1.

INTTRODUCCIÓN
Durante la fotosíntesis, la energía solar se convierte en energía química gracias a la acción de
organismos fotosintéticos. Sin embargo, durante este proceso no se absorben de igual forma
todas las longitudes de onda de luz, ya que los organismos fotosintéticos como las plantas
contienen distintos tipos de moléculas que absorben estas longitudes de onda a los cuales se les
conoce como pigmentos fotosintéticos. Dentro de los pigmentos fotosintéticos encontramos uno
de los más importantes el cual es la clorofila, la cual se encuentra en los cloroplastos y es
responsable de la fotosíntesis. Este pigmento se divide en dos tipos: clorofila a y b, y son ellos
los que absorben longitudes de onda azules y rojas. El árbol Tilia platyphyllos posee hojas
grandes con borde cerrado, de color verde oscuro y también posee en sus hojas pigmentos
fotosintéticos los cuales también pueden ser separados por cromatografía. Por lo tanto, a raíz de
esto surge la siguiente pregunta: ¿De qué manera mediante la cromatografía puede identificarse
el fotopigmento presente en las hojas provenientes del árbol Tilia platyphyllos?
Para el desarrollo de la investigación se tendrá que desmenuzar una hoja del árbol Tilia
platyphyllos para luego introducirla a un mortero con 0,5 g de arena y alrededor de 9 ml de
acetona para triturarlo por medio del pistilo. Después, por medio de una pipeta, extraer el líquido
de la muestra y colocarlo sobre un vidrio reloj, por medio del secador calentar el vidrio reloj
hasta que la muestra quede seca. Posterior a esto, preparar los tubos de ensayo, para ello se tiene
que cortar 5 pedazos de papel filtro (13 cm de largo— 0,7 cm de ancho) y adherirlos a los
corchetes; además, se agregará 1 ml de acetona a los tubos. Antes de unir los corchetes a sus
respectivos tubos de ensayo, por medio de un pincel tomar la muestra seca del vidrio reloj y
pintar un punto 1 cm arriba desde la parte inferior (repetir dicho proceso 5). Finalmente,
colocarles los corchetes a los tubos de ensayo y esperar 8 minutos para tomar fotografías a los
resultados.
Lo que nos llevó a realizar este laboratorio es debido a que se quería analizar cómo a través de
un método como la cromatografía se podían identificar distintos pigmentos fotosintéticos
presentes en las hojas de las plantas, en donde para la elaboración del presente laboratorio se
escogió específicamente las hojas del árbol Tilia platyphyllos. Por su parte, otro de los motivos
por los cuales se elaboró este laboratorio, se debe a que, por medio de este, se buscaba afianzar
nuestros conocimientos y habilidades en el tema de la fotosíntesis.
Para realizar este proyecto, se requieren algunas condiciones de bioseguridad dentro del
laboratorio que son claves para el cuidado y la seguridad de nosotros mismos. Primero se debe
tener precauciones con el manejo de sustancias como la propanona, debido a que la exposición a
grandes cantidades de esta sustancia puede irritar los ojos o producir mareo, por esta razón es
que hay que tener guantes, gafas de seguridad, bata y cofia a la hora de hacer uso de esta. En
segundo lugar, es indispensable los elementos de bioseguridad relacionados con la pandemia
como son el uso del tapabocas, la buena desinfección de manos y el debido distanciamiento, ya
que de esta forma se asegura un menor riesgo frente al virus.

2. PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN

¿De qué manera, mediante la cromatografía, puede identificarse el fotopigmento presente en

las hojas provenientes del árbol Tilia platyphyllos?

3. MARCO TEÓRICO
La cromatografía en papel o cromatografía de partición es una técnica utilizada para el
análisis orgánico cualitativo, la cual permite llevar a cabo la separación y la identificación de
iones, igualmente separa los componentes para así obtenerlos más puros y poder ser utilizados en
etapas finales, tales como las síntesis (Universidad Nacional Autónoma de México, 2007). Es
importante tener en cuenta que la fase estacionaria es representada por el papel, y la fase móvil
es representada por el solvente (acetona); al entrar al contacto con los solventes es cuando
empieza la fase de movilidad en donde generalmente es el pigmento que suele expandirse a lo
largo del papel, desde la línea de inicio hasta algún punto, donde luego se identifica los
milímetros que se movió (UNAM, 2007). Además, este tipo de cromatografía es utilizada cuando
los componentes poseen colores diferentes, para que el despliegue o separación sea identificable
según los colores. (Concepto, 2021)
Los pigmentos fotosintéticos son aquellos que tienen la capacidad de absorber energía solar
para utilizarla en el proceso fotosintético, de esta manera transforman la energía lumínica en
energía química; la variabilidad de pigmentos se da debido a que estos solo pueden absorber y
reflejar ciertas longitudes de onda de luz específicas. El pigmento principal de las plantas es la
clorofila, sin embargo, existen diversos tipos de pigmentos fotosintéticos como los carotenos,
clorofila, feofitinas, xantofila, etc. En la siguiente tabla se expresarán las características de cada
uno de estos pigmentos:

Pigmento Color del pigmento Rf

Caroteno Naranja 0,98

Clorofila a Verde azulado 0,59

Clorofila b Verde amarillento 0,42

Feofitina Verde oliva 0,81

Xantofila 1 Amarillo 0,28

Xantofila 2 Amarillo 0,15

Tabla #1: Tipos de pigmentos
Rf hace alusión a la distancia recorrida por el pigmento divida entre la distancia recorrida por
el solvente. (Allott Andrew, Mindorff David, Azcue José, 2015)
Los carotenos son los encargados de dar frutos o semillas a las plantas, las feofitinas son un
derivado de la clorofila en la cual se eliminan los metales centrales; la clorofila es la que se
encarga de convertir la energía química y además permite a la planta captar una mayor variedad
de longitudes de onda de luz y finalmente las xantofilas se encargan de capturar la energía de los
fotones provenientes de la luz solar. (Maria Belen Acosta, 2021)
La clorofila es una familia de pigmentos responsables de darle la coloración verde a las
plantas, algas y algunas bacterias, el color verde se genera debido a que las clorofilas absorben la
luz visible en las longitudes de onda azules y rojas, reflejando el color verde, las plantas
necesitan una temperatura y un gran aporte de luz, lo cual permitiría una onda de luz amplia; las
plantas las algas y algunas bacterias realizan la fotosíntesis, ya que cuentan con un organelo
celular conocido como cloroplastos, estos con la clorofila tienen la habilidad de convertir la
energía lumínica en energía química, según (Ecología verde, 8 abril 2020). La siguiente imagen
refleja las longitudes de onda de distintos tipos de clorofila.
 Celeste, Melina; Minaglia Crettaz; 2018

Hay 5 tipos de clorofila, la primera y la más importante es la clorofila a, este tipo de clorofila
está presente en todos los organismos que realicen la fotosíntesis, la segunda, la clorofila b, esta
posee un color verde claro, y está presente en árboles y algas, su función principal es aumentar la
absorción de la clorofila A, la tercera, clorofila c, está presente en algunos tipos de algas, este
tipo de clorofila solo se encuentra presente en la primera etapa de la fotosíntesis, aumentando la
absorción de la luz de la clorofila A, la cuarta, la clorofila D, este tipo de clorofila únicamente
fue observado en una alga roja no constante, y aislada, posteriormente se encontró en la
cianobacteria Acaryochloris marina, la cual explota la luz del espectro rojo, el último tipo de
clorofila, es la clorofila F, es destacada por su permisividad con la luz roja, este tipo de clorofila
absorbe este tipo de luz con mayor efectividad que las 4 anteriores, este tipo de clorofila está
presente en una cianobacteria presente en los estromatolitos en Australia en el 2010 (Ecología
verde, 8 abril 2020).

4. VARIABLES
4.1. Controlada: Árbol Tilia platyphyllos
4.2. Dependiente: Fotopigmento
4.3. Independiente: Cromatografía
5. HIPÓTESIS

Mediante la cromatografía puede identificarse el fotopigmento presente en las hojas

provenientes del árbol Tilia platyphyllos, por medio de las distancias recorridas por la fase móvil
y la del pigmento.

6. METODOLOGÍA
6.1. Materiales

● Gradilla (1 unidad)
● Mortero con pistilo (1 unidad)
● Tubos de ensayo (5 unidades)
● Papel filtro (1 unidad)
● Arena (0,5 g)
● vidrio de reloj (2 unidades)
● Hoja de Tilia platyphyllos (1 unidad)
● Pipeta (2 unidades) ± 0,05 ml
● Pipeteador (2 unidades)
● Balanza analítica (1 unidad)
● Acetona (15 ml)
● Corchetes (5 unidades)
● Pincel (1 unidad)
● Marcador (1 unidad)
● Lápiz (1 unidad)
● Regla (1 unidad) ± 0,05 mm
● Secador de pelo (1 unidad)
● Bisturí completo (número 22) (1 unidad)

6.2. Método

Para la preparación de la muestra

 1. Desmenuzar una hoja en trozos pequeños e introducirlos a un mortero
2. Añadir 0,5 g de arena al mortero medidos por una balanza analítica y con el pistilo triturar
la muestra
3. Añadir 3 ml de acetona a la muestra por medio de la pipeta y el pipeteador, con el pistilo
triturar la muestra, si la muestra se evapora añadir más acetona, en este caso se añadieron
hasta 9 ml
4. Se coloca el mortero de forma diagonal para que la parte sólida se hunda y el líquido
quede en la parte superior
5. Dejar reposar la muestra durante 8 minutos
6. Por medio de la pipeta y el pipeteador absorber el líquido de la muestra
7. Derramar el líquido en los vidrios reloj
8. Por medio del secador calentar la muestra por debajo del vidrio reloj para evaporar la
acetona

Para la preparación de donde se tomará la muestra

1. Cortar 5 tiras de papel filtro de 13 cm de largo y 0,7 cm de ancho

2. Por medio de un bisturí abrir una abertura a los corchos en donde las tiras de papel quepan
3. Unir el papel al corcho
4. Desde la parte inferior del papel, contar 1 cm y dibujar un punto con el lápiz
5. En cada tubo de ensayo introducir 1 ml de acetona medidos en una pipeta

Para la cromatografía

1. Por medio de un pincel, humedecerlo con la muestra de los vidrios reloj

2. Marcar 5 veces con el pincel sobre el punto de las tiras de papel filtro
3. Introducir los papeles filtro a los tubos de ensayo sellados por los corchos
4. Dejar reposar el experimento 8 minutos
5. Al pasar los 8 minutos, extraer los papeles filtro de los tubos de ensayo y separarlos del
corcho

Para la toma de datos

1. Encerrar con un círculo la parte del pigmento que sea más notoria y dibujar una cruz
dentro del círculo de tal manera que la cruz pase por la mitad de la circunferencia
2. Por medio de un lápiz, marcar una línea sobre el nivel alcanzado por el solvente (acetona)
 y una línea por el nivel alcanzado del pigmento
3. Por medio de una regla medir la distancia entre el punto inicial (1 cm arriba desde la parte
inferior) y el nivel alcanzado del solvente al centro de la cruz
4. Calcular el valor de R f (distancia recorrida por el pigmento dividida entre la distancia
recorrida por el solvente)
5. Expresar los resultados por medio de una tabla

7. RESULTADOS
Distancia que se ha
Número de Color movido (mm) ± 0.5 RF Nombre del
mancha mm pigmento
1 Verde amarillento 0.5 0.714 Feofitina
2 Verde amarillento 4.6 0.511 Clorofila a
3 Amarillo 0.7 0.108 Xenofilia 2
4 Verde azulado 4.1 0.562 Clorofila a
5 No identificable
Promedio Verde amarillento 2.48 0.474 Clorofila b

Tabla #2: Resultados de pigmentos

En la tabla #1 se puede evidenciar los datos agrupados del laboratorio, la mancha #1 presentó
un color verde oliva y la distancia que se movió fue de 0.5 mm. El valor de R f en la tabla
representa la distancia recorrida por el pigmento divida entre la distancia que recorrió el
disolvente, por lo tanto tenemos que la mancha #1 obtuvo así un R F de 0.714, lo cual según la
tabla de pigmentos este presenta un pigmento conocido como la Feofitina; la mancha número 2
igualmente obtuvo un tono verde claro, pero la distancia de la cual se movió fue de 4.6 mm,
obteniendo así un R F de 0.511, lo cual a partir de la tabla de pigmentos, el pigmento obtenido está
entre la clorofila A o B; la mancha número 3 contó con un color verde más claro que el de los
anteriores, la distancia que se ha movido es de 0.7 mm, obteniendo así un de 0.108, el cual
según la tabla de pigmentos, el pigmento presente es una Xantofila 2; la mancha número 4
obtuvo un tono verde amarillo, la distancia que se movió fue de 4.1 mm obteniendo así un de
0.562, el cual según la tabla de pigmentos, presenta un pigmento de la clorofila A.
8. ANÁLISIS

De la tabla se puede analizar que de acuerdo al promedio que se sacó dividiendo las distintas
distancias recorridas entre 4, el pigmento fotosintético presente en las hojas de este árbol es la
clorofila b. Esto se pudo identificar debido a que de acuerdo a la tabla de pigmentos el valor de la
clorofila b es 0.42, por lo tanto, el promedio final de 0,47 está más aproximado a este dato,
estableciendo finalmente que el pigmento presente en esta hoja es el de la clorofila b. A su vez la
tabla nos muestra que de acuerdo al promedio y al R f el color del pigmento es el verde
amarillento el cual comparándolo con la tabla y las observaciones cualitativas del experimento se
puede decir que esté fue el que más predominó en la mayoría de los resultados obtenidos, como
se puede evidenciar en la mancha #1 y #2 en donde el color es verde amarillento e incluso en la
mancha #3 en donde el color fue amarillo. De acuerdo a la teoría, la clorofila b absorbe
longitudes de onda azul-violeta y rojo y refleja el color verde, por lo tanto, los resultados
obtenidos sí cumplen con esta teoría, ya que una vez se halló el promedio se pudo identificar que
el color que se expresó fue el verde amarillento, estableciendo finalmente que la longitud de
onda verde no logra absorberla, reflejándola y dándole así el color verde a la planta.

Como el pigmento presente en las hojas del árbol Tilia platyphyllos es la clorofila b, y su
función principal es aumentar la absorción de la clorofila a, ésta se destaca como una de las
mejores clorofilas en procesos fotosintéticos, puesto que tiene el porcentaje más alto de
absorbancia en dos rangos de longitudes de onda distintos; esto lo podemos evidenciar teniendo
en cuenta el gráfico de Celeste, Melina; Minaglia Crettaz (2018), en donde el primer rango es el
más destacado ya que posee el mayor nivel de absorción a longitudes de onda entre 400 y 500
nanómetros, es decir, absorbe longitudes de onda de violeta y azul, y el segundo rango posee un
menor nivel de absorción en donde aún es posible la realización de fotosíntesis, la cual se
encuentra entre las longitudes de onda de 630 y 680 nanómetros aproximadamente, es decir,
absorbe longitudes de onda entre los colores anaranjado y rojo tal como se mencionó
anteriormente.

9. EVALUACIÓN
Durante el proyecto se obtuvo distintos aspectos positivos y otros por mejorar; principalmente
se puede decir que hubo un acceso eficaz a distintos materiales que nos facilitaron la obtención
de datos para poder hallar los pigmentos fotosintéticos de la hoja vegetal proveniente del árbol
Tilia platyphyllos, como la báscula analítica y las pipetas que nos ayudaron a unas medidas más
exactas, o los tubos de ensayo, papel filtro y acetona que nos ayudaron con la experimentación.
Además, se nos facilitó la elaboración de las tablas y gráficas en programas digitales como Excel
y Hojas de Cálculo. Asimismo, cada estudiante tuvo a su disposición el kit de laboratorio, para
así tomar los datos en grupo bajo las condiciones de bioseguridad. También la innovación del
uso de estos instrumentos, nos permitió sacar provecho de ellos, puesto que aprendimos a
utilizarlos, y de cierto modo podría ser mucho más útil para futuros proyectos o investigaciones.
Por otro lado, hay aspectos a tener en cuenta como el árbol del cual se sacó la hoja, puesto que
probablemente puedan tener diferentes pigmentaciones, y del mismo modo, hay que tener en
cuenta el tipo de papel usado, ya que el papel CCF arroja mejores resultados y más claros, sin
embargo, también es un aspecto positivo, dado que en caso de volver a entrar en confinamiento
ya tendríamos la posibilidad de realizar el experimento con elementos caseros.
Algunos aspectos por mejorar son los porcentajes de error en las medidas tomadas con la
pipeta, ya que son valores pequeños, pero que pueden llegar a afectar en cierta medida a los
resultados, más aún en estos tipos de experimentos donde la cantidad de acetona puede ser de
gran incidencia. También, otra posible fuente de error es el tiempo en que se tardó para sacar
cada papel filtro de los tubos de ensayo, dejando estos dentro de la mezcla más del tiempo
asignado lo cual posiblemente pudo haber modificado los resultados.

10. CONCLUSIONES

Se puede concluir que la cromatografía es muy útil para separar e identificar los pigmentos
fotosintéticos de la hoja del Árbol Tilia platyphyllos, debido a que por medio del cálculo de las
distancias del desplazamiento de la fase móvil (solvente acetona) y del pigmento, junto con el
valor de R f y el promedio se pudo determinar cuál era el pigmento fotosintético mayor presente
en la hoja del Tilia platyphyllos, dándonos como resultado la clorofila b.

También, se puede concluir que la clorofila b posee una alta tasa de fotosíntesis gracias a su
gran capacidad de absorbancia, puesto que sus longitudes de onda entre 400 y 500 nanómetros,
y, entre 630 y 680 nanómetros poseen un alto porcentaje de absorción. Asimismo, el color
expresado por este pigmento es el verde, debido a que absorbe longitudes de onda azules,
violetas, naranjas y rojas, dando finalmente como resultado el tono verde característico de la hoja
del Tilia platyphyllos.

11. REFERENCIAS
● Allott Andrew, Mindorff David, Azcue José, (2015), Reino Unido, “Biología, libro del
alumno, Programa del diploma del IB Oxford”, Página 140.
● Concepto (2021), “Cromatografía”. Tomado de: https://concepto.de/cromatografia/
● Ecología verde, 8 abr 2020, Qué es la clorofila Función, Tipos y más Tomado de:
https://youtu.be/_FWeNKQLLD8
● Khan Academy. (2021), “Luz y pigmentos fotosintéticos”. Tomado de:
https://es.khanacademy.org/science/biology/photosynthesis-in-plants/the-light-dependent-
reactions-of-photosynthesis/a/light-and-photosynthetic-pigments#:~:text=Hay%20cinco
%20tipos%20principales%20de,son%20los%20principales%20pigmentos%20fotosint
%C3%A9ticos.
● María Belén Acosta (06.05.2021) “Pigmentos fotosintéticos: qué son, tipos y ejemplos”.
Tomado de: https://www.ecologiaverde.com/pigmentos-fotosinteticos-que-son-tipos-y-
ejemplos-3299.html
● Melina Celeste Crettaz Minaglia (2018). UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA
FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS DEPARTAMENTO DE CIENCIAS
BIOLÓGICA. “ESTUDIO DEL CRECIMIENTO DE MICROCYSTIS AERUGINOSA Y DE
LA PRODUCCIÓN DE MICROCYSTINA EN CULTIVO DE LABORATORIO”. Tomado de:
https://ri.conicet.gov.ar/bitstream/handle/11336/83223/CONICET_Digital_Nro.06be5b5d-
7b3b-4960-9aba-3982bebee388_A.pdf?sequence=2&isAllowed=y
● Universidad Nacional Autónoma de México, 2007, Facultad de Química, Química
Analítica Instrumental II, “Técnicas cromatográficas”. Tomado de:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos_6700.pdf
RÚBRICA DE EVALUACIÓN INTERNA DEL BACHILLERATO INTERNACIONAL

CRITERIO ASPECTO PARA PUNTAJE NIVEL COMENTARIO

EVALUAR OBTENIDO OTORGAD
O

COMPR Relación con la

OMISO exploración.
PERSON Elección de
AL pregunta de
(0-2) investigación o
tema.

Diseño,
implementación o
presentación de la
investigación

EXPLOR Identificación del

ACIÓN tema y
(0-6) planteamiento de
la pregunta de
investigación

Información
de referencia
para la
pregunta de
investigación

Pertinencia de la
metodología para
 abordar la
pregunta de la
investigación.

Aspectos éticos,
medioambientales
y de seguridad del
informe escrito

ANÁLISI Pertinencia de los

S datos brutos
(0-6) presentados.

Precisión del
procesamiento de
datos

Consideración de
las incertidumbres
en el análisis

Relación de la
Interpretación de los
datos procesados y
la conclusión

EVALUA Pertinencia de la
CION conclusión con
(0-6) respecto a la
pregunta de
investigación.

Comparación de
la conclusión
con el contexto
científico
 aceptado.

Discusión de las
limitaciones de los
datos, fuentes de
error y de los puntos
fuertes y débiles de
la investigación.

Sugerencias para la
mejora y la
ampliación de la
investigación.

COMUN Presentación de la
ICACIÓ investigación.
N Claridad y estructura
(0-4) del informe.

Comprensión del
objetivo, proceso
y resultados de
la investigación.

Errores en el uso
de convenciones y
terminología
específica de la
asignatura.

TOTAL /24