Pruebas Diagnósticas en Inmunología

Conjunto de técnicas, basadas

en la reacción antígeno -
anticuerpo, que se aplican en
el estudio del proceso
infeccioso. Su utilidad es
detectar antígenos o
anticuerpos en muestras
biológicas para saber si un
paciente está infectado,  ha
respondido
inmunológicamente a una
infección o a una vacuna.
Desde el punto de vista de aquello que investigan, se dividen en dos
grandes categorías, pruebas directas y pruebas indirectas.
PRUEBAS DIRECTAS
Son aquellas que basadas en el principio de la reacción antígeno
anticuerpo investigan la presencia del antígeno. En el caso de la
enfermedad infecciosa equivale a decir que investigan la presencia del
agente etiológico o, uno de sus componentes.

PRUEBAS INDIRECTAS
Son aquellas que basadas en la reacción antígeno anticuerpo,
investigan no ya, el agente en sí, sino la huella que dejó éste al
pasar por su huésped en términos de una respuesta inmune puesta
en evidencia por el hallazgo de anticuerpos específicos contra el
agente o alguno de sus componentes y que, indirectamente
permite suponer que el agente en cuestión estuvo presente en el
huésped en algún momento.
Las pruebas inmunologicas de acuerdo con el procedimiento
que utilicen para evidenciar la reacción antígeno anticuerpo se
dividen también en dos grandes grupos: primarias y
secundarias.

PRUEBAS SECUNDARIAS
• Son aquellas en las cuales la reacción
antígeno-anticuerpo da lugar a una
manifestación visible lo cual permite una
lectura visual macroscópica.
• Su realización usualmente es simple.
• Este tipo de pruebas incluyen la precipitación y
la aglutinación.
Pruebas de precipitación

Estas pruebas miden la cantidad de antígeno o

de anticuerpo en los líquidos corporales a partir
del grado de precipitación visible de complejos
de antígeno-anticuerpo dentro de un gel de
agarosa o en solución.
En general, una muestra de sangre se mezcla
con un antígeno de prueba para detectar los
anticuerpos del paciente, Se usa cuando se
sospecha una infección micótica o una
meningitis
• Se realizan en medios líquidos y en medios
semisólidos.
• Debe existir equivalencia entre ambos
reactivos: antigeno y anticuerpo.
• En medios líquidos se mezclan ambos
componentes, dejando reposar y se formara un
anillo en la interfase de los líquidos.
• Los medios semisólidos se usan para
inmunodifusion o inmunoeletroforesis.
• Se basa en que la mayoría de las proteínas se
difunden a través de un gel.
VENTAJAS
 Existen varias pruebas.
 Se observan fácilmente.
 Muy útiles.
 No se requiere equipo
costoso.
 Pueden ser cuali o
cuantitativas
DESVENTAJAS
 Poseen baja sensibilidad.
PRUEBAS DE AGLUTINACION

• Método rápido y sencillo usado ampliamente para

identificar: virus, bacterias, grupos sanguíneos.
• Cuando se usan antígenos conocidos se detectan
anticuerpos específicos.
• Los antígenos que se utilizan se encuentran en
suspensión.
• Los anticuerpos establecen uniones cruzadas con los
antígenos, lo que se visualiza como ¨grumos¨.
• Es necesario que exista una concentración salina
para favorecer la reacción.
 VENTAJAS
• Muy utilizadas.
• Sencillas.
• Rápidas.
• Cuali o cuantitativas
• Económicas

ASO
LATEX
PCR
REACCION DE WIDAL
PRUEBAS PRIMARIAS
• Son aquellas en las cuales la reacción antígeno
anticuerpo no da lugar a ninguna
manifestación visible, requiriéndose, para
evidenciar que la reacción ha ocurrido,
procedimientos técnicos complejos y en
ocasiones equipos sofisticados y costosos.
• Las pruebas primarias pueden ser directas o
indirectas
• De gran sensibilidad y especificidad, que las
acercan al ideal de una prueba diagnóstica.
Dentro de esta categoría tenemos:
1- Fijación de complemento
2- Inmunofluorescencia
3- Radioinmunoensayo
4- Pruebas Inmunoenzimáticas
5- Inmunoelectrotransferencia
6-Inmunocromatografia
Fijación del complemento
El complemento posee la capacidad de unirse a los
complejos antígeno anticuerpo(fijación). Esta capacidad
es aprovechada en la prueba de fijación del complemento.
Metodológicamente, la prueba se desarrolla en dos fases,
una primera que es una reacción antígeno anticuerpo en
un medio líquido y una segunda consistente en la adición
de complemento, una hemolisina dependiente del
complemento y eritrocitos.
Si se ha producido reacción antígeno-anticuerpo,es decir, si el suero analizado
contenía anticuerpos frente al antígeno, el complemento queda fijado y no
puede activar la hemólisis de los glóbulos rojos, Si los eritrocitos se lisan, está
presente el complemento libre lo que indica que no ha ocurrido la reacción
antígeno-anticuerpo en la etapa 1. 
Pruebas de inmunofluorescencia
• Las pruebas de inmunofluorescencia pueden
utilizarse para detectar anticuerpos o para detectar
la presencia de un patógeno.
• La técnica se basa en una reacción
antígeno-anticuerpo que se revela con la
ayuda de un anticuerpo marcado con una
sustancia fluorescente.
• Estas pruebas son muy sensible
 RADIOINMUNOENSAYO (RIA)
El RIA se basa en la competencia existente entre el anticuerpo, un
antígeno no marcado y una cantidad conocida del antígeno
marcado(Isotopo radioactivo) para formar los complejos AgAc o Ag*Ac.
Con estos tres componentes (Ag, Ag* y Ac) puede realizarse el ensayo en
el que manteniendo constante la cantidad de Ag* y Ac
se observará que a mayor cantidad de Ag menos Ag* queda unido a la
cantidad fija de Ac (y por tanto menos radiactividad), lo que permitirá
relacionar la radiactividad con la concentración de Ag.
1. Se obtienen anticuerpos específicos, para ello se inyectan en un animal
pequeñas cantidades en varias dosis del antígeno muy purificado. El
animal generará anticuerpos que podrán ser recogidos del plasma
sanguíneo.
2. Se marca el antígeno radiactivamente. El antígeno marcado debe seguir
siendo reconocible por el anticuerpo.
3. Se añaden Ac a una placa de titulación y quedan unidos al soporte sólido,
tras lo que se agrega el Ag* en cantidad conocida y el Ag de la muestra
problema.
4. Se elimina el antígeno no unido por decantación y lavado, y se determina la
cantidad de marcaje unido
ELISA
Las pruebas inmunoenzimáticas se basan:
• En una reacción antígeno anticuerpo que tiene lugar sobre un
soporte sólido (normalmente una microplaca de plástico) a la que se
ha adsorbido un antígeno o un anticuerpo.
• La prueba puede desarrollarse en diferentes modalidades pero en
todas ellas la reacción final se revela mediante un enzima que
modifica un substrato que adquiere color.
• Se trata de pruebas muy sensibles y específicas 
USO

Hormonas

Marcadores
tumorales
INMUNOCROMATOGRAFIA

• La inmunocromatografía es un tipo de prueba de

interacción primaria que se utiliza en ensayos sencillos y
de lectura rápida.
• En esta prueba uno de los componentes está marcado
con nanopartículas coloreadas, por ejemplo con metales
pesados (oro o selenio coloidal, generando bandas de
color rosa o azul respectivamente). Otros marcadores
pueden ser partículas de látex coloreadas o de carbón.
• La reacción se lleva a cabo sobre una tira de un material
poroso (por ejemplo, nitrocelulosa).
En las tiras reactivas se pueden
distinguir 5 zonas:
1. Zona de siembra de la
muestra
2. Zona del conjugado
3. Zona de detección o Zona
Test
4. Zona de control
5. Región absorbente
GRACIAS!!!