforesis, secuenciación, clonación, hibridación y
reacción en cadena de la polimerasa.

Dado que la electroforesis es una de las técnicas más poderosas para análisis de
proteínas y de ADN o ARN en el laboratorio, debemos conocer su definición; el
término de electroforesis proviene de dos palabras griegas, Elektro que significa
“electricidad” y Phoros que significa “movimiento”. Se trata de una técnica de
separación de partículas basada en la velocidad diferencial de migración que se
observa en las moléculas y partículas con cargas o neutras dispuestas en un medio
acuoso, debido a la atracción y/o repulsión que sufren en un campo eléctrico,
causando su movimiento a través de una matriz.

Herramienta de separación de biomoléculas

La EC constituye una técnica de separación basada en la migración diferencial de

moléculas (ADN, proteínas, iones inorgánicos, carbohidratos, esteroides, fármacos,
etc.) sujetas a un campo eléctrico (de 100 a 500 V/cm) a través de un capilar de
menos de 50 µm de diámetro. El interior del capilar se encuentra formado por
grupos silanol (Si-OH), los cuales al ser desprotonados (Si-O), elevan
considerablemente el potencial de hidrógeno (pH) y favorecen la presencia de
analitos específicos. Como en toda electroforesis, los cationes fluyen hacia la
terminal negativa, mientras que los aniones fluyen hacia la positiva, pero la
inducción del alto potencial eléctrico permite que: 1) la separación sea más sensible
entre las diferentes moléculas (resolución) y 2) el tiempo de análisis sea más corto.
Para el caso del ADN, los fragmentos de análisis se encuentran unidos a marcas
fluorescentes que son detectadas por un láser de argón (Ar), que las excita a
diferentes longitudes de onda (λ) , permitiendo el análisis de múltiples fragmentos al
mismo tiempo, que se mueven por la aplicación del campo eléctrico hacia el polo
positivo y se separan de acuerdo con la longitud del mismo, de tal forma que los de
menor peso molecular viajan más rápido a través del capilar, mientras que los de
mayor peso lo hacen más lentamente.

Electroforesis en la medicina

Con la secuencia completa de nuestro genoma, la medicina tiene en sus manos una
compleja tarea, diversificada en varias áreas con el fin de entender la complejidad
de los millones de bases que conforman la genética humana. Una de estas áreas
tiene el fin de explorar las causas genéticas de las enfermedades y la
susceptibilidad de los individuos a padecerlas. Aunado a este punto, las pruebas
diagnósticas genéticas emplean el uso de un gran número de marcadores
polimórficos (variaciones específicas en la secuencia del genoma) como son los
«microsatélites o STR» (del inglés Short Tandem Repeat), los «minisatélites o
VNTR» (del inglés Variable Number of Tandem Repeat), y los SNP (por sus siglas
en inglés Single Nucleotide Polymorphism), además de la determinación de
mutaciones las cuales están asociadas al desarrollo de muchas enfermedades. Los
seres humanos presentan una similitud de 99,9% del genoma, por lo que sólo 0,1%
del genoma es altamente variable y hace la diferencia entre un individuo y otro,
confiriéndole identidad dentro de la misma especie. Estas diferencias no son sólo
para rasgos físicos, sino también para características genéticas particulares, por las
que un individuo puede ser susceptible a desarrollar una enfermedad.

JUSTIFICACIÓN

La electroforesis es un procedimiento de alta relevancia para los procedimientos que

se realizan en el análisis de ARN, ADN, enzimas y proteínas, pues permite
identificar y visualizar su estructura, contenido, así como la acción del campo
eléctrico en su tamaño o peso molecular.
Como sabemos, en el estudio de la biología molecular existen varias aplicaciones
que requieren el uso de la electroforesis, aunque como toda técnica existen diversas
maneras de realizarla según el fin que se tenga. Lo que si tienen en común es la
facilidad que otorgan para la visualización de las moléculas analizadas.

Por ejemplo; en la electroforesis de tipo vertical, se analizan tanto moléculas de

ADN como proteínas, mientras que en la electroforesis horizontal generalmente se
trabaja con ADN o ARN. De otro lado, existen otros métodos electroforéticos que
presentan ciertas modificaciones, así tenemos la electroforesis en campo pulsado,
mayormente usada para separar fragmentos muy grandes de ADN (ADN genómico),
la electroforesis bidimensional para un análisis más sofisticado de las proteínas etc.

Es importante señalar que la electroforesis en asociación con otras técnicas tales

como PCR, e hibridación, brinda una gran ayuda en el área de la salud, en nuestro
caso en la medicina. Por lo que esta es la motivación mayor para conocer esta
técnica, además de ver qué es posible visualizar las bandas de ARN o ADN de
patógenos, que a su vez permitan detectar cambios o mutaciones a nivel genético,
visualizar una nuevas proteínas y por ende facilitar el diagnóstico y/o tratamiento de
enfermedades asociadas a los genes.

HIPÓTESIS

Si se sigue la metodología adecuada para realizar la electroforesis, entonces se

obtendrán resultados precisos y reproducibles en la separación y análisis de las
moléculas presentes en la muestra analizada en función de su longitud.

OBJETIVOS

Objetivo general:
● Dominar la metodología adecuadamente para producir una adecuada
electroforesis y realizar un buen análisis de proteínas.

Objetivos específicos:
● Conocer los fundamentos y tipos de electroforesis de
● Uso regular en los laboratorios de biología molecular.
 ● Reconocer las aplicaciones de la electroforesis al análisis de ácidos
nucleicos.
● Establecer los procedimientos de la técnica de electroforesis de ADN y
proteínas para ser difundidas
● en la red de laboratorios.

METODOLOGÍA
Paso 1) Colocamos un poco de agarosa en un matraz y después un poco de líquido
buffer, colocamos un tapón de papel de plastico al matraz para que no se derrame y
metemos la mezcla al microondas calentándolo hasta que la agarosa se disuelva en
el buffer; quitamos el plástico y en un molde colocamos la mezcla en un molde
adaptado para contenerla correctamente; el molde cuenta con unas ranuras
especiales que sirven para que coloquemos el peine dentro de la mezcla y lo
dejamos secar para que se vuelva sólido, conforme el gel se seca se le van
formando hoyos delgados. Posterior a esto quitamos el peine para dejar espacio
libre.

Paso 2) Vamos a preparar la caja de electroforesis, vertemos un poco de buffer

dentro de la caja de electroforesis y metemos el gel con todo y molde para crear
nuestra muestra de ADN.

Paso 3) Con una micropipeta tomamos un poco de buffer y lo colocamos en a la

muestra de ADN, de esta forma es más fácil poder ver la muestra. Después con la
micropipeta transferimos el ADN al gel en uno de los espacios que dejó el peine,
ahora vamos a utilizar el ADN de tamaño estándar y lo vamos a colocar en el
siguiente espacio vacío dentro del gel.

Paso 4) Ahora vamos a encender la fuente de electricidad para pasar corriente al

gel, colocamos el cable negro y el cable rojo en su lugar y encendemos la fuente de
energía, observamos burbujas salir en el gel lo cual indica que todo va como debe y
que la corriente está pasando; el ADN se repele de un extremo a otro por la carga
negativa; las cadenas cortas viajan más lento pero llegan más lejos que las largas.

Paso 5) Ahora sacamos el gel de la caja de electroforesis y comenzamos con el

análisis de la muestra, debemos oxidar el ADN con una solución especial de
bromuro de etidio que actúa bajo luz fluorescente; quitamos el gel del molde y lo
colocamos en la solución oxidativa, después de una hora lo retiramos y lo ponemos
en la caja de luz ultravioleta y de esta manera ya podemos contar un aproximado de
cadenas de ADN en nuestra muestra.
OBSERVACIONES
Es necesario contar con un parámetro gráfico que nos ayude a tener una idea de
cuántas bandas puede haber en nuestras tiras de ADN.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

La electroforesis de proteínas sirve para diagnosticar enfermedades que pueden

causar alteración en la cantidad de proteínas circulantes en la sangre. Las proteínas
que son evaluadas en este examen son importantes para el buen funcionamiento
del organismo, ya que actúan en el sistema inmune, en el proceso de coagulación y
reacciones metabólicas, además de poder llevar algunas moléculas hasta su lugar
de acción.Una vez que los fragmentos se han separado, podemos examinar el gel y
saber el tamaño de las bandas, cuando el gel se tiñe con un pigmento que se une al
ADN brillarán, cada banda contiene un gran numero de ADN del mismo tamaño, se
puede observar ADN en forma de dímero circular abierto, dímero circular
covalentemente cerrado, monómero abierto y monómero cerrado.
CUESTIONARIO
1. Explique qué tipo de material biológico se puede utilizar para desarrollar el
Ensayo de Electroforesis.
Se necesita agarosa, molde de gel, un horno de microondas, matraz de 250 mL,
probeta de 100 mL, micropipetas, cámara de electroforesis horizontal, balanza
analítica y una disolución amortiguadora.

2. Además del bromuro de etidio, ¿Qué otros compuestos se pueden emplear para
visualizar moléculas de DNA?
Xileno cianol y verde cianol

¿En qué se fundamenta su uso?

Se usa como marcador para detectar la posición de migración de los fragmentos de
ácido nucleico Moo del

3. Describir otros 2 ensayos que se podrían utilizar para detectar ADN.

Cromatografía: Es un método usado para la separación, identificación y
determinación de los componentes químicos en mezcla complejas, basadas en
propiedades físicas de ciertos materiales, que en interacción con sustancias o
mezclas de sustancias que guardan relación con las propiedades químicas de éstas,
permite descomponer una mezcla y analizar sus constituyentes.

Ultracentrifugación:Es un método que consiste en girar muy rápidamente un sólido o

líquidos de distintas densidades. Por medio del movimiento rotatorio de mayor
intensidad que la fuerza gravitacional provoca que haya una sedimentación de
partículas, donde podemos observar estructuras subcelulares y biomoléculas.
CONCLUSIÓN

En conclusión, la electroforesis en gel es una de las técnicas más adecuadas para

visualizar el ADN, es fácil de preparar y el uso de colorantes como SYBR Safe
permite la observación cuando se expone a luz fluorescente.La preparación
incorrecta del gel de agarosa provocará resolución de bandas, el tampón de carga
debe ser exacto (15 µl). La electroforesis se utiliza para describir el movimiento de
moléculas cargadas (proteínas o ácidos nucleicos) en un campo eléctrico
predominante. Los ácidos nucleicos son una de las moléculas biológicamente más
relevantes, ya que poseen un conjunto de iones ionizables que pueden ser cationes
o aniones. Estas fracciones cargadas son las que se escinden instantáneamente
según su carga cuando se aplica un voltaje a través de los electrodos.Una de sus
propiedades es que tiene carga negativa debido a su grupo fosfato y se mueve
positivamente cuando se expone a un campo eléctrico y se coloca en un Una vez
realizada la ejecución, los resultados están disponibles. Observado por
fluorescencia. El bromuro de etidio o SYBR Safe son los colorantes más utilizados
porque se intercalan con las nucleobases y emiten fluorescencia. El uso de este
compuesto es considerado un representante altamente cancerígeno y debe
manejarse con extrema precaución y en estricto cumplimiento de los protocolos de
bioseguridad del laboratorio.
BIBLIOGRAFÍAS

● Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., & Walter, P. (2015).
Biología molecular de la célula (6.a ed.). Omega.
● Carrada-Bravo, T. (2016). Investigación de la transformación de
Streptococcus pneumoniae en el laboratorio, y el nacimiento de la genética
bacteriana y la biología molecular. Revista chilena de infectología, 33(1),
61-65.
● Peña-Castro, J. M., Gregorio-Ramírez, O., & Barrera-Figueroa, B. E. (2013).
Los métodos experimentales que permiten el estudio de las macromoléculas
de la vida: historia, fundamentos y perspectivas. Educación química, 24(2),
237-246.
● Magaña, J. J., Arenas-Sordo, M. D. L. L., & Gómez, R. (2009). La
electroforesis capilar como una nueva estrategia en la medicina y el
diagnóstico clínico. Revista médica de Chile, 137(7), 946-956.
● Karp Gerald. Biologia celular y molecular conceptos y experimentos,
7aedición, editorial Mc Graw Hill education, 2002
● Westermeier, R. (2005). Electrophoresis in practice, 4th ed. Wiley-VCH Verlag
GmbH & Co.