Debo solicitar

exámenes de
Laboratorio. Pero
para el diagnostico
de la enfermedad
que sospecho hay
diferentes técnicas:
ELISA, IFI,
Inmunocromatografía
¿Sera lo mismo
cualquiera?
SEROLOGIA

Diagnóstico:
Detección de Ag
Detección de AC
 SEROLOGIA

 Los Ac de un paciente proporcionan un

historial de sus infecciones.
 La serología permite:
 Identificar el agente responsable de la
infección
 Evaluar la evolución de una infección
 Determinar la naturaleza de la infección:
infección primaria frente a re infección, aguda
frente a crónica
 ANTIGENO Y ANTICUERPO
ANTÍGENO: Sustancia que induce una
respuesta inmune.
La respuesta inmune puede ser un anticuerpo
(Humoral) o la generación de células
sensibilizadas (Celular).

Los HAPTENOS son antígenos incompletos

que no producen una respuesta inmune por
sí solos, pero si reaccionan con anticuerpos

El DETERMINANTE ANTIGÉNICO es la
porción del antígeno que intervine en la
reacción con el anticuerpo

ANTICUERPO: proteína que se combina

específicamente con un antígeno
 Valencia = Número
de determinantes
antigénicos sobre la
superficie de un
antígeno

HAPTENO: moléculas que son

inmunógenas si se ligan a una molécula
portadora “carrier” de mayor tamaño
(proteínas).
DETERMINANTES ANTIGÉNICOS (Epitopes)
 EL ANTICUERPO COMO REACTIVO
Reactivos policlonales y Reactivos monoclonales

Título: cantidad de anticuerpo disponible para su reacción en

un método inmunológico específico. Es la máxima dilución de
anticuerpos que da una reacción detectable para un método
especifico y varia con el procedimiento inmunológico.
Afininad: fuerza de unión de un anticuerpo con el antígeno en
una reacción antígeno-anticuerpo.
Especificidad: designa la capacidad del anticuerpo para
restringir su reacción a un grupo específicamente definido de
moléculas
Reactividad cruzada: reacción residual entre el anticuerpo y
un antígeno no superfluo estrechamente relacionado.

EL ANTICUERPO COMO VARIABLE ANALÍTICA

 Título de un anticuerpo –
concentración relativa de
anticuerpo. Inverso de la
mayor dilución o menor
concentración del suero de un
paciente que mantiene una
actividad detectable.
 Anticuerpos policlonales,
preparaciones heterogéneas
de anticuerpos que pueden
reconocer numerosos epítopos
individuales en un único
antígeno
 Anticuerpos monoclonales
reconocen epítopos
individuales en un antígeno
 CONCEPTOS BASICOS PARA LA
INTERPRETACION DE RESULTADOS

 Las IgM normalmente reflejan una infección reciente.

 El aumento del título de anticuerpos indica una infección
reciente.
 A veces, simplemente con determinar un título elevado
podemos suponer que se ha producido una infección
reciente.
 Los títulos de IgG por sí solo suelen indicar una infección
pasada.
ESQUEMA DE LA RESPUESTA INMUNE
PRIMARIA Y SECUNDARIA
CONCEPTOS DE TITULO DE ANTICUERPOS Y
SEROCONVERSION

Título: Máxima dilución a la cual un suero continúa

siendo positivo en una prueba serológica determinada.

Seroconversión: Aumento del título de anticuerpos

cuatro veces o paso de negativo a positivo.
 DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO

 El fundamento es la especificidad de Ag-Ac

 Detecta anticuerpos formados en el
paciente luego de una infección
 Dinámica de producción de Anticuerpos
– 1 semana IgM, IgA, Maximo 3 a 5 semanas
– 2 semana se forman IgG, máximo 6 a 12
semanas y desaparecen con los años
Conceptos básicos del diagnóstico indirecto

– Distinción entre propio y extraño

– Especificidad. Antígenos extraños inducen
anticuerpos. La persistencia de estos varia en
el tiempo y ello depende de muchos factores:
Estímulo inicial, reinfecciones subclínicas
repetidas etc.;
Encontrar anticuerpos frente a un determinado
antígeno nos hará suponer de forma indirecta
que el organismo tiene o ha tenido contacto
con él o con antígenos de su procedencia.
– Memoria. permite que el sistema inmune
recuerde haber tenido contacto previo con un
antígeno y responda frente a él de forma
anamnésica.
 Utilidad de los estudios serológicos
Los estudios serológicos (detección de anticuerpos) pueden
emplearse fundamentalmente para:
1.- Estudios de diagnóstico
Útiles en infecciones víricas de aislamiento difícil o no
víricas pero de patógeno difícilmente cultivable o no
cultivable.

2.- Estudios epidemiológicos

La demostración del estado inmunitario de una población
con respecto a uno o varios patógenos.
El estudio retrospectivo de los anticuerpos presentes
indicará la prevalencia de microorganismo/s en dicha
población y dependiendo de su distribución etaria la
conveniencia o no de establecer campañas de vacunación.
 Elección de una prueba serológica:
sensibilidad y especificidad
 Una prueba serológica se evalúa, por los parámetros de
sensibilidad , especificidad y valor predictivo. Del
conocimiento de estos tres valores se deducirá su
aplicación o no en determinadas circunstancias y como
deberá interpretarse su resultado ya sea positivo o
negativo.

 La medida de la sensibilidad se realiza aplicando la

prueba en pacientes que sabemos que están en la situación
que queremos diagnosticar. Cuantos más resultados
positivos produzca en este grupo de enfermos mas
sensibilidad tendrá la prueba y menos resultados falsos
negativos (FN) obtendremos.

Sensibilidad = porcentaje de verdaderos positivos (VP) que

son detectados en individuos con esa enfermedad y esa
técnica.
 La especificidad se mide realizando la prueba en grupos
de personas que no padecen la enfermedad que queremos
diagnosticar con ella.

Especificidad = porcentaje de verdaderos negativos que

serán detectados en pacientes sanos con esa prueba


 Las pruebas apropiadas producen, en este grupo gran

cantidad de resultados negativos y muy escasos falsos
positivos (FP). Existen muchas pruebas serológicas con
especificidades casi del 100%.
Valor predictivo
 La utilidad de una prueba es la resultante de los valores
predictivos (VP), positivo (VPP) o negativo (VPN), obtenidos
al emplearla sobre una población general en la que existen
individuos sanos e infectados por el agente frente al que
queremos investigar los anticuerpos.
 Los valores predictivos (positivo y negativo) miden la
eficacia real de una prueba diagnóstica

 Conocer estos valores es muy importante ya que ellos

serán los que nos indiquen la conveniencia de emplearlo
para confirmar una enfermedad o para descartarla.

 El VPP de un prueba es el porcentaje de resultados

verdaderamente positivos (VP) obtenidos con ella
cuando la aplicamos a una población general.

 El VPN es el porcentaje de pruebas verdaderamente

negativas (VN) aplicadas a la misma población.
 Análisis Serológicos
• Inmunodifusión
• Fijación de Complemento
• Inhibición de la hemoaglutinación *
• Neutralización *
• Inmunofluorescencia directa e indirecta
• Aglutinación con látex
• Enzimoinmunoanálisis in situ (E1A)
• Enzimo inmunoanálisis por absorción (ELISA)
• Radioinmunoanálisis (RIA)

*Para la detección de anticuerpos o determinación del serotipo del virus

Separación de suero

SUERO
 Pruebas de Inmunodifusión
Se utilizan con antígenos solubles a los que se permite
difundir en una matriz semisólida frente a los anticuerpos.
La unión antígeno – anticuerpo precipita de forma visible y
permite establecer la presencia de anticuerpos específico-
CURVA DE PRECIPITACION
INMUNODIFUSION
INMUNOELECTROFORESIS
 PRUEBAS DE AGLUTINACION

Se utilizan con antígenos

particulados tales como una
suspensión bacteriana.

Detectan preferentemente IgM

Prueba sensible pero de menor

especificidad
Determinación de grupos
sanguíneos
HEMOAGLUTINACION
 Pruebas de Hemoaglutinación e
inhibición de la hemoaglutinación
Se basan en la capacidad de algunos patógenos (ej: virus de la
influenza) para causar la aglutinación de eritrocitos. Pueden
utilizase para detectar el patógenos ( pruebas de
hemaglutinación) o los anticuerpos dirigidos contra la
hemaglutininas del microorganismo ( inhibición de la
hemaglutinación). Suelen ser pruebas especificas y sensibles
 Pruebas de Neutralización

Para la detección de anticuerpos capaces de bloquear los epitopos

críticos del patógeno. Con interpretación biológica correlacionada con
la protección.
La pruebas de neutralización permiten medir los niveles de inmunidad
protectora frente a un patógeno.
Primer paso: incubación del patógeno con el suero
Segundo Paso: consiste en la inoculación del patógeno en un cultivo
celular o en un animal. Si el suero contenía anticuerpos neutralizantes,
se bloquea
i
la capacidad infectiva del patógeno y por tanto no produce
la infección de animal o del cultivo. Este mismo sistema puede
utilizarse con toxinas o bacterias.
 Inmunofluorescencia
Pueden usarse para detectar anticuerpos o antígenos. En ambos
casos la reacción finaliza mediante la adición de un anticuerpo
conjugado a una sustancia fluorescente (fluoresceína)

+ +

- -
RADIOINMUNOENSAYO
 ELISA
Se basan en una reacción antígeno anticuerpo que tiene lugar sobre
un soporte solido (microplaca de plástico) a la que se ha adsorbido un
antígeno o un anticuerpo.
Tiene diferentes modalidades pero e todas ellas la reacción final se
revela mediante una enzima que modifica un substrato que adquiere
color. Son pruebas sensible y especificas
ELISA
 FIJACION DEL COMPLEMENTO

Se basan en la capacidad del complemento para unirse a los

complejos antígeno – anticuerpo. La prueba incluye la adición de
eritrocitos sensibilizados con una hemolisina. Si el suero posee
anticuerpos específicos, se fija el complemento y no pude unirse a la
hemolisina para lisar los eritrocitos.
Se ejecuta en dos fases
1ª reacción antígeno - anticuerpo en un medio liquido
2ª la adición del complemento , una hemolisina dependiente de
complemento y eritrocitos. Si el suero analizado contenía anticuerpos
contra el antígeno se produce la reacción Ag-Ac, el complemento
queda fijado y no puede activar la hemolisis de los glóbulos rojos
FIJACION DEL COMPLEMENTO
Tengo un problema. Debo hacer un estudio de
tamizaje de la infección X en los estudiantes de
medicina de la UMSS. Necesito averiguar cuantos
estudiantes han sido infectados de un total de 800.
Para ello debo detectar anticuerpos anti X.
Debo elegir uno de los métodos disponibles para
esta infección y tengo los siguientes datos:
ELISA: sensibilidad de 98 %, especificidad del 80 %.
HAI: sensibilidad 60%, especificidad 75%,
Inmunofluorescenica: sensibilidad 85, especificidad 99%.

¿Me ayudan?
¿Cuál escogerían y porque?