Laboratorio de Biología Molecular Comunidad académica

comprometida
con el desarrollo humano de la
sociedad.

Pipeteo y pesado

Becerra Rodriguez Yolotzi1, Chaveste Mejía Valeria1, Figueroa Ocampo Elissa1, Reyes Duarte
Dolores2,*

1
Licenciatura en Ingeniería Biológica, División de Ciencias Naturales e Ingeniería Universidad
Autónoma Metropolitana-Cuajimalpa, Avenida Vasco de Quiroga 4871, Col. Santa Fe Cuajimalpa.
Alcaldía Cuajimalpa de Morelos, C.P. 05348, Ciudad de México.

2
Departamento de Procesos y Tecnología, División de Ciencias Naturales e Ingeniería Universidad
Autónoma Metropolitana-Cuajimalpa, Avenida Vasco de Quiroga 4871, Col. Santa Fe Cuajimalpa.
Alcaldía Cuajimalpa de Morelos, C.P. 05348, Ciudad de México. *dreyes@cua.uam.mx

Palabras clave: (escribir 5 palabras clave separadas por coma)

Introducción (1 página)
Las unidades de medición son de gran importancia para entender los resultados de los
experimentos y expresarlos correctamente.La medición de la actividad promotora a través
de muchos laboratorios, podría mejorar la investigación en el diseño,producción
y reutilización de piezas normalizadas biológica. En los laboratorios de Biología
molecular se utilizan volúmenes muy pequeños de ADN y cantidades pequeñas
de los reactivos, por lo cual las unidades de medidas más frecuentes de medición de
líquidos son el mililitro y el microlitro y en lo que respecta al peso se utilizan el gramo,
miligramo y microgramo. En todos los casos se refiere a entidades microscópicas y
submicroscópicas.Las proteínas se pueden medir según el número de aminoácidos que
contenga y por su masa molecular total, se presenta en unidades de daltons o la unidad
derivada kilodalton (kDa).
Algunas unidades de volumen y peso para los ácidos nucleicos son: La unidad de referencia
de 1000 nucleótidos de una cadena sencilla de ARN oADN se mide en Kilobase, que
corresponde aproximadamente con3300kD.Ahora si un Dalton o una unidad de
masa atómica equivale a undoceavo de masa de un átomo del nucleído 12C.La
concentración de ssDNA de alto peso molecular puede expresarse comopmol/µl, es decir
en unidades de picomolas por microlitro .Por medio delpromedio del peso
molecular de un nucleótido en la molécula de DNA. quepara ssDNA es 330 daltons.
El cual es utilizado como peso molecularexpresado cuantitativamente como g/mol).
El micromol (µmol): Es una unidad de cantidad de sustancia igual a
lamillonésima parte de un mol (10-6 de mol). El microlitro (μl) es la unidad de volumen
equivalente a la millonésima parte deun litro. También equivale a 1 milímetro cúbico.
Esta unidad es tambiénutilizados al calcular ácidos nucleicos.Unidad de volumen
equivalente a la milmillonésima parte de un litro. Serepresenta con el símbolo nl y
es igual a 10-9 lUn femtolitro es una millonésima de una milmillonésima de litro,
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es decir,una unidad de medida de volumen igual a 10-15 litro y se abrevia fL o

fl.Equivale al volumen de 1 μm3. el microgramo (µg) es la unidad de masa del
SI que equivale lamilmillonésima parte de un kilogramo y también equivale a la
millonésima de ungramo. El microgramo se emplea en los análisis químicos cuantitativos
paramedir la pequeñísima cantidad de componentes que tiene una
pequeñamuestra

Objetivos

Revisar prácticamente y teóricamente las técnicas de pipeteo y pesado en el laboratorio.

Materiales y métodos

- Balanza analítica

- Pipetas de vidrio (1 y 5 ml)

- Pipeta volumétrica

- Juego de micropipetas y puntas correspondientes

- Vasos de precipitado (100-250 ml)

- Agua

- Azúcar glass C12H22O11

- Matraz aforado de 100 mL

- 6 Tubos de ensaye

Metodología

1. Preparar 100 mL de una solución 0.1 M de C12H22O11

2. Hacer 7 diluciones de 1:2, 1:4, 1:5, 1:7, 1:10, 1:20, 1:50

Cálculos para preparación de soluciones y de las diluciones.

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Dilución Vol. Solución Vol. Volumen Concentraci Concentración Concentración

sacarosa (0.1M) Agua final (mL) ón (g/L) (M) en %
o NaCl (1M) (1g/100mL)

1:2 2.5 ml 2.5ml 5 ml 17 0.05 M 1.7 %

1:4 1.25ml 3.75ml 5 ml 8.5 0.025 M 0.85%

1:5 1ml 4 ml 5 ml 6.8 0.02 M 0.68 %

1:7 0.71 4ml 4.28ml 5 ml 4.8552 0.01428 M 0.47 %

1:10 0.5ml 4.5ml 5 ml 3.4 0.01 M 0.34 %

1:20 0.25ml 4.75ml 5 ml 1.7 0.005 M 0.17 %

1:50 0.1ml 4.9ml 5 ml 0.68 0.002 M 0.068 %

C1V1=C2V2 % = X g en 100mL

Stock sacarosa: 3.4g/100mL - 34g/L - 0.1M à 3.4%

Vol. Final = 5mL

C1V1=C2V2

C1= 0.1M 34g/L

V1 =2.5mL 2.5mL

C2=? 0.05M 17 g/L

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V2= 5mL 5 mL

g/L

---------------------------- %

Incluyan la tabla y la foto de todas sus diluciones.

Resultados y discusión

Conclusiones

Referencias

Cuestionario

Incluyan las siguientes preguntas y su respectiva respuesta, con sus cálculos:

1. Si vas a digerir (degradar) 1μg de un fragmento de DNA con una enzima de

restricción que se encuentra a una concentración de 4 U/μL, y se requiere 1 U (una
unidad) de enzima por cada μg de DNA, ¿qué volumen de enzima necesitas agregar?
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2. Vas a hacer una reacción de restricción en un volumen de 20 μL. Tu buffer de

reacción es 10X, quiere decir que está concentrado 10 veces. ¿Cuánto buffer necesitas
añadir realmente a tu reacción para tener una concentración final en tu mezcla de
reacción de 1X?

3. Realizarás una reacción de restricción con los siguientes componentes:

- ¿? μL de agua

- 2 μL de plásmido

- 2 μL de 10X de buffer de restricción

- 1 μL de enzima de restricción

- 20 μL de volumen total

¿Cuánta agua tienes que añadir a la mezcla?

Recomendaciones

Anexos