Semana 13

La Serología es el estudio que permite comprobar la presencia de anticuerpos en la

sangre.
Las pruebas serológicas están basadas en la reacción antígeno-anticuerpo.

El examen serológico tiene como fin conocer la exposición o presencia previa de un

microorganismo patógeno en particular y a partir de ahí, conocer la capacidad de respuesta
del individuo a tal infección.

CALIDAD DE LOS SUEROS

 Los sueros para serología deben ser obtenidos a partir de una muestra de sangre
tomada con todas las normas de asepsia y antisepsia
 Únicamente los sueros límpidos, transparentes y no hemolizados, deben ser
utilizados para la realización de las pruebas serológicas.
 Para conservar los sueros lo ideal es repartir las muestras en alícuotas de 0.5mL,
identificar correctamente y congelar a 20C, dejando una alícuota a 4C para realizar
las pruebas.
 Nunca se debe congelar y descongelar y volver a congelar porque ese procedimiento
altera la reactividad de los sueros.

CLASES DE PRUEBAS SEROLÓGICAS

Desde el punto de vista de aquello que investigan, se dividen en dos grandes categorías,
pruebas directas y pruebas indirectas.

PRUEBAS DIRECTAS
Son aquellas que basadas en el principio de la reacción antígeno anticuerpo investigan la
presencia del antígeno.
En el caso de la enfermedad infecciosa equivale a decir que investigan la presencia del
agente etiológico,uno de suscomponentes.

PRUEBAS INDIRECTAS
Son aquellas que basadas en la reacción antígeno anticuerpo, investigan no ya, el agente
ensí, sino la huella que dejó éste al pasar por su huésped en términos de una respuesta
inmune puesta en evidencia por el hallazgo de anticuerpos específicos contra el agente o
alguno de sus componentes y que, indirectamente permite suponer que el agente en
cuestión estuvo presente en el huésped en algún momento.

Las pruebas serológicas de acuerdo con el procedimiento que utilicen para evidenciar la
reacción antígeno anticuerpo se dividen también en dos grandes grupos:
primarias y secundarias.

Pruebas de precipitación
La característica fundamental de ésta, es que el antígeno está siempre en dilución en una
solución tampón la cual generalmente es solución salina.

Hay muchos tipos de pruebas de precipitación (p.ej., doble difusión de Ouchterlony,

contrainmunoelectroforesis), pero sus aplicaciones son limitadas.

En general, una muestra de sangre se mezcla con un antígeno de prueba para detectar los
anticuerpos del paciente, en general cuando se sospecha una infección micótica o una
meningitis piógena.

Para obtener un resultado positivo, se requiere una gran cantidad de anticuerpo o de

antígeno, y por ello la sensibilidad es baja.

Los anticuerpos o antígenos conocidos son unidos a partículas de látex, con el objeto de
facilitar la visualización de la prueba. Se pueden emplear otras partículas insolubles como
el polietileno o la bentonita

El antígeno siempre está en suspensión

1-Antígeno en suspensión
2-Sistema buffer
3-Dilución de anticuerpos

Prueba de aglutinación

En este proceso, el anticuerpo es conocido como aglutinina y el antígeno como el

aglutinógeno

PRUEBAS PRIMARIAS

Son aquellas en las cuales la reacción antígeno anticuerpo no da lugar a ninguna

manifestación visible, requiriéndose, para evidenciar que la reacción ha ocurrido,
procedimientos técnicos complejos y en ocasiones equipos sofisticados y costosos.
Las pruebas primarias pueden ser directas o indirectas y de gran sensibilidad y
especificidad, que las acercan al ideal de una prueba diagnóstica.

Dentro de esta categoría tenemos:

1-Fijación de complemento
2-Inmunofluorescencia
3-Radioinmunoensayo
4-Pruebas Inmunoenzimáticas
5-Inmunoelectrotransferencia
6-Inmunocromatografía
Fijación de complemento
Esta prueba mide la cantidad de anticuerpos consumidores de complemento(o que lo fijan)
Se usa para el diagnóstico de algunas infecciones virales o micóticas

El grado de fijación del complemento indica la cantidad relativa de anticuerpos en la

muestra.
La prueba permite medir los títulos de anticuerpos IgM e IgG, o puede modificarse para
detectar determinados antígenos.

Enzimoinmunoensayos
Estas pruebas utilizan anticuerpos unidos a enzimas para detectar antígenos, y para detectar
y cuantificar anticuerpos.
Entre ellas, se encuentran el enzimoinmunoanálisis (EIA) y el enzimoinmunoanálisis de
adsorción (ELISA).

Como la sensibilidad de la mayoría de los inmuno ensayos es elevada, suele utilizárselos

con fines de rastreo o cribado.
Pueden determinar se los títulos mediante la dilución seriada de las muestras, como en los
ensayos de aglutinación.
Las sensibilidad es de estas pruebas, aun que suelen ser bastante elevadas, pueden variar de
acuerdo con la edad del paciente, el serotipo del microorganismo o el estadio clínico de la
enfermedad.

1.-ELISA directo
El ELISA directo es el ensayo ELISA más simple y rápido de todos, donde un anticuerpo
primario marcado con una enzima se unirá directamente al antígeno de interés permitiendo
la detección y/o cuantificación del mismo.
El procedimiento simplificado sería el siguiente:
1ºEl antígeno se inmoviliza sobre una placa
2ºSe añade un anticuerpo primario marcado con una enzima que se unirá al antígeno de
interés
3ºSe añade el sustrato que al reaccionar con la enzima proporcionará una señal visible que
permitirá la detección y/o cuantificación del antígeno de interés.

2.-ELISA indirecto
Es un ensayo parecido al ELISA directo pero en dos pasos, lo que permite amplificar la
señal obtenida. En este caso se utilizan dos anticuerpos, uno primario y otro secundario, y
es este último el que irá conjugado a una enzima.
El procedimiento simplificado sería el siguiente:
1ºEl antígeno se inmoviliza sobre una placa
2ºSe añade un anticuerpo primario sin marcar que se une al antígeno de interés
3ºSe añade un anticuerpo secundario marcado con una enzima que se unirá al anticuerpo
primario
4ºSe añade el sustrato que al reaccionar con la enzima proporcionará una señal visible que
permitirá la detección y/o cuantificación del antígeno de interés.

-ELISA tipo sándwich

En el ELISA tipo sándwich el antígeno queda inmovilizado entre dos anticuerpos, uno de
captura y otro de detección también conocidos como pares de anticuerpos, que se unirán a
dos epítopos distintos de un mismo antígeno.
El procedimiento simplificado sería el siguiente:
1º El anticuerpo de capturase inmoviliza sobre la placa
2ºSe añade la muestra que contiene el antígeno de interés que se unirá al anticuerpo de
captura
3ºSe añade el anticuerpo de detección que se unirá al antígeno unido a su vez al
anticuerpo de captura.
4ºEn caso de que el anticuerpo de detección vaya conjugado a una enzima, procederemos
directamente con el 5º paso. En caso contrario (que es lo más habitual en los ELISA tipo
sándwich), será necesario añadir un anticuerpo secundario marcado con una enzima que
se unirá al anticuerpo de detección.
5ºSe añade el sustrato que al reaccionar con la enzima proporcionará una señal visible que
permitirá la detección y/o cuantificación del antígeno de interés

-ELISA competitivo
El ELISA competitivo es una variante más compleja de la técnica ELISA, también
conocido como ELISA de inhibición debido al uso de un antígeno de referencia que
competirá con el antígeno de la muestra por unirse al anticuerpo primario. Se utiliza
generalmente para detectar y/o cuantificar antígenos presentes en muy bajas cantidades.
El procedimiento simplificado sería el siguiente:
1ºEl antígeno de referencia se inmoviliza sobre la placa.
2ºPor otro lado, un exceso de anticuerpo primario sin marcar se incuba con la muestra que
contiene el antígeno de interés, dando lugar a la formación de complejos antígeno-
anticuerpo
3ºSe añade la mezcla antígeno-anticuerpo a la placa, donde el antígeno de referencia
competirá con el antígeno de la muestra por unirse al anticuerpo
4ºSe lava la placa eliminando los complejos antígeno-anticuerpo solubles
5ºSe añade a la placa un anticuerpo secundario marcado con una enzima que se unirá al
anticuerpo primario anclado al antígeno de referencia.
6ºSe añade el sustrato que al reaccionar con la enzima proporcionará una señal visible que
será inversamente proporcional a la cantidad de antígeno de interés presente en la muestra.

Inmunofluorescencia

Es una técnica donde las moléculas de anticuerpos son convertidos en sustancias

fluorescentes, uniéndoles químicamente a compuestos orgánicos fluorescentes tales como
isotio-cianato de fluorescencia o rodamina B Esto no altera la especificidad del
anticuerpo pero hace posible su detección cuando está unido a células o tejidos usando un
microscopio para fluorescencia.

TIPOS
PRIMARIA O (IFD): permite la detección de antígenos en un paso. Utiliza anticuerpos
conjugados a isotio cianato de fluoresceína. La reacción positiva en forma de fluorescencia
verde manzana puede verse con la ayuda de un microscopio de fluorescencia.
SECUNDARIAO (IFI): consta de dos etapas y permite la detección de anticuerpos
circulantes.
Prueba de inmunotransferencia
Esta prueba detecta anticuerpos contra el microorganismo en una muestra del paciente (que
puede ser suero u otro líquido corporal) mediante su reacción con antígenos blanco (p.ej.,
componentes virales) que se hallan inmovilizados en una membrana mediante electro
transferencia.