Práctica 2

COLORACIÓN CELULAR

Fundamentos, montajes y técnicas de coloración biológica

OBJETIVOS

• Aplicar las técnicas básicas de coloración biológica para la diferenciación

celular de distintos organismos y/o microorganismos.
• Explicar el fundamento biológico de las diferentes técnicas de coloración
en el estudio de distintos modelos y muestras usadas en la clase.

TRAE AL
LABORATORIO UNA
PAPA Y UNA
CEBOLLA
CABEZONA

COLORACIÓN

Anteriormente, aprendimos como usar el microscopio compuesto para

observar y estimar el tamaño de las muestras. Sin embargo, es importante
saber existen diversas técnicas de montaje y coloración que se han
desarrollado con el fin de lograr una mayor resolución y diferenciación de los
componentes celulares (Sadava et al., 2016). Dichas técnicas de coloración
consisten en el uso de colorantes para facilitar la visión de los componentes
celulares y tisulares; por ejemplo, colorantes cuyo origen sea animal o
vegetal que se han denominados colorantes naturales (Bancroft & Gamble,
2008, Montuenga et al., 2009).
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 Los organismos vivos
se componen de
múltiples células que
llevan a cabo todas
las funciones vitales.
Se pueden observar
bajo el microscopio.
Pero … ¿cómo
diferenciarlas?

A menudo, los científicos utilizan técnicas de coloración para lograr un mayor

detalle en sus observaciones a través del microscopio. Una técnica muy
sencilla es la coloración con azul de metileno para la cual se utiliza un único
colorante para aumentar el contraste de las células teñidas.

PROCEDIMIENTOS

El Azul de metileno es un colorante orgánico, y se usa únicamente para

aumentar el contraste de una muestra, ya que todas las células van a
resultar teñidas del mismo color.

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1. Traer una cebolla 2. Realice un corte fino de 3. Adicione una gota de agua
cabezona a la clase la epidermis en una lámina y coloque la
muestra. cúbrala con una
laminilla.

6. Observe e 5. Observe al microscopio 4. Sin levantar la laminilla,

identifique estructuras iniciando en el objetivo 4x adicione por un borde una
celulares (núcleo, hasta 40x gota de azul de metileno
citoplasma)

Las plantas, que incluye frutas y verduras, almacenan energía por medio de
un polisacárido de nombre almidón, el cual se conforma de largas cadenas
de moléculas de glucosa unidas mediante enlaces glucosídicos. Mediante la
coloración de lugol podemos observar el almidón presente en ciertos
alimentos, en este caso, observaremos su presencia en la papa.

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 La coloración del yodo (lugol) es usada para determinar la presencia o
alteración de almidón u otros polisacáridos. El reactivo de Lugol, que
contiene una mezcla de yodo y yoduro, permite reconocer polisacáridos,
particularmente el almidón por la formación de una coloración azúl-violeta
intensa. Esta reacción es el resultado de la formación de cadenas de
poliyoduro a partir de la reacción del almidón con el yodo presente en la
solución de Lugol. La amilosa, el componente del almidón de cadena lineal,
forma hélices donde se juntan las moléculas de yodo, formando un color azul
oscuro a negro.

1. Traer una papa 2. Realice un corte 3. Adicione una gota de agua

a la clase fino en una lámina y coloque la
muestra. cúbrala con una
laminilla.

5. Observe al microscopio 4. Sin levantar la laminilla,

6. Observe e
iniciando en el objetivo 4x adicione por un borde una
identifique los
hasta 40x gota de Lugol
amiloplastos

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 De igual forma, existen otras técnicas de coloración compuesta, es decir,
que no sólo usan un colorante, sino varios para cumplir con el objetivo de la
coloración. Es el caso de la coloración de Giemsa.

La coloración de Giemsa utiliza diversos colorantes ácidos y básicos, entre

estos, el azul de metileno, con el fin de teñir un rango amplio de estructuras
de la célula y mostrar un amplio espectro de colores, de acuerdo con las
características bioquímicas de cada estructura, usando tonalidades azules
pálidas, azules oscuras, lila y púrpura, en el caso de las estructuras ácidas.

1. Coloque una gota de sangre en 2. Cubra el extendido 3. Cubra el extendido

una lámina, con ayuda de otra de sangre con de sangre con
lámina realice un extendido hacia metanol y deje secar colorante de Giemsa
la derecha al aire libre durante 15 minutos

5. Observe al microscopio 4. Lave la lámina con

6. Identifique células iniciando en el objetivo 4x hasta agua destilada y deje
sanguíneas llegar a 100x. No olvidar el aceite secar
de inmersión en 100x

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 La tinción con azul de lactofenol es una coloración que usa un único colorante: el
azul de algodón, pero que adicionalmente emplea fenol y ácido láctico como
pasos del proceso de coloración. Mientras el fenol induce la activación de enzimas y
muerte celular, el ácido láctico fija las estructuras fúngicas. Finalmente, el azul de
algodón se adhiere a la quitina en las hifas y conidios del hongo completando la
coloración.

1. Adicione una gota de

azul de lactofenol en una 2. Esterilice el asa en el
lámina mechero.

2 opciones
3. Cerca al mechero, 3´ Tome un pedazo de
tome un inóculo de cinta transparente, y cerca
hongo y espárzalo al mechero, ponga
sobre la lámina y cuidadosamente la
cúbralo con una cinta por el lado adhesivo
laminilla sobre el hongo y péguela
en la lámina con colorante

4. Observe al microscopio
iniciando en 4x hasta 40x e
identifique estructuras fúngicas

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Hasta el momento, se han observado muestras in vivo. Sin embargo, ¿qué
sucede cuando la muestra debe atravesar un proceso de fijación previo al
proceso de coloración? El siguiente es el caso de la tinción de Gram:

La coloración de Gram sirve para realizar una clasificación de bacterias gram

positivas (con una capa gruesa de peptidoglicano y dos tipos de ácidos
teicoicos) y bacterias gram negativas (con una capa delgada de
petidoglicano unida a una membrana exterior de lipoproteínas) a partir de
caracteristicas diferenciales de la pared celular.

Iniciando con un proceso de fijación de las bacterias:

1. Esterilice el asa en 2. Cerca al mechero, tome un 3. Fije la muestra

el mechero. inóculo de bacteria y espárzalo pasando cuidadosamente
sobre la lámina con una gota de la lámina dos o tres veces
agua y deje secar por la llama del mechero

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 Siguiendo con el proceso de coloración:

El Cristal-violeta ingresa a
través de la pared celular de
bacterias gram positivas y
gram negativas.

1. Cubra la muestra con 2. Lave la lámina

cristal violeta durante 1 con agua destilada
minuto

El Lugol funciona como

mordiente, es decir, fija la
coloración aportada por el
cristal-violeta.
4. Lave la lámina 3. Cubra la muestra
con agua destilada con Lugol durante 1
minuto

El Alcohol-acetona funciona
como decolorante
aumentando la porosidad de
la pared celular de las 6. Lave la lámina
bacterias gram negativas 5. Cubra la muestra con con agua destilada
Alcohol-acetona durante 30
segundos

7. Cubra la muestra con

fucsina durante 15
8. Lave la lámina con segundos
agua destilada

9. Deje secar al aire la fucsina sirve de contraste. Las

libre y observe en el bacterias gram negativas se tiñen rosado,
microscopio iniciando mientras que las bacterias gram positivas
en 4x hasta 100x conservan el color violeta inicial.

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