PROCESAMIENTO

HISTOLÓGICO y
LA CÉLULA
MORFOFISIOLOGÍA GENERAL
ROTACIÓN HISTOLOGÍA
SEMANA 1

2023- 1
 RESULTADOS DE APRENDIZAJE DE LASESIÓN

• Valorar la importancia de la Histología.

1.

• Reconocer las etapas del Procesamiento en Histología y

2.
describir diferentes Técnicas Histológicas

Al finalizar la sesión el
estudiante será capaz de:
• Explicar las características de la célula Eucariótica
3.
Animal.

• Relacionar las estructuras celulares con la función de la

4.
célula
 REFLEXIÓN DE LA EXPERIENCIA

El descubrimiento del microscopio abrió todo un campo de investigación,

conforme fue avanzando la tecnología, en microscopía, fueron avanzando los
conocimientos sobre las células. La curiosidad científica hizo que cada vez
surgiera el deseo por observar más, y cómo las células no tienen color, hubo la
necesidad de emplear colorantes y esto llevó a nuevos descubrimientos y al
desarrollo de nuevas técnicas que permitieran encontrar más estructuras dentro
de las células y ver cómo estaban constituidos los tejidos, surgiendo una nueva
ciencia, la Histología.

El metabolismo celular generado por las propias organelas internas e interacción

intracelular nos permite identificar cuando una célula esta viva o atravesando
algún proceso de muerte programada, esto lo evidenciamos en la coloración de su
núcleo, el color que toma su citoplasma al producir proteínas o poseer cuerpos
secretores, todas estas características nos permiten identificarlas y describirlas.
 TEMARIO

¿Qué es la Histología?

Procesamiento Histológico

Tinción de los cortes

Otras técnicas histológicas

Las células y sus componentes

Tejidos Animales
 ¿Qué es Histología?

La comprensión de los
La Histología es una ciencia
procesos fisiológicos y
básica que se ocupa del estudio PERMITE
patológicos que pueden
de las células y tejidos normales
presentarse en el ser humano.

Los Tejidos son un conjunto de
células muy relacionadas, dentro
PROCESAMENTO
de un entorno que constituye la HISTOLÓGICO
Matriz Extracelular (MEC).
Conjunto de procedimientos
aplicados a un material
biológico con la finalidad de
prepararlo para su óptima
observación con el micros-
copio y su posterior estudio.

N° 1
 Introducción al estudio de la Histología

HISTOLOGÍA “estudio de los tejidos”

Es la rama de la Anatomía que estudia los tejidos

ANATOMÍA MICROSCÓPICA
N°
 Procesamiento Histológico

I. TÉCNICAS CITOHISTOLÓGICAS:
Proceso que permite preservar las células y tejidos para un análisis a nivel de microscopía óptica.

II. TÉCNICAS CITOQUÍMICAS:

Son técnicas que nos brindan información química, permitiendo un resultado analítico cualitativo y
cuantitativo, identificando la presencia de determinadas moléculas y la actividad de las células para
producirlas.

III. TÉCNICAS INMUNOCITOQUÍMICAS:

Son técnicas que emplean la reacción Antígeno-Anticuerpo (Ag-Ac), permiten localizar antígenos
presentes en el cuerpo.

N°
 Procesamiento Histológico

I. TÉCNICAS
CITOHISTOLÓGICAS:
Son técnicas que permiten preservar la
estructura celular, para ser observadas
al microscopio óptico de luz.
Consta de una secuencia de pasos que
permiten obtener las láminas
necesarias para el estudio histológico.
Este proceso también es utilizado para
los estudios patológicos que se
requieran.
 Pasos de la Técnica Histológica

1. Obtención de la muestra: Las muestras de tejido pueden

ser obtenidas de materiales quirúrgicos, necropsias, biopsias, estas deben
de ser procesadas adecuadamente y prontamente para obtener buenos
cortes histológicos.

• Se puede obtener por: Frotis, Aspiración y/o lavado , Punción aspiración

con aguja fina, Impronta, Biopsia, Punción con trocar, Necropsia.

ROTULACIÓN
DE LA MUESTRA
 Pasos de la Técnica Histológica
2. Fijación: Provoca la desnaturalización de las proteínas, para
evitar la autólisis, detiene el metabolismo celular, además
endurece el tejido.

• La fijación puede ser

QUÍMICA, como el uso del formol (aldehídos), glutaral-
dehído (preferentemente en microscopía electrónica),
alcoholes, mercuriales (Zenker), picratos (Bouin), etc.
PERFUSIÓN
❖ Puede ser por inmersión (se introduce una pequeña
porción del tejido, en el fijador) o por perfusión (se
aplica en animales de laboratorio, en el cual se le
inyecta el fijador al torrente circulatorio, obteniéndose
una fijación rápida y uniforme).

❖ El fijador debe de actuar en forma rápida para detener

los procesos de autólisis y debe de tener un alto poder
de penetración para asegurar la fijación correcta hasta
las capas más profundas del tejido.
 Pasos de la Técnica Histológica
• La fijación puede ser FÍSICA (calor, desecación) en un
proceso llamado desnaturalización.
• Desecación: Extendidos, líquidos de punciones.
• Calor seco: Bacteriología.
• Calor húmedo: Microquímica, Zoología.
• Frío: No es una verdadera fijación. Detiene los
procesos de autólisis y necrosis, pero cuando deja de
actuar los mismos se reanudan.
3. Deshidratación y aclaramiento: Son pasos previos que se deben
de hacer antes de la inclusión.
• Deshidratación: uso de alcoholes en grados ascendentes, con
la finalidad de eliminar el agua de los tejidos, para luego poder
incluir en parafina. Se puede utilizar: alcohol etílico, isopropílico,
butílico o acetona.
• Aclaramiento (Diafanización): se busca una sustancia que sea
miscible en alcohol y en parafina. Se puede utilizar: xilol, toluol o
benceno.El xilol desplaza al alcohol y disuelve la parafina
 Pasos de la Técnica Histológica
4. Inclusión: La parafina penetra en los vasos, en los espacios
intercelulares y también en el interior de las células embebiendo el
tejido y haciendo más fácil la obtención de cortes con el micrótomo.
La parafina reemplazará los espacios en los cuales se encontraba el
agua
• Confección del TACO: Obtención del bloque de parafina de forma
regular,para ser cortado con el micrótomo. BARRAS DE LEUKART

BARRAS DE LEUKART
TACOS
 Pasos de la Técnica Histológica
5. Corte: ➢Micrótomo Rotativo. 6. Extención y Montaje
➢Micrótomo de Deslizamiento. ➢ Utilizar portaobjetos limpios y preparados con
➢Micrótomo de Congelación. el adhesivo adecuado.
➢Crióstato. ➢ Se realiza en agua tibia (38°C).
➢ Precaución: el preparado debe quedar bien
extendido y sin pliegues.

➢ Rotular
 Tinción de los Cortes
7. TINCIÓN DE LOS CORTES: Los colorantes pueden agruparse en tres clases principales:
• Colorantes que diferencian los componentes
básicos y ácidos de la célula (hematoxilina y
eosina).
• Colorantes especializados que distinguen los
componentes fibrosos de la matriz extracelular.
• Sales metálicas que se precipitan en los tejidos
y forman depósitos de metales en ellos.
 Tinción de los Cortes

La reacción de los grupos aniónicos con un

colorante básico se denomina BASOFILIA
(que tiene afinidad por lo básico)

La reacción de los grupos catiónicos con un

colorante ácido se denomina
EOSINOFILIA
(que tiene afinidad por lo ácido)
 Tinción de los Cortes
Coloración con Coloración con Coloración
Hematoxilina Eosina Hematoxilina-Eosina

Basófilo
(azul)
Acidófilo
(rosado)
 Tinción de los Cortes

Tomado de: https://www.youtube.com/watch?v=cSrHwQO1YK4

 Tinción de los Cortes
TRICRÓMICA

Tomado de: https://www.youtube.com/watch?v=cSrHwQO1YK4

 Otras Técnicas Histológicas
II. TÉCNICAS CITOQUÍMICAS:
Son técnicasque nosbrindaninformaciónquímica,permitiendounresultadoanalíticocualitativoycuantitativo,identificandolapresencia
de determinadasmoléculasy laactividaddelascélulasparaproducirlas.

Reacción de Feulgen: Robert Feulgen desarrolló un

método de tinción de ADN (ahora conocida como la
tinción de Feulgen), usando la fucsina.

http://www.uco.es/~bc1gorej/rinconpractico.
Reacción de PAS: Permite reconocer estructura y htm

función, tanto de la célula , como del tejido.. La

reacción de PAS tiñe de rojo magenta a carbohidratos
complejos (glucógeno, mucoproteínas), como en las
células del epitelio gastrointestinal, en en el
respiratorio, en las membranas basales, etc.
 Otras Técnicas Histológicas

Metacromasia
▪ Se denomina así, cuando un
colorante usado, cambia de
color, de azul a rojo púrpura,
frente a un componente
celular.
▪ El colorante metacromático
se puede unir a los grupos
sulfato, carboxilos y fosfatos,
que los podemos encontrar
en ácidos nucleicos,
proteoglucanos y algunos
lípidos.
N°
 Otras Técnicas Histológicas
III. TÉCNICAS INMUNOHISTOQUÍMICAS:
▪ Son técnicas que emplean la reacción Antígeno-Anticuerpo (Ag-Ac), permiten localizar antígenos
presentes en el cuerpo.
▪ Se utiliza un anticuerpo específico al cual se le agrega una sustancia coloreada que hará visible al
complejo Antígeno-Anticuerpo.
▪ Se inyecta, a un conejo, la sustancia a investigar, se obtiene el anticuerpo al cual se le adosa la
sustancia coloreada ( por ejemplo, fluoresceína) y luego este anticuerpo marcado se enfrenta al
tejdo y es ahí donde se formará el complejo Ag-Ac y esté podrá se observado con un microscopio
de fluorescencia. También se puede utilizar peroxidasa.

http://www.hospitalmontesinai.org/consejos-de- los-doctores/88-importancia-
https://facilitycemc.wixsite.com/servicio-facility/single- de-la-inmunohistoquimica-en-el-diagnostico-anatomopatologico
 Otras Técnicas Histológicas

Tomado de: https://www.youtube.com/watch?v=cSrHwQO1YK4

 Microscopía
▪ Desde la invención del microscopio a fines del siglo XVI, ha habido un largo camino y grandes
avances en la tecnología, con lo cual se han logrado grandes avances en la ciencia y en el
conocimiento.

M.O. SIMPLE
• Lupa

M. ÓPTICO
• Campo claro
• Contraste de fase
M.O. COMPUESTO
TIPOS DE • Campo oscuro
MICROSCOPIOS • Fluorescencia
• Láser Confocal
• Transmisión
M. ELECTRÓNICO • Barrido
• Cuántico
 Microscopía

A. M. Campo claro B. M. Contraste de fase

C. M. de Normansky D. M. Campo oscuro
 La Célula

La Célula
 MEMBRANA PLASMÁTICA

▪ La célula está rodeada por una membrana, denominada

"Membrana plasmática".
▪ La membrana plasmática representa el límite entre el medio
extracelular y el intracelular. Controla el contenido químico de
la célula.

 Constituida por lípidos y proteínas.

 Fosfolípidos.
 Diferentes tipos de proteínas hasta 50 clases.
 Oligosacáridos asociados tanto a proteínas como a lípidos formando el glucocálix.
 MEMBRANA PLASMÁTICA
o Funciones de la
membrana plasmática
▪ Intercambio.
Barrera entre el medio extracelular y el
citoplasma es selectivamente permeable
▪ Receptora.
Soporte para receptores de hormonas y
neurotransmisores. Algunas hormonas
regulan actividad celular, fijándose en
proteínas receptoras específicas, activan-
do o inhibiendo procesos metabólicos.
▪ Reconocimiento.
Soporte para transportadores de iones y
nutrientes. Las células del sistema inmune
reconocen lo propio a través de la
membrana. Se debe a glicoproteínas de la
cara externa de la membrana.

DIFUSIÓN SIMPLE
Consiste en el pasaje de
moléculas, pequeñas, a través
de la bicapa de fosfolípidos.
Transporte Celular
DIFUSIÓN FACILITADA DIFUSIÓN FACILITADA
Mediados por proteínas Modalidades de transporte:
Transportadoras • Simple
Una vez que se abre, • Cotransporte
millones de iones lo • Contratransporte o
atraviesan por segundo El intercambio
agua, Iones hidratados
acuaporinas
Transporte Celular
Macromoléculas como proteínas
y polisacáridos son muy
grandes o muy cargadas o
polares como para atravesar la
membrana -Mediado por
vesículas -Fagocitosis:
incorporación de un sólido
(bacteria), solo se da en células
fagocíticas -Pinocitosis: entrada
de líquidos, en todas las células
-Endocitosis mediada por
receptor: las moléculas
interaccionan con proteínas de
membrana (colesterol LDL se
une a receptores de membrana)
 Estructuras Celulares

▪ Constituidos por 2 cadenas de ▪ 8-11 nm de diámetro. ▪ 25 nm de diámetro, presente en

actina de 7 nm de diámetro y están ▪ Son heterogéneos y estables eucariotas.
debajo de la membrana (enlaces). ▪ Se originan en los centros organizadores
plasmática. ▪ Forman la estructura celular de microtúbulos.
▪ Mantienen la forma celular. ▪ Participan en algunas uniones ▪ Constituidos por dímeros de α y β
▪ Forman seudópodos y microvellos intercelulares. tubulina.
(movilidad). ▪ Constitución depende del tejido en ▪ Intervienen en el desplazamiento de
▪ Participan en uniones el que se hallen: en pelo y uñas, la vesículas de secreción, transporte
intercelulares. queratina. intracelular, movimiento de orgánulos,
▪ Intervienen en la transducción de división celular.
señales. ▪ Presentes en cilios y flagelos.
▪ Junto con la miosina permite la
 R.E.LISO
SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS
R. E. RUGOSO R. E. LISO
▪ Transferencia de las cadenas poli- ▪ Sintetiza
lípidos, colesterol
y derivados de estos: sales
peptídicas, sintetizadas las cadenas
biliares, hormonas esteroi-
polipeptídicas pasan al lumen del RE
deas.
para ser transportadas por las
cavidades hasta que salgan del RE a
▪ Detoxificación, es la inacti-
vación de productos tóxicos
través de una vesícula de transición y
como drogas, medicamen-
pase al Aparato de Golgi.
tos, se lleva a cabo en el
hígado.

Fragmento de una célula vista al microscopio

electrónico, en el que se observa elementos
del REL, sin ribosomas.

Fragmento de una célula vista al microscopio electrónico, en el que

se observa elementos del RER, los puntos oscuros son ribosomas.
 SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS
APARATO DE GOLGI
▪ Conjuntos de dictiosomas (4 a 8 sáculos
aplanados y apilados).
▪ Es una planta empacadora: modifica vesículas
del RER, el material nuevo de las membranas se
forma en varias cisternas del Golgi.
▪ Glicosila proteínas y lípidos, síntesis de
polisacáridos de la matriz extracelular.
▪ Participa en la síntesis de carbohidratos,
producción de lisosomas y acrosomas
espermáticos.

32
 Estructuras Celulares
PEROXISOMA
▪ Son organelos esféricos limitados por membrana.
▪ Contienen enzimas de oxidasas y catalasas que catalizan la
producción y descomposición del peróxido de hidrógeno
(H2O2). Le permiten metabolizar radicales libres y estradiol.
▪ Las enzimas oxidativas son importantes en las células hepáticas
en donde realiza procesos de desintoxicación. Detoxificación
del alcohol en hígado.
▪ En el interior de algunos peroxisomas se observan estructuras
cristalinas que corresponden a la enzima ácido úrico oxidasa.
▪ Catabolismo de ácidos grasos de cadenas largas, de purinas,
prostaglandinas y leucotrienos.
 Estructuras Celulares
LISOSOMAS
▪ Vesículas formadas por RER y empacadas por
el golgisoma.
▪ Se encuentran rodeadas de membrana,
presentan enzimas hidrolíticas y proteolíticas.

▪ Son los encargados de reciclar restos

celulares de desecho. Pueden destruir
virus y bacterias invasoras digestión.
▪ La membrana lisosomal estabiliza el pH
bombeando protones desde el citosol,
protegiendo a la célula.
 Estructuras Celulares
MITOCONDRIA
▪ Presentes en toda célula eucariota.
▪ Presentan ADN mitocondrial.
▪ Suministran energía a la célula,
sintetizan ATP por el Ciclo de
Krebs y la cadena transportadora
de electrones.
Presenta membrana:
▪ Externa: Permeable a iones, a
metabolitos y polipéptidos por la
presencia de porina o VDAC (canal
aniónico dependiente de voltaje) . ▪ 1. Membrana externa.2. Espacio intermembrana. 3.
▪ Interna: Presenta pliegues Membrana interna. 4. Membrana interna. 5. Crestas
dirigidos al interior: crestas mitocondriales 6. Matriz mitocondrial
mitocondriales con 3 tipos de
proteínas. 35
 El Núcleo
▪ Rodeado por envoltura nuclear o
carioteca.

▪ Presenta DNA (replicación y

transcripción).

▪ Se desintegra durante la mitosis y

reaparece después de la telofase.

▪ Dirige la actividad celular: contiene el

programa genético que dirige el
desarrollo y funcionamiento de la célula.

▪ Es la sede de la replicación: duplicación

del DNA y la transcripción: síntesis del
RNA.
 El Núcleo
CROMATINA
▪ Es granular y heterogénea, constituida por DNA e
histonas.

▪ Presenta:

▪ Eucromatina: Regiones
relajadas en constante
expresión génica.

▪ Heterocromatina: Regiones
condensadas en donde el ADN
se enrolla para no expresarse.
37
 NÚCLEO CELULAR
➢ Presenta envoltura nuclear o carioteca:
➢ 2 membranas reforzadas por el citoesqueleto.
➢ Con poros nucleares que sirve de comunicación con el citosol.
➢ Nucleoplasma, carioplasma o cariolinfa: es el medio interno
indiferenciado que llena el núcleo, semejante al citosol o hialoplasma,
bañando a sus componentes.
➢ Se continúa con el RER y presenta ribosomas adheridos a la parte
externa.
➢ Está reforzada por dos armazones de filamentos intermedios:
➢ Uno adosado a la superficie interna: lámina nuclear.
➢ Otro situado en la cara citólica de la membrana externa
38
 El Núcleo
NÚCLEO INTERFÁSICO O VESICULOSO
➢ Cromatina: material hereditario durante la
interfase: ADN asociado a proteínas.
➢ Nucleoplasma, carioplasma o cariolinfa: es
el medio interno indiferenciado que llena el
núcleo, semejante al citosol o hialoplasma,
bañando a sus componentes.
➢ Nucléolo, una o más estructuras
esferoidales, relacionadas con la síntesis de
las principales piezas de los ribosomas y
con su ensamblaje parcial.
 El Núcleo
NÚCLEO PICNÓTICO
 El núcleo picnótico puede ser ovoide,
redondeado o aplanado, se caracteriza
porque su cromatina está tan compactada
que se observa de un color homogéneo
fuertemente teñido y de tamaño reducido,
no se logra visualizar nucleolo.
http://www2.udec.cl/~webpa
 Se observa en células inactivas o en tologia
proceso de apoptosis
 El Núcleo
Nucleolo
Estructura intranuclear no
membranosa formada por material
fibrilar (pars fibrosa) y granular
(pars granulosa).
Muy desarrollado en células activas
en la síntesis de proteínas.
Formado principalmente por bucle
de DNA de cromosomas diferentes
con genes para rRNA agrupados.
41
 Tejidos Animales

EPITELIAL Se encuentra cubriendo superficies,

revistiendo cavidades o formando
glándulas.

Conformado por células que Es el tejido más abundante

son capaces de recibir NERVIOSO TEJIDOS CONECTIVO de nuestro cuerpo, da
estímulos y dar respuesta a soporte, relleno, defensa,
ellos. etc.

Formado por células capaces MUSCULAR

de realizar el movimiento de
nuestro cuerpo. N°
APLIQUEMOS LO
APRENDIDO
 Semana 1
Proceso Definición Verdadero Falso
1. Tejido Conectivo Escasa Matriz Extracelular

2. Transporte Activo Sin gasto de energía.

3. Difusión Facilitada Paso de glucosa.

4. Mitocondrias Con ADN circular.
5. Cariolinfa En el núcleo.
6. Carioteca Formada por una membrana.
7. Microfilamentos Constituidos de actina.
8. Núcleo Afinidad por colorantes ácidos.

9. RER Transporte de proteínas.

10. Peroxisomas Contiene enzimas oxidativas.

 Semana 1
Proceso Definición Verdadero Falso
1. Inmunocitoquímica Detecta anticuerpos.

2. Deshidratación Alcoholes en forma ascendente.

3. Formol Fijador físico más empleado

4. Microscopía Confocal Colorantes fluorescentes.

5. Perfusión Fijación de un órgano.

6. Coloración Tricrómica Colágeno rojo, células azules.

7. Coloración H/E Citoplasma rosado.
8. Confección del Taco Barras de Leukart.
9. Diafanización Uso de xilol.

10. Coloración PAS Tiñe glucógeno y mucoproteínas.

 Responda la siguiente pregunta:

1. Si observa una lámina histológica de intestino con

coloración Hematoxilina-Eosina (H/E), de qué
color observaría:
- El citoplasma de las células.
- Los núcleos.
- El moco

N°
INTEGREMOS LO
APRENDIDO
 Analice las siguientes preguntas

▪ ¿Qué aprendimos hoy?

▪ ¿Cuál es la importancia del
Procesamiento en Histología?

▪ ¿Cómo nos ayudará el

Procesamiento al observar láminas
patológicas?
N°
 MATERIALES COMPLEMENTARIOS

Revise el siguiente material, la siguiente clase se preguntará, al azar, lo

aprendido en apoyo a la presente clase.
▪ https://www.youtube.com/watch?v=KyO3TT2NaKk
▪ https://www.youtube.com/watch?v=EMXpQzwOc_Q
▪ https://www.youtube.com/watch?v=1_bu_iWaQeE

N°
 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

• GENESER JENSEN. Histología: sobre bases moleculares. 3a ed. Buenos Aires:Ed. Médica
Panamericana, 2000. Disponible en Biblioteca:611.018 / G36 / 2000
• JUNQUEIRA L.y UCHÔA C. Histología básica: texto y atlas. 5a ed.Editor: Barcelona: Masson, 2000.
Disponible en Biblioteca: 611.018 / J89 / 2000
• ROSS, M. H. y W. PAWLINA. Histología: Texto y Atlas Color con Biología Celular y Molecular.Ed.
Panamericana, 6ª ed., 2013
• http://histology.medicine.umich.edu/
• http://www.histology-world.com/photoalbum/displayimage.php?album=16&pid=3259

N°