BIOLOGÍA VEGETAL (Morfología)

SEMANA 1
PRÁCTICA 1.2: TÉCNICAS HISTOLÓGICAS VEGETALES
I. INTRODUCCIÓN

Como ya sabemos si deseamos estudiar o analizar una célula o conjunto de ellas,

debemos llegara a conocer su estructura morfológica microscópica y poder
deducir, en lo más posible las funciones que tiene , para ello se examinaría a
través de los instrumentos que amplían imágenes de los objetos observados
(microscopios); pero este procedimiento no es posible de hacer porque ; al
intentar hacerlo se presentan dificultades en la manipulación de los
especímenes y el inicio de los procesos propios de desarreglo molecular
(autólisis) y celular que suelen presentarse después que las células y los tejidos
abandonan su hábitat natural. Por lo tanto, es necesario utilizar una serie de
procedimientos y artificios que nos permitan describir, comprender y analizar la
estructura microscópica de las células, tejidos y órganos.
Por ello los materiales vegetales extraídos deben ser sometidos a diversos
procedimientos y técnicas histológicas, hasta obtener las condiciones para
observar al microscopio óptico o electrónico. Pero porque sucede ello sucede a
que la composición de los tejidos vegetales, por lo general, no tienen contraste
ni colores que permitan diferenciar sus estructuras mediante la observación
directa en el microscopio. Por esa razón , todas las muestras se deben procesar
para que no se lleguen a deteriorar , se resaltan sus estructuras y así poder
estudiarlas.

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II. Objetivo
El alumno conocerá los materiales y el procedimiento necesario para preparar un corte
histológico vegetal.

III. Materiales y Equipo:

• Muestra: Material vegetal (hojas, pétalos, tallos, etc.)

Figura 1. Muestra biológica: material vegetal

• Reactivos: Verde de metilo, HCl, NaOH, Glicerina, Floroglucina alcohólica
• Portaobjetos y cubreobjetos
• Pinzas
• Estiletes
• Goteros
• Navajas
• Microscopio

IV. Procedimiento
4.1. Pasos para la obtención de un preparado histológico
• Fijación del material vegetal
• Inclusión del material en parafina, en resina.
• Corte, micrótomo, micrótomo de mano, a mano alzada.

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Figura 2. Corte de material vegetal a mano

Figura 3. Tipos de cortes. A) Transversal. B) Longitudinal radial. C)

Longitudinal tangencial.
• Tinción del corte histológico.
• Montaje del corte histológico.
• Observación del preparado histológico.

4.2. Obtención de un preparado en fresco

• Colocar una gota de agua en una lámina portaobjetos

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Figura 4. Lámina portaobjetos con una gota de agua

• Realizar el corte del material vegetal

Figura 5. Corte transversal del material biológico

• Escoger los cortes más delgados y colocarlos sobre la gota de agua

Figura 6. Cortes histológicos en una gota de agua

• Añadir una gota de verde de metilo y dejar reposar por 30 segundos.

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Figura 7. Cortes histológicos en una gota de verde de metilo

• Lavar con agua destilada

Figura 8. Lavado de muestra biológica con agua destilada

• Añadir glicerina o agua (temporal) para realizar el montaje

Figura 9. Montaje de la muestra bilógica

• Rotular la lámina

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Figura 10. Rotulado de la muestra biológica

• Haciendo uso del microscopio, observar a 4x

Figura 11. Observación microscópica

• Almacenar el preparado histológico obtenido

Figura 12. Batería de preparados histológicos

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V. RESULTADOS
5.1 Señalar cada una de las partes observadas

Haces
conductores

Parénquima cortical Vasos

Parénquima
medular

Colénquima

Observación:

Aquí se puede observar un corte transversal de peciolo vista al microscopio

previamente preparado a la fijación y tinción de los reactivos, se observa desde
la parte externa los haces conductores, seguido por el parénquima cortical,
colénquima, agrupaciones de vasos y el parénquima medular.

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5.2 Responder las preguntas del siguiente cuestionario

Observar el siguiente video:

https://www.youtube.com/watch?v=3AWWPro8FHg&ab_channel=Laboratori
odeBot%C3%A1nica

RESPONDER:
• Definir corte transversal y corte longitudinal

Corte longitudinal: Este tipo de cortes depende de la sección más larga de

la muestra, pues se lo realiza en paralelo a esa sección, puede ser vertical
u horizontal y permite obtener una imagen panorámica de la muestra.

Corte transversal: Estos cortes se los realiza perpendicularmente al eje

longitudinal de la muestra a analizar es decir podemos decir que depende
del corte longitudinal y al contrario del anterior, se lo realizaría en función
de la sección más corta de la estructura.

• Definir: corte tangencial y corte radial

Corte tangencial: (rasante), este consiste en un corte que se realiza
pasando la cuchilla escasamente por la superficie de la estructura, es decir
que se corta sola una simplemente una minúscula parte del tejido ya sea
en disposición longitudinal o transversal, este corte podemos.
Corte radial: Se realiza de forma perpendicular a los anillos de
crecimiento. Mantiene la veta visible y permite evitar alabeos
(deformaciones que encorvan los bordes de la tabla) o fendas (grietas
longitudinales), pero genera un mayor desperdicio de la muestra.

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• ¿Cómo se realiza el corte superficial en las hojas?

Con la hoja de afeitar se hace un corte superficial en forma de V en la
epidermis inferior de la hoja. Con la ayuda de la pinza se toma la epidermis
por el extremo de la V y tirar tratando de desprender la epidermis que es
incolora. Si se observa de color verde significa que ha arrastrado otros
tejidos junto con la epidermis. Obtenida la epidermis incolora colocarla
sobre la gota de agua que está en el portaobjeto, teniendo especial
cuidado de colocar hacia el cubreobjeto la superior de la epidermis.
Apoyar un borde del cubreobjeto en el agua del portaobjeto y
sosteniéndolo con la aguja, deslizarlo hasta cubrir lentamente la
epidermis. De esta manera se va desplazando el aire y no se forman
burbujas

• ¿Cuáles son los colorantes que se utilizan para los cortes vegetales?

a. El verde de metileno

b. Azul de metileno

c. La safranina

d. La orceína

e. Lugol

f. Tionina

g. El azul alcian

• ¿Qué tipo de colorante es el verde de metilo y cómo se prepara?

Es un tipo de colorante Básico catiónico que sirve para teñir el núcleo de

color verde . Es un polvo de aspecto verdoso que es soluble en agua. Como
suele impurificarse con violeta de metilo (Violeta de Genciana o violeta
cristal) se puede purificar por disolución con cloroformo, donde
permanece disuelto en cloroformo el violeta pero no el verde de metilo.2
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Sus propiedades espectrales permiten su utilización como marcador

fluorescente de ADN, emitiendo, al unirse al mismo, en rojo lejano

• ¿Cómo se realiza el preparado en fresco y preparado en seco?

La preparación en fresco : Es ideal para la observación de

microorganismos o de tejidos biológicos que requieren ser hidratados.
- Si la muestra es líquida colocamos unas gotas de la muestra en el
centro del portaobjetos con la ayuda de una pipeta.
- Si la muestra es sólida colocamos primero unas gotas de agua
destilada o de solución salina sobre el portaobjetos y a continuación
un fragmento de la muestra con la ayuda de unas pinzas.
- Sujetando el cubreobjetos por dos de sus lados, apoyamos otro de sus
lados sobre el portaobjetos de modo que forme un ángulo de
aproximadamente 45 grados.
- A continuación, podemos soltar con cuidado el cubreobjetos de modo
que quede colocado sobre el líquido que hemos depositado
anteriormente. (Mediante este procedimiento se evita la formación
de burbujas dentro de la muestra. En caso de que hayan aparecido
burbujas entre el portaobjetos y el cubreobjetos será necesario repetir
el procedimiento anterior.)
- En caso de que haya un exceso de líquido alrededor del cubreobjetos
podemos eliminarlo mediante papel absorbente

La preparación en seco: Es ideal para muestras que no necesitan

hidratación. Esto incluye, por ejemplo, un cabello, granos de polen,
esporas, muestras de plantas, insectos, etc.

- Si la muestra es totalmente opaca el primer paso consistirá en cortar

primero una sección muy fina de la muestra. Esto permitirá observarla
en el microscopio mediante luz transmitida.

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- Colocamos la sección que hemos cortado en el centro del portaobjetos

con la ayuda de unas pinzas.
- Si la muestra tiene un cierto volumen es recomendable utilizar un
portaobjetos con una cavidad cóncava.
- Para mantener la muestra fija en su sitio la cubrimos con un
cubreobjetos. Esto evita también que el objetivo llegue a tocar la
muestra en caso de cometer algún error durante la manipulación del
microscopio.

• ¿Esquematizar el preparado y corte del tejido vegetal al micrótomo?

Preparación y corte de la Lavado y despigmentación de la

muestra de la hoja muestra vegetal

Proceso de corte transversal

Selección de la muestras y
de la muestra y selección
decoloración

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Proceso de tinción de la muestra con el Proceso y montaje de la muestra

colorante azul de toluidina selecciona para la observación

VI. CONCLUSIONES

- Como observamos después de la practica y al realizar el debido

preparado , y montaje de la muestra vegetal observamos que se
realizan protocolos diferentes al ser una muestra de célula vegetal ,
estos deben realizarse con extremo cuidado para preservar la muestra
y poder seleccionar de loa mejor manera para su correcta observación
y manejo de ella .

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VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Gaviño, T., Juárez, L., Figueroa. (2000). Técnicas biológicas selectas del laboratorio y de
campo. México
UnADM.(2017).Técnicas de laboratorio de Biología .México
https://issuu.com/jazinaruizhernandez/docs/unidad_4._uso_de_colorantes_y_react
Merel.G, J.A. (2020). Cortes histológicos básicos. Universidad católica de cuenca.
Ecuador
https://www.studocu.com/ec/document/universidad-catolica-de-
cuenca/histologia/cortes-histologicos-nota-95/10558944

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