Universidad Nacional Autónoma de Nicaragua,

Managua - UNAN Managua

Recinto Rubén Darío
Facultad de Ciencias Médicas

Guía de Seminario No. 6: Electroforesis Casera

Integrantes:
1. Gurdián Rosales Camila Guadalupe (19031636)
2. Gutiérrez González Jack Bryan (19032835)
3. Hernández Hernández Nazira Massielle (19032230)
4. Hernández Nadiezda Svethlana (19715022)
5. Hernández Toruño Bryan de Jesús (18031856)
6. Lanzas Araica Allisson Dayana (19032956)
7. Largaespada Estrada Ivaniel Elí (19032406)
8. López Castillo Javier Ignacio (19033935)
9. López Gaitán Mariángeles (19033550)
10. Luna González Julio Gerardo (19032120)
11. Mairena Cunningham Aileeng Cleopatra (19032560)
12. Martínez Castrillo Rosario Isamar (19032571)
13. Mejía Flores Alba Mineth (18033704)
14. Méndez Córdoba Xochilt Fabiola (19033540)
15. Morales García Keren Lucía (19031724)
16. Muñoz Sequeira Marvin Antonio (19033616)
17. Ortega Palacios María Auxiliadora (19031493)
18. Paizano Jiménez Daniela Paola (13023232)

Asignatura: Biología Molecular Docente: Dr. Dorián Aguirre Grupo: Medicina M621

Octubre 2020
 Índice
Objetivos....................................................................................................................................................1

1. ¿Cuál es el fundamento de la electroforesis?......................................................................................2

2. Mencione los tipos de electroforesis..................................................................................................2

2.1. Isoelectroenfoque........................................................................................................................2

2.2. Electroforesis de campo pulsante (en gel de agarosa).................................................................3

2.3. Electroforesis en gel de poliacrilamida (proteínas y ADN)........................................................4

2.3.1. Electroforesis bidimensional................................................................................................4

2.3.2. Electroforesis Desnaturalizante...........................................................................................5

2.3.3. Electroforesis nativa.............................................................................................................5

2.4. Inmunoelectroforesis...................................................................................................................5

3. ¿Cuáles son los componentes de una cámara electroforética?...........................................................6

4. Cuántos tipos de geles existen? Explique las ventajas y desventajas.................................................6

5..................................................................................................................................................................8

6. ¿Cuál es el papel del bicarbonato en el experimento?........................................................................8

7. ¿Por qué en el experimento los pocillos no deben tocar el fondo?.....................................................8

8. ¿Cuál es la dirección en la que corre un amplicón a través de un gel y por qué?..............................8

9. Documente cinco aplicaciones médicas de la electroforesis............................................................10

10. Explique por qué la electroforesis ha cobrado importancia en el estudio de los errores congénitos
del metabolismo.......................................................................................................................................12

11. ¿Por qué la electroforesis de proteínas en orina se utiliza como una herramienta en el diagnóstico
de nefropatías?.........................................................................................................................................13

12. Por qué la electroforesis de la hemoglobina se emplea en el estudio de las hemoglobinopatías?13

Referencias...............................................................................................................................................16
 Objetivos

 Mencionar los componentes básicos de un sistema electroforético.

 Explicar el principio de la electroforesis.
 Describir los tipos de electroforesis.
 Identificar las aplicaciones médicas de la electroforesis.

1
1. ¿Cuál es el fundamento de la electroforesis?

La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un

campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaños moleculares y
carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use.

Es una técnica de separación que se ha desarrollado gracias a los avances de la cromatografía líquida de
alta eficacia junto con los procedimientos más tradicionales de electroforesis. Esta técnica permite
separar bastante bien biomoléculas, donde la cromatografía líquida se muestra menos eficaz, y
compuestos de pequeña masa molecular, difíciles de estudiar por los procedimientos clásicos de
electromigración en soporte.

Cuando una mezcla de moléculas ionizadas y con una carga eléctrica neta son colocadas en una campo
eléctrico, éstas experimentarán una fuerza de atracción hacia el polo que posea carga opuesta:

 Así, si se deja transcurrir un cierto tiempo las moléculas cargadas positivamente se

desplazarán hacia el cátodo (el polo negativo) y aquellas cargadas positivamente se desplazarán
hacia el ánodo (el polo positivo).

 El movimiento de las moléculas está gobernado también por dos fuerzas adicionales, la fricción
y la difusión.

El principio de la electroforesis consistes principalmente en la migración proporcional de las

moléculas a través de un gel u otro tipo de matriz porosa, según su peso molecular o tamaño;
movimiento generado por el campo eléctrico.

2. Mencione los tipos de electroforesis.

2.1. Isoelectroenfoque

(También se llama enfoque isoeléctrico o IEF, de isoelectrofocusing). Se trata de una variante de

electroforesis en la que el gel (poliacrilamida) posee un gradiente de pH fijado en su estructura. Esto se
consigue incluyendo en su preparación moléculas ionizables con valores de pK diferentes. Como
consecuencia, al avanzar los componentes de la muestra a lo largo del gel se encuentran en entornos de
pH diferente, y eventualmente alcanzan una región en la cual el pH local es igual al punto isoeléctrico

2
de la molécula muestra y, en consecuencia, ésta detiene su avance. Se alcanza, pues, un equilibrio y se
consigue la separación de los componentes de la muestra de acuerdo con su punto isoeléctrico, que
además se puede medir, pues se conoce la geometría del gradiente de pH fijado al gel.

2.2. Electroforesis de campo pulsante (en gel de agarosa)

Las moléculas o fragmentos de DNA de longitud superior a 20-40 kb no se pueden resolver (separar)
empleando la electroforesis convencional en gel de agarosa. Esto se debe, en primer lugar, a la
dificultad de manejo de los geles preparados con las bajas concentraciones de agarosa que requerirían
(inferior al 0,4%). Además, las moléculas de DNA, que adoptan una conformación más o menos
globular, poseen un tamaño excesivamente grande para atravesar los poros del gel y no se separan en
función de su tamaño. Para solventar este problema se ha ideado una modificación de la técnica,
conocida como electroforesis de campo pulsante (o pulsado, pulsed-field gel electrophoresis, PFGE).
Se emplean geles de agarosa al 1%, pero se altera periódicamente la orientación del campo eléctrico
aplicado, activando alternativamente dos pares de electrodos. El frecuente cambio de dirección del
campo eléctrico consigue que las moléculas se desplieguen y avancen a través de los poros en
conformación extendida. A mayor tamaño, se reorientan con más dificultad, por lo que avanzan más
despacio.

Ilustración 2-Tomado de: biomodel.uah.es/técnicas/elfo/inicio.htm

Así se consigue separar fragmentos de DNA de hasta varias megabases, lo que supone un avance
significativo pero aún no sirve para estudiar los cromosomas humanos enteros (de 50 a 250 Mb cada
uno). Sí se han podido analizar así los cromosomas de levadura (figura derecha).

Las muestras han de contener el DNA sin fragmentar, por lo se requiere una preparación especial (al
purificar el DNA por los métodos habituales se fragmenta por debajo de 100 kb). Para obtener
preparaciones con los cromosomas intactos se mezclan las células con agarosa caliente (37°C) y se
vierte en pequeños moldes de unos milímetros, de forma que al solidificarse la agarosa (4°C) forma
bloques (“insertos”) que incluyen las células intactas. En éstos se realiza la lisis celular y la digestión

3
de las proteínas (p.ej., con EDTA, SDS y proteinasa K, que difunden a través de los poros del gel) sin
que se alteren las grandes moléculas de DNA. Tras una diálisis para eliminar los restos de la digestión,
se consigue un bloque de agarosa con el DNA intacto en su interior, y se deposita el bloque entero en
un pocillo del gel de electroforesis.

2.3. Electroforesis en gel de poliacrilamida (proteínas y ADN)

La electroforesis en geles de poliacrilamida es uno de los métodos más utilizados para la purificación,
análisis y caracterización de proteínas. La técnica permite separar moléculas cargadas y explota
diferencias en movilidad cuando se les somete a la acción de un campo eléctrico. La electroforesis de
proteínas se lleva a cabo sobre un soporte inerte, generalmente sobre geles de poliacrilamida (PAGE,
polyacrilamide gel electrophoresis) debido a su buena resolución y gran versatilidad. Además, poseen
una serie de ventajas tales como: ser químicamente inertes, estables en un amplio rango de pH,
temperatura y fuerza iónica, y fáciles de generar mediante la polimerización de acrilamida. En la
mayoría de los casos, el gel se dispone entre dos receptáculos independientes y separados que
contienen tampón de electroforesis y los electrodos positivo y negativo, de forma que la conexión
eléctrica entre ambos receptáculos sólo es posible a través del gel. Una vez que la electroforesis ha
tenido lugar, el gel de poliacrilamida se puede teñir, documentar o incluso se puede purificar la
molécula de interés cortando literalmente el fragmento del gel

2.3.1. Electroforesis bidimensional

Tras realizar una primera separación su resultado se somete a otra de diferente mecanismo en dirección
perpendicular. Generalmente la primera es un isoelectroenfoque en un gel cilíndrico estrecho que luego
se coloca como muestra para una SDS-PAGE. Se obtienen así mapas complejos de bandas, muy
característicos de cada muestra, cuya utilidad principal es la comparación con el obtenido de otra
muestra similar pero conocida.

Ilustración 3 - Tomado de: biomodel.uah.es/técnicas/elfo/inicio.htm

2.3.2. Electroforesis Desnaturalizante
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En la electroforesis desnaturalizante (SDS-PAGE), como su propio nombre indica, se utilizan agentes
desnaturalizantes de proteínas, como pueden ser: detergentes (p.e. SDS), caótropos (p.e. urea) y agentes
reductores (2- mercaptoetanol, DTT). Para la visualización de las proteínas se utilizan diferentes
métodos de tinción, siendo el más habitual el azul de coomassie. En la SDS-PAGE, la separación es
función del tamaño (masa molecular), lo que permite determinar el peso molecular de las proteínas.
Para ello se compara la movilidad electroforética (Rf) de la proteína de peso molecular desconocido
con el de proteínas de referencia de peso molecular conocido. En esta práctica, en la que se pretende
que el alumno comprenda el fundamento teórico de esta técnica y sus aplicaciones, se llevará a cabo la
separación de proteínas de hojas de A. thaliana mediante SDS-PAGE.

2.3.3. Electroforesis nativa

Una electroforesis nativa es la que somete a las proteínas a migración sin desnaturalización. En esta
situación las proteínas migran en función de su carga, de su tamaño y de su forma. Además se
mantienen en ciertos casos las interacciones entre subunidades y entre proteínas, separándose los
complejos. Los sistemas tampón (buffer) empleados en estos caso son: tris-glicina (rango de pH 8.3 a
9.5), tris-borato (rango de pH 7.0 a 8.5) y tris-acetato (rango de pH 7.2 a 8.5); en otras palabras las
proteínas mantienen su estructura tridimensional y las diferentes cadenas polipeptídicas pueden
permanecer unidas, separándose no sólo en función de su carga eléctrica, sino también según su tamaño
y forma.

2.4. Inmunoelectroforesis

Combina una separación electroforética con una detección por inmunodifusión. Es un examen de
laboratorio que mide las proteínas llamadas inmunoglobulinas en la sangre. Las inmunoglobulinas son
proteínas que funcionan como anticuerpos, que combaten la infección. Existen muchos tipos de
inmunoglobulinas que combaten diferentes tipos de infecciiones. Algunas inmunoglobulinas pueden
ser anormales y deberse a cáncer.

Las inmunoglobulinas también se pueden medir en la orina.

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3. ¿Cuáles son los componentes de una cámara electroforética?

En el aparato de electroforesis horizontal es esencialmente una caja con electrodos en cada extremo,
estos electrodos son de platino ya que tiene una conductividad eléctrica muy buena, debido a que los
electrodos de platino son caros y frágiles se debe tener cuidado cuando se manejan equipos de
electroforesis.

El medio de separación es un gel de agarosa, la agarosa es un polisacárido derivado del agar. Originario
de las algas, la agarosa es altamente purificada para eliminar todas las impurezas. Se extrae de la
misma alga que se utiliza para obtener el agar utilizado en microbiología y del utilizado en
alimentación. Es una sustancia no tóxica pero no debe ser ingerido.

El gel se realiza disolviendo la agarosa en un tampón llevado a punto de ebullición. La solución es

luego enfriada aproximadamente a 55ºC y se añade al molde para realizar el gel. Un peine con pocillos
es colocado en el gel para que forme los pocillos donde se sembrarán las muestras.

Una fuente de corriente es conectada al aparato de electroforesis y se genera una corriente eléctrica;
Las moléculas cargadas de la muestra entrarán en el gel a través de la pared del pocillo de siembra. Las
moléculas con una carga negativa migrarán hacia el electrodo positivo (ánodo) mientras que las
moléculas con una carga positiva migrarán al electrodo negativo (cátodo), estos son los componentes
de un aparato de electroforesis.

4. Cuántos tipos de geles existen? Explique las ventajas y desventajas

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Para que se de la electroforesis se necesita de un soporte (gel en la mayoría de casos). Aunque todas las
electroforesis responden a un mismo principio, las de zona pueden ser de distintos tipos en función del
soporte que se utilice. En todos los casos, la muestra se dispone inicialmente en una pequeña zona del
soporte, y posteriormente lo va recorriendo impulsado por el campo eléctrico.

Para que esta situación sea estable, tanto al comienzo como a lo largo del proceso de separación, es
necesario contrarrestar el efecto de la difusión y las posibles corrientes de convección. Para ello se
utilizan reticulados moleculares (el soporte de la electroforesis), que forman un entramado
tridimensional que impide o reduce dicha difusión y permite la entrada de agua en sus poros; el tamaño
de estos poros debe permitir el paso de moléculas voluminosas como son los ácidos nucleicos y las
proteínas. Además, el soporte debe ser inerte, es decir, no debe tener cargas que interfieran con la
migración de las moléculas de la muestra.

Los diferentes tipos de soportes se clasifican en dos grupos:

1. Soportes no restrictivos tipo I

Tamaño de poro no opone impedimento al paso de las moléculas. El agar es el ejemplo más
representativo y se obtiene a partir de algas marinas y esta formado por dos tipos de polisacáridos: la
agarosa y la agaropectina; ésta última posee varios grupos cargados (grupos carboxilo y sulfato), lo que
la hacen inadecuada como soporte electroforético por el efecto electroendosmótico que produce. La
agarosa (Fig. 8) se utiliza ampliamente sobre todo para la separación de ácidos nucleicos y para el
análisis de proteínas. Los diferentes tipos de agarosas se caracterizan por su punto de fusión (entre 35-
95°C), su resistencia física y el grado de electroendósmosis.

2. Soportes restrictivos tipo II

El tamaño de poro opone resistencia al paso de las moléculas. El ejemplo característico son los geles de
poliacrilamida, que no sólo evitan la convección y minimizan la difusión, sino que además participan
en el proceso de separación. Estos geles son medios porosos en los que el tamaño de poro es similar al
de las proteínas, de tal modo que existe un efecto de tamizado molecular y la separación electroforética
depende de la densidad de carga de las moléculas y de su tamaño

Algunos de los geles más utilizados para realizar la electroforesis son:

 Gel de almidón: una técnica fácil, barata y rápida.

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  Gell de proliacrimalida: el soporte más usado, de alta resolución pero sus componentes son
tóxicos.

 Gel de Agarosa: buena resolución, separación de moléculas r> 5-10mm (virus, bacterias,
lipoproteínas)

5.
6. ¿Cuál es el papel del bicarbonato en el experimento?

Cuando la electroforesis se realiza a partir de la extracción de una muestra de ADN en un material

orgánico como la saliva o alguna fruta, se utiliza de la siguiente manera: El bicarbonato de sodio junto
con la sal de mesa se agregan a la solución que contiene el material genético disperso y que no se
encuentra apreciable a simple vista en este momento, se hace con la finalidad que la solución pase a ser
hipertónica para que la célula “estalle” y así libere su material genético todo esto, para que, tenga una
mayor facilidad al momento de liberar su material genético al exterior y de esta forma hacerlo visible.

En el caso de nuestro experimento se utilizaron colorantes que simulan fragmentos de ADN haciendo
más vistoso el gel, en este caso, el bicarbonato constituye un papel importante en la conducción
eléctrica al momento que ocurre el desplazamiento de los colorantes, también controla el pH lo cual, es
importante para lograr la estabilidad de las moléculas orgánicas.

7. ¿Por qué en el experimento los pocillos no deben tocar el fondo?

Los pocillos deben de estar a 1 centímetro de tocar el fondo del recipiente ya que la gelatina es la que
permite que las bandas de los colorantes contenidos en los pocillos se extiendan hacia el polo negativo,
si los pocillos tocan el fondo las partículas tendrán más dificultad de migración.

8. ¿Cuál es la dirección en la que corre un amplicón a través de un gel y por qué?

Una vez que el gel está en la cámara, cada una de las muestras de ADN que queremos analizar se
transfiere cuidadosamente a uno de los pozos. Un pozo se reserva para el marcador de peso molecular,
un estándar de referencia que contiene fragmentos de ADN de longitudes conocidas.

8
A continuación, se aplica energía eléctrica a la cámara y empieza a fluir corriente a través del gel. Los
grupos fosfato de su esqueleto de azúcares-fosfato les otorgan una carga negativa a las moléculas de
ADN, por lo que comienzan a moverse a través de la matriz de gel hacia el polo positivo. Cuando el
sistema está encendido y pasa corriente por el gel, se dice que el gel está corriendo.

Conforme corre el gel, los fragmentos más cortos de ADN viajarán más rápido a través de los poros de
la matriz del gel que los fragmentos más grandes. Después de un rato que ha corrido el gel, los

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fragmentos más cortos de ADN estarán más cerca del extremo positivo del gel y los más largos se
mantendrán cerca de los pozos. Los fragmentos de ADN muy pequeños podrían correr hasta salirse del
gel si lo dejáramos corriendo por demasiado tiempo.

9. Documente cinco aplicaciones médicas de la electroforesis

La electroforesis es un método sumamente útil para el área del diagnóstico clínico, esto se debe a que
su técnica facilita la separación de moléculas basada en la migración diferencial de las mismas.

De modo que, este proceso se aplica en el área médica para:

 Diagnóstico de enfermedades genéticas

La secuencia completa de nuestro genoma representa un complejo sistema diversificado que siempre es
susceptible a cambios o alteraciones que dan origen a enfermedades o trastornos genéticos.

Hoy en día, la medicina moderna, con el fin de entender la complejidad de los millones de bases que
conforman el genoma humano, explicar las causas genéticas de las enfermedades y la susceptibilidad
de los individuos a padecerlas; recurre a la aplicación de pruebas diagnósticas genéticas, que emplean
el uso de un gran número de marcadores polimórficos, y que se complementan con la técnica de la
electroforesis, que, de forma automatizada, contribuye principalmente en dos áreas del diagnóstico
genético: una de ellas es a través de la secuenciación, y la otra es por medio del análisis de fragmentos
en los cuales es posible determinar la dosis génica de forma cuantitativa.

 Análisis de enfermedades hereditarias

La electroforesis permite el análisis de la expansión de repeticiones de nucleótidos que pueden estar

presentes en el genoma, constituyéndose, así, como la herramienta ideal para el diagnóstico de algunas
enfermedades hereditarias en las que la diferencia de una sola repetición puede jugar un papel
fundamental en el diagnóstico y transmisión de una enfermedad. Asimismo, determina el número de
repeticiones que identifican a los individuos normales y a los que portan una premutación o la mutación
específica de un gen.

Por otro lado, la electroforesis, permite la realización de pruebas prenatales diagnósticas

(duplicaciones, inserciones, deleciones, trisomías y monosomías), en las que resulta imprescindible
acortar el tiempo de los resultados, a través de la determinación de la dosis génica, manteniendo
constante la concentración de material genético.

 Estudio de enfermedades poligénicas

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En la actualidad, la mayoría de las enfermedades que se consideran como problemas de salud pública a
nivel mundial, están catalogadas como enfermedades multifactoriales y poligénicas; entre éstas
podemos mencionar a la mayoría de los cánceres, la diabetes mellitus, la hipertensión, la osteoporosis,
la degeneración discal intervertebral, la artritis, la obesidad, la demencia y algunas enfermedades
cardiovasculares y psiquiátricas.

En este tipo de enfermedades, numerosos genes están implicados en la presencia de la patología, por lo
que mutaciones o polimorfismos en estos genes pueden asociarse de manera directa o indirecta con la
misma enfermedad.

En el caso de las pruebas de hemato-oncología molecular, para la identificación de poblaciones

clonales de células B y T, que se usan para la detección de cáncer; la electroforesis, además de su alta
resolución, proporciona datos numéricos usando la altura y el área bajo la curva, facilitando con ello la
interpretación y proporcionando un tamaño específico de pares de bases para el rearreglo monoclonal.

Del mismo modo, la electroforesis ayuda también a la diferenciación de varios tipos de linfomas y
leucemias, por el uso de ensayos de translocación, como en el caso del linfoma de células B, los
linfomas foliculares y la leucemia mieloide crónica.

 Diagnóstico de enfermedades infecciosas

Generalmente, la identificación de muchos microorganismos, como bacterias, virus y hongos, es

complicada debido al riesgo de infección y a la dificultad de desarrollar el crecimiento de cultivos
permisibles. La respuesta a estas dificultades puede ser sustentada por medio del análisis a través de
métodos de biología molecular, principalmente, por el método de la electroforesis, en donde se
disminuye, significativamente, el riego biológico de exposición y se obtienen resultados fidedignos y
congruentes.

 Análisis clínico

Debido a la versatilidad de la técnica de electroforesis, diferentes biomoléculas se pueden monitorear

desde su identificación hasta su cuantificación en el análisis del laboratorio clínico.

La electroforesis permite la separación de proteínas con polímeros de diversos tamaños de partículas,

muy parecido a los geles de duodecil sulfato de sodio (SDS), logrando separaciones más rápidas y
reproducibles, y mejorando así los ensayos de immunoblot. Estas ventajas son consecuencia del
análisis de algunas proteínas por electroforesis, tales como las proteínas séricas, cuyos cambios

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presentan un interés clínico para la evaluación de pacientes con enfermedades linfoproliferativas, como
mieloma múltiple, enfermedad de Waldenström, leucemia, linfoma, amiloidosis y gammopatía de
significancia indeterminada.

La proteinuria, por ejemplo, es una de las anomalías más comunes observadas en el laboratorio clínico,
causada por una variedad de problemas patológicos que afectan al riñón y al tracto urinario.
Recientemente, se han logrado hacer pequeñas modificaciones en la técnica de electroforesis, con el fin
de realizar el diagnóstico de la proteinuria por medio de su aplicación, constituyendo así la herramienta
más útil, por su sensibilidad, especificidad y rapidez; además de que mediante amortiguadores de
elevada fuerza iónica y alto pH, se logra la disociación de las cadenas proteicas, de modo que su
empleo ha permitido realizar análisis no invasivos, determinando gran cantidad de marcadores
biológicos de interés clínico.

10. Explique por qué la electroforesis ha cobrado importancia en el estudio de los errores
congénitos del metabolismo

Diversas publicaciones de los últimos años muestran que la electroforesis capilar está siendo cada vez
más empleada en el campo de los errores congénitos del metabolismo, sustituyendo la mayoría de
veces las tecnologías habituales. Esto es debido a su gran versatilidad, los compuestos analizados son
de muy diversa naturaleza, por ejemplo, el análisis de ácidos orgánicos, ácido orótico y catecolaminas
en orina o perfil de ácidos grasos libres en plasma mediante electroforesis capilar con rayos
ultravioleta(CE-UV) o electroforesis capilar con detección de fluorescencia inducida por láser(CE-
LIF), mejorando en muchos casos los largos pretratamientos de las muestras necesarios en los
procedimientos habituales. También se han descrito diversos procedimientos para el análisis de
aminoácidos en plasma u orina mediante CE-LIF con un tiempo de análisis muy inferior al obtenido
mediante el método convencional de cromatografía de intercambio iónico.

A parte del gran número de publicaciones que describen procedimientos para el diagnóstico dirigido a
los errores congénitos, últimamente también se han desarrollado diversos procedimientos de
electroforesis capilar de espectrometría de masas(CE-MS) para el análisis de aminoácidos y
acilcarnitinas en sangre seca en los programas de diagnóstico precoz. La ventaja de los procedimientos
basados en electroforesis capilar es que permiten la resolución de isómeros no separables mediante el
análisis por tándem MS, por lo cual se utilizan como segunda línea. La electroforesis capilar,
principalmente acoplada a la MS, también es una herramienta cada vez más empleada en estudios
metabolómicos para la búsqueda de nuevos biomarcadores.

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En este sentido, queda patente que la electroforesis capilar, en sus diferentes modalidades, es una
técnica complementaria a las técnicas habituales de análisis en el diagnóstico de errores congénitos del
metabolismo, y que sus características frente a los procedimientos habituales pueden hacer mejorar el
proceso diagnóstico, tanto en tiempo de respuesta como en sensibilidad, identificando pacientes con
enfermedades que podrían pasar desapercibidas por procedimientos convencionales.

11. ¿Por qué la electroforesis de proteínas en orina se utiliza como una herramienta en el
diagnóstico de nefropatías?

En condiciones fisiológicas, la gran mayoría de las proteínas tienen un tamaño molecular demasiado
grande para atravesar los espacios entre los podocitos o son repelidas por las cargas negativas de los
proteoglucanos del epitelio durante el ultrafiltrado glomerular. De esta manera, son solo las proteínas
más pequeñas y electropositivas que logran atravesar la barrera, y son en su mayoría reabsorbidas a
nivel de los túbulos proximales.

En el caso de una nefropatía, la integridad de la barrera glomerular se ve comprometida permitiendo

que las proteínas sanguíneas de mayor tamaño pasen a los riñones y acaben en la orina en dónde
gracias a su mayor pesor molecular se pueden observar fácilmente en un examen de electroforesis. De
manera adicional, también nos ayuda a saber el tipo de proteínas que se encuentran siendo filtradas ya
que cada una presentará un pico diferente.

12. Por qué la electroforesis de la hemoglobina se emplea en el estudio de las hemoglobinopatías?

La hemoglobina es una proteína de los eritrocitos que transporta el oxígeno de los pulmones al resto del
cuerpo. Existen varios tipos:

Tipos normales de hemoglobina:

 Hemoglobina (Hgb) A: Este es el tipo más común de hemoglobina que se encuentra

normalmente en los adultos. Algunas enfermedades, como las formas graves de talasemia,
pueden hacer que los niveles de hemoglobina A sean bajos y que los niveles de hemoglobina F
sean altos.

 Hemoglobina (Hgb) B: Este tipo se encuentra normalmente en los fetos y en los bebés recién
nacidos. La hemoglobina F es sustituida por la hemoglobina A (hemoglobina adulta) poco
después del nacimiento; solo cantidades muy pequeñas de la hemoglobina F se generan después
del nacimiento. Algunas enfermedades, como la enfermedad drepanocítica, la anemia aplásica y
la leucemia, tienen tipos anormales de hemoglobina y cantidades más altas de hemoglobina F.
13
  Hemoglobina (Hgb) A2: Es un tipo normal de hemoglobina que se encuentra en pequeñas
cantidades en los adultos.

Tipos anormales de hemoglobinas:

Hay más de 350 tipos de hemoglobina anormal, pero los más comunes que se detectan con facilidad en
el examen de electroforesis son:

 Hemoglobina (Hgb) S: Este tipo se encuentra en personas con enfermedad drepanocítica y en

la cual se presenta anemia de células falciformes. La anemia de células falciformes es
un trastorno hereditario que hace que el cuerpo produzca glóbulos rojos rígidos en forma de
hoz. Los glóbulos rojos sanos son flexibles para poder circular fácilmente por los vasos
sanguíneos. En cambio, las células falciformes pueden atascarse en los vasos sanguíneos y
causar dolor crónico grave, infecciones y otras complicaciones

 Hemoglobina C: Este tipo de hemoglobina no transporta oxígeno correctamente.

 Hemoglobina E: Este tipo se encuentra principalmente en personas de ascendencia del sudeste

asiático. En general, las personas con Hgb E no tienen síntomas o tienen síntomas de anemia
leves.

La electroforesis de la hemoglobina es de gran importancia en el diagnóstico médico porque permite

identificar alteraciones estructurales y funcionales relacionadas con la síntesis de hemoglobina. A partir
de la identificación del tipo de hemoglobina, es posible confirmar si la persona posee alguna
enfermedad relacionada con la síntesis de hemoglobina (Hemoglobinopatías), como talasemia o anemia
falciforme, por ejemplo. Sin embargo, para la confirmación del diagnóstico, es necesaria la realización
de otros análisis hematológicos y bioquímicos, como el conteo sanguíneo completo y frotis de sangre.

La electroforesis usa una corriente eléctrica para separar los tipos normales y los tipos anormales de
hemoglobina en la sangre. Los tipos de hemoglobina tienen una carga eléctrica diferente y se mueven a
velocidades diferentes. Se mide la cantidad de cada tipo de hemoglobina en la corriente.

El tipo de hemoglobina se identifica por medio de la electroforesis en pH alcalino (alrededor de 8,0 -

9,0), la cual es una técnica basada en la tasa de migración de la molécula cuando es sometida a una
corriente eléctrica, pudiéndose visualizar bandas de acuerdo al tamaño de la molécula. De acuerdo con
el patrón de las bandas obtenidas, se realiza la comparación con el patrón normal, y de esta forma la
identificación de hemoglobinas anormales.

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Interpretación de resultados:

De acuerdo con el patrón de bandas presentado, es posible identificar el tipo de hemoglobina del
paciente. La hemoglobina A1 (HbA1) presenta mayor peso molecular, sin observarse tanta migración,
mientras que la HbA2 es más leve, permaneciendo en el fondo del gel. Este patrón de bandas es
interpretado en el laboratorio y enviado en forma de reporte para el médico y el paciente informando el
tipo de hemoglobina identificada.

La hemoglobina fetal (HbF) está presente en mayores concentraciones en el bebé, sin embargo, a
medida que se va creciendo, las concentraciones de HbF disminuyen, mientras que la HbA1 aumenta.

Sin embargo, algunas personas presentan cambios estructurales o funcionales relacionadas con la
síntesis de hemoglobina, dando como resultado hemoglobinas anormales o variantes, como por
ejemplo, HbS, a HbC, HbH y la Hb de Barts.

15
 Referencias
Academy, K. (s.f.). Obtenido de https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and-
regulation/biotechnology/a/gel-electrophoresis

Lemos, M (24 de julio de 2019). Electroforesis de hemoglobina: qué es, cómo se realiza y valores
normales. Tua Saúde. Recuperado de: https://www.tuasaude.com/es/electroforesis-de-
hemoglobina/

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